復(fù)旦大學(xué)開題報告演示版

大學(xué)2003級碩士研究生開題報告研究生導(dǎo)師

TherapeuticEffectsofCapsuleTONGBIonHumanKneeOsteoarthritisandItsInfluenceonthemRNAExpressionOfChondrocytesTypeIICollageninARatModel

痛痹膠囊對大鼠膝軟骨細胞Ⅱ型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響及治療膝骨關(guān)節(jié)炎臨床療效觀察

課題名稱研究目的與意義文獻綜述選題依據(jù)科研假說與技術(shù)構(gòu)思研究方法和技術(shù)路線指導(dǎo)人員計劃進度研究基礎(chǔ)預(yù)期成果目錄文獻資料2023/2/44研究目的證明痛痹膠囊通過整體調(diào)節(jié)作用能夠上調(diào)軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA的表達、調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)膠原的生成與降解的平衡、促進軟骨細胞增殖

證明痛痹膠囊的軟骨保護劑樣作用

通過隨機、平行、對照臨床觀察進一步證明其臨床療效

2023/2/45骨關(guān)節(jié)炎定義骨關(guān)節(jié)炎是以進行性關(guān)節(jié)透明軟骨變性、破壞及喪失，關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨邊緣骨贅形成為特征的骨關(guān)節(jié)病變。骨關(guān)節(jié)炎的最新定義：在力學(xué)和生物學(xué)因素共同作用下導(dǎo)致軟骨細胞、細胞外基質(zhì)以及軟骨下骨三者降解和合成正常耦聯(lián)失衡的結(jié)果，并伴有不同程度的滑膜炎癥。KelleyWN，RuddyS，HarrisED，etal.TextbookofRheumatology.15thed.Philadelphia：Saunders，1997，1369~13822023/2/46國內(nèi)外研究現(xiàn)狀、水平和發(fā)展趨勢

最新流行病學(xué)統(tǒng)計發(fā)病機制研究進展治療進展中醫(yī)藥研究進展討論2023/2/47最新流行病學(xué)統(tǒng)計

全世界大約有1.9億骨性關(guān)節(jié)炎患者據(jù)世界衛(wèi)生組織一份調(diào)查表明，50歲以上的人群中，各種骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率占60％~70％我國患有OA的人數(shù)占總?cè)丝诘?%美國，總?cè)丝谥械?5%患關(guān)節(jié)炎，其中43%為ＯＡ，達1600萬高發(fā)病率骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制研究進展透明軟骨軟骨細胞軟骨基質(zhì)膠原蛋白聚糖金屬蛋白酶（MMP）IL-1TNF-aNO…….破壞軟骨細胞基質(zhì)膠原蛋白聚糖增齡磨損創(chuàng)傷生化代謝異常免疫紊亂遺傳變異等

軟骨降解酶（MMPs）細胞因子(IL-1,TNF-,……)等分解合成2023/2/411膠原蛋白

目前能從正常成年關(guān)節(jié)軟骨和軟骨細胞培養(yǎng)基中提取的膠原有5種：Ⅱ型膠原、Ⅵ膠原、Ⅸ型膠原、Ⅹ型膠原、Ⅺ型膠原

結(jié)構(gòu)圖2023/2/412膠原生理各型膠原在軟骨內(nèi)的排列高度有序，表現(xiàn)在Ⅱ型膠原、Ⅸ型膠原、Ⅺ型膠原組成的軟骨內(nèi)纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)該網(wǎng)架結(jié)構(gòu)構(gòu)成軟骨的骨架，如遭到破壞，軟骨就不能維持正常的結(jié)構(gòu)和功能Ⅱ型膠原構(gòu)成纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)中的主體生理狀況下，軟骨基質(zhì)膠原的合成和降解維持動態(tài)平衡。膠原的合成分細胞內(nèi)和細胞外兩個階段，受軟骨細胞調(diào)控。2023/2/413OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化輕度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，軟骨細胞代謝活躍，合成代謝增強，Ⅱ型膠原合成增加，同時伴有Ⅲ型膠原增加；中度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，Ⅱ型膠原在中間層、深層的合成和變性增強，以合成為主；重度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，Ⅱ型膠原變性、溶解的速度明顯大于合成，使得Ⅱ型膠原纖維的數(shù)量明顯減少，主要位于單個和簇聚軟骨細胞周圍2023/2/414OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化Ⅱ型膠原總量丟失Ⅱ型膠原表達的改變2023/2/415參與OA發(fā)病的其他病理機制

軟骨降解酶細胞因子自由基免疫紊亂骨內(nèi)高壓2023/2/416治療進展——非藥物治療(1)病人教育；(2)自我調(diào)理；(3)通過電話聯(lián)系以得到社會支持；(4)減輕體重(如果超重的話)；(5)戶外鍛煉；(6)物理治療；(7)增加關(guān)節(jié)活動范圍的鍛煉；(8)增強肌力的鍛煉；(9)行走的輔助裝置；(10)穿刺抽液；(11)選擇合適的鞋襪；(12)鞋底外側(cè)加墊(對膝內(nèi)翻者)；(13)使用支架；(14)職業(yè)療法；(15)保護關(guān)節(jié)和保存能量；(16)使用日常生活活動的輔助裝置。AmericancollegeofRheumatologySubcommitteeonOsteoarthritis.Recommendationsforthemedicialmanagementofosteoarthritisofthehehipandknee.ArthritisRheum，2000，43(9)：1905～1915.

2023/2/417治療進展——藥物治療控制癥狀的藥物改善病情藥物及軟骨保護劑晚近，治療骨關(guān)節(jié)炎的策略主要集中在：金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）、啟動軟骨細胞修復(fù)和軟骨生長的刺激劑、細胞因子抑制劑、NO合成酶抑制劑等。2023/2/418控制癥狀的藥物對乙酰氨基酚——國外推薦首選非甾體抗炎藥（NSAIDs）——值得關(guān)注的是，一些研究發(fā)現(xiàn)某些NSAIDs藥如阿司匹林、水楊酸、保泰松、吲哚美辛和萘普生等對關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)蛋白聚糖合成有抑制作用，加速軟骨退化，不利于OA，故不宜選用，至少不應(yīng)長期使用2023/2/419改善病情藥物及軟骨保護劑硫酸氨基葡萄糖（維骨力）——許多短程和長程隨機雙盲對照觀察GS治療膝OA的結(jié)果都提示，該產(chǎn)品既能抗炎止痛，又有延緩膝OA發(fā)展的作用。被認為是第一個改變OA病情的藥物。其他——SOD（自由基）、四環(huán)素族抗生素（軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物）、葡糖胺聚糖（外源性軟骨基質(zhì)成分）、S－腺苷基蛋氨酸（促進蛋白聚糖合成及軟骨細胞分化）、阿侖磷酸鹽（固邦，雙膦酸鹽類，抑制軟骨及骨質(zhì)吸收）、合成基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(U－24522)、轉(zhuǎn)化生長因子B、胰島素樣生長因子－2（促進軟骨修復(fù)的細胞固子）、VitC、VitK（保護軟骨）2023/2/420選題依據(jù)中醫(yī)經(jīng)典醫(yī)著記載的治療骨痹的效方甚多，《備急千金要方》中的“獨活寄生湯”具有益肝腎、補氣血、祛風(fēng)濕、止痹痛之功，頗切合骨關(guān)節(jié)炎的病機。痛痹膠囊是對千古名方獨活寄生湯進行化裁，在補益肝腎的基礎(chǔ)上重用活血化瘀，兼以祛風(fēng)除濕、加用化痰、滋陰之品。2023/2/421選題依據(jù)前期臨床研究表明:20例治療組與10例維骨力對照組進行比較，痛痹膠囊能明顯減少骨關(guān)節(jié)炎者疼痛、腫脹、壓痛程度，療效較好，治療組有效率達95%，且無其他不良反應(yīng)。動物實驗證明:痛痹膠囊對致炎大鼠關(guān)節(jié)炎模型具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并可改善急性血瘀大鼠的血液流變學(xué)，具有一定的活血化瘀作用；對老年鼠血液SOD和MDA含量的影響實驗表明痛痹膠囊具有較好的抗氧化作用2023/2/422

課題研究內(nèi)容實驗研究臨床研究理論研究2023/2/423痛痹膠囊血清對體外培養(yǎng)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細胞Ⅱ型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響實驗研究

痛痹膠囊血清藥理學(xué)研究

軟骨細胞培養(yǎng)

軟骨細胞損傷模型的制備

痛痹膠囊血清對軟骨細胞增殖的影響痛痹膠囊血清對軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達的影響

2023/2/424痛痹膠囊血清對軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達的影響

引物設(shè)計與合成總RNA的提取RNA的濃度測定總RNA逆轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNAPCR擴增1％瓊脂糖凝膠電泳2023/2/425臨床研究診斷標準中醫(yī)癥候標準病情進展分期病情輕重分級納入標準隨機分組治療方法觀察指標療效判定標準統(tǒng)計學(xué)處理2023/2/426病例數(shù)計算

采用樣本含量計算軟件NCSS2002進行

根據(jù)文獻的資料及前期的臨床工作，4周治療后WOMAC指數(shù)下降16，標準差在20.5為標準療效評估，每組30例患者的樣本，power為80%，α為0.05是已足夠能比較出痛痹膠囊組和對照藥組間的統(tǒng)計學(xué)差異

理論上計算最少每組30例的樣本量已可以達到80%的統(tǒng)計權(quán)力

2023/2/427盲法設(shè)計

試驗設(shè)計為隨機、西藥軟骨保護劑（維骨力，意大利羅達藥廠）對照，因為西藥對照藥維骨力如做成與中藥對照同劑型及外觀、用量，則存在生物利用度差異，難以雙盲。但在負責(zé)

WOMAC評估的醫(yī)生中仍進行盲法設(shè)計。

2023/2/428隨機化與隨機數(shù)字隱藏

將全部入選患者按就診順序編號隨機數(shù)字來自NCSS2004專業(yè)軟件，采用區(qū)組隨機化分組方法采用“信封法”將隨機化分配序列進行隱藏

2023/2/429相關(guān)要點說明

根據(jù)OA治療周期和相關(guān)國際臨床試驗（CLASS和VIGOR試驗），擬定本次臨床研究療程為4周?！霺ilversteinFE,FaichG,GoldsteinJL,etal.Gastrointestinaltoxicitywithcelecoxibvsnonsteroidalanti-inflammatorydrugsforosteoarthritisandrheumatoidarthritis:theCLASSstudy:arandomizedcontrolledtrial.JAMA.2000;284:1247-1255.§BombardierC,LaineL,ReicinA,etal.Comparisonofuppergastrointestinaltoxicityofrofecoxibandnaproxeninpatientswithrheumatoidarthritis.VIGORstudygroup.NEnglJMed.2000;343:1520-1528.目前治療OA替代醫(yī)學(xué)類藥物停藥后追蹤的報道較少，且缺乏與西藥對比的數(shù)據(jù)，因此本研究有理由在停藥后設(shè)置2周的追蹤時間

2023/2/430觀察指標和方法

★安全性觀察①一般體檢項目血、尿、便常規(guī)化驗，試驗前后各查一次。肝、腎功能檢查，試驗前后各查一次。②不良反應(yīng)?！锆熜杂^測——相關(guān)癥狀、體征，VAS疼痛指數(shù)，WOMAT關(guān)節(jié)炎指數(shù)，起效時間。2023/2/431可行性分析

本課題是在大量查閱國際國內(nèi)最新相關(guān)文獻資料，并結(jié)合相關(guān)的前期工作的基礎(chǔ)上，采用了多種學(xué)科、多種技術(shù)相結(jié)合的綜合性研究方法，從而保證了立題的新穎性、科學(xué)性和可靠性。理論上依據(jù)充分本課題實驗中所需應(yīng)用的細胞培養(yǎng)、引物設(shè)計、RT－PCR、血清藥理學(xué)等先進技術(shù)，通過前期實驗，均能熟練掌握。完全具備完成本研究的技術(shù)力量。2023/2/432計劃進度第一階段：（2005.5～2005.6）準備階段，調(diào)研及資料檢索。按課題設(shè)計首先申購實驗用各種試劑（盒）。準備臨床病例觀察表。第二階段：（2005.6～2006.3）按照課題設(shè)計，完成全部實驗及病例臨床觀察工作。第三階段：（2006.3-2006.5）資料匯總、總結(jié)、處理數(shù)據(jù)、分析與研究成果撰寫論文。2023/2/433預(yù)期研究成果

理論上系統(tǒng)總結(jié)骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)文獻、病因病機、治法方藥，提出骨痹發(fā)病“腎虛血瘀”新見解，發(fā)展中醫(yī)理論，為痛痹膠囊防治骨關(guān)節(jié)炎提供