高效液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題分析與對(duì)策

高效液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題分析與對(duì)策流淌相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。A、峰拖尾原因解決方法1、篩板堵塞a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷填充色譜柱a、使用更長(zhǎng)的色譜柱b、轉(zhuǎn)變流淌相或更換色譜柱4PHPHPH5、樣品與填料外表的溶化點(diǎn)發(fā)生反響ab、更改色譜柱B、峰前延原因解決方法上升柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)使用流淌相作為樣品溶劑3、樣品過(guò)載降低樣品含量A1、A2C、峰分叉原因解決方法1、保護(hù)柱或分析柱污染問(wèn)題仍舊存在，入口可能被堵塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流淌相轉(zhuǎn)變樣品溶劑。假設(shè)可能實(shí)行流淌相作為樣品溶劑。原因解決方法1、樣品過(guò)載E、早出的峰變形原因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)a、削減進(jìn)樣體積b、運(yùn)用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解決方法1、柱外效應(yīng)a、調(diào)整系統(tǒng)連接〔使用更短、內(nèi)徑更小的管路〕b、使用小體積的流通池G、K’增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)峻原因解決方法1、二級(jí)保存效應(yīng)，反相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕劑〔或離子化樣品〕d、更換一支柱子2、二級(jí)保存效應(yīng)，正相模式a、參加三乙胺〔或堿性樣品〕b、參加乙酸〔或酸性樣品〕官能團(tuán)化合物〕d、試用另一種方法3、二級(jí)保存效應(yīng)，離子對(duì)〔或堿性樣品〕原因

、參加鹽或緩沖、參加水〔或多解決方法1、緩沖不適宜a50-100mM的緩沖液bPkaPHI、額外的峰原因解決方法正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、檢查流淌相是否純潔b、使用流淌相作為樣品溶劑c、削減進(jìn)樣體積J、保存時(shí)間波動(dòng)原因解決方法調(diào)好柱溫2、流淌相組分變化防止變化〔蒸發(fā)、反響等〕3、色譜柱沒(méi)有平衡在每一次運(yùn)行之前賜予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保存時(shí)間不斷變化原因解決方法1、流速變化重設(shè)定流速?gòu)谋弥谐馀?、流淌相選擇不恰當(dāng)a、更換適宜的流淌相b、選擇適宜的混合流淌相L、基線漂移原因解決方法〕掌握好柱子和流淌相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2〔〕使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N〔不要用鹽酸〕〕取出堵塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流淌相配比不當(dāng)或流速變化更改配比或流速。為避開(kāi)這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流淌相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流淌相發(fā)生變化時(shí)用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)展沖洗，更改流淌相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的流淌相對(duì)柱子進(jìn)展沖洗。7、流淌相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成HPLC8、樣品中有強(qiáng)保存的物質(zhì)〔高K’值〕以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步上升的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。重設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用的流淌相。將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸取波特長(zhǎng)M、基線噪音〔規(guī)章的〕原因解決方法1、在流淌相、檢測(cè)器或泵中有空氣流淌相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液音。如有必要，更換泵密封。3、流淌相混合不完全用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑〕削減差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備6、泵振動(dòng)在系統(tǒng)中參加脈沖阻尼器〔不規(guī)章的〕原因解決方法如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流淌相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成檢查流淌相的組成。選擇互溶的流淌相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題斷開(kāi)檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)整器〕1N〔不能用磷酸〕清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量缺乏更換燈更換色譜柱10、流淌相混合不均勻或混合器工作不正常修理或更換混合器，在流淌相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置原因解決方法1、流淌相組成變化2、流淌相流速太低調(diào)整流速3、漏液〔特別是在柱子和檢測(cè)器之間〕section3音。假設(shè)必要更換密封。調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過(guò)載bc、柱子與檢測(cè)器之間的d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)5、a、小體積進(jìn)樣〔例如：、削減響應(yīng)時(shí)間或、使用內(nèi)徑為d、削減響應(yīng)時(shí)間增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低柱子。9、柱入口塌陷翻開(kāi)柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子選擇其它類型的色譜柱以改善分別效果11、柱溫過(guò)低75℃12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分別度降低原因解決方法〕重配置流淌相2、保護(hù)柱或分析柱堵塞圖假設(shè)問(wèn)題仍舊存在色譜柱可能被強(qiáng)保存的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。假設(shè)問(wèn)題仍舊存在，進(jìn)口可能堵塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、全部的峰面積都太小原因解決方法削減衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)增大進(jìn)樣量使用正確的連接原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低實(shí)行較大的衰減削減進(jìn)樣量正確連接記錄儀診狀可能的緣由解決方法(一)保存時(shí)間變化柱溫變化柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱等度與梯度間未能充分平衡至少用10緩沖液容量不夠用柱污染每天沖洗柱柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)整流淌相柱快到達(dá)壽命承受保護(hù)柱(二)保存時(shí)間縮短流速增加檢查泵,重設(shè)定流速樣品超載降低樣品量鍵合相流失流淌相PH3~7.5流淌相組成變化防止流淌相蒸發(fā)或沉淀溫度增加柱恒溫(三)保存時(shí)間延長(zhǎng)流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排解泵內(nèi)氣泡硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流淌相改性劑,如加三乙胺,或承受堿至鈍化柱鍵合相流失同前(二)3流淌相組成變化同前(二)4溫度降低同前(二)5(四)消滅肩峰或分叉15%樣品溶劑過(guò)強(qiáng)承受較弱的樣品溶劑柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,承受較弱腐蝕性條件柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子(五)鬼峰進(jìn)樣閥剩余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗樣品中未知物處理樣品柱未平衡重平衡柱,用流淌相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天配,用抗氧化劑HPLC(六)基線噪聲氣泡(鋒利峰)流淌相脫氣,加柱后背壓HPLC檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲更換氘燈電干擾(偶然噪聲)承受穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)檢測(cè)器中有氣泡流淌相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾柱超載降低樣品量,增加柱直徑承受較高容量的固定相峰干擾清潔樣品,調(diào)整流淌相PH鈍化樣品同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)3死體積或柱外體積過(guò)大 連接點(diǎn)降至最低,對(duì)全部連接點(diǎn)作適宜調(diào)整,盡可能承受細(xì)內(nèi)徑的連接收柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,承受保護(hù)柱(八)峰展寬進(jìn)樣體積過(guò)大同(四)1在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低集中1010%流淌相粘度過(guò)高增加柱溫,承受低粘度流淌相檢測(cè)池體積過(guò)大用小體積池,卸下熱交換器保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫柱外體積過(guò)大將連接收徑和連接收長(zhǎng)度降至最小樣品過(guò)載進(jìn)小濃度小體積樣品高效液相色譜常見(jiàn)故障的判定及解決方法總匯〔二〕12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、分別度降低原因解決方法1、流淌相污染或變質(zhì)〔引起保存時(shí)間變化〕1、重配置流淌相2、保護(hù)柱或分析柱堵塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)展分析。假設(shè)必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱?？谔幍暮Y板或更換色譜柱。Q、全部的峰面積都太小原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高1、削減衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、全部的峰面積都太大原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低1、實(shí)行較大的衰減2、進(jìn)樣過(guò)多2、削減進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難原因解決方法1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)1、重安裝2、定量環(huán)堵塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染3、清洗或更換進(jìn)樣器4、管路堵塞4、清洗或更換管路C、自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)原因解決方法1、無(wú)壓力〔或電源〕1、供給恰當(dāng)?shù)膲毫Α搽娫础?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)3、重安裝D、自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題原因解決方法1、堵塞1、清洗或更換堵塞部件2、機(jī)械故障2、見(jiàn)隨機(jī)修理手冊(cè)3、掌握器故障3、修理或更換掌握器由氣味、景象和聲音可以覺(jué)察的問(wèn)題〔除了味覺(jué)味。大局部的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1section32、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過(guò)熱1、a、檢查并調(diào)整通風(fēng)設(shè)施b、檢查并調(diào)整溫度設(shè)定c、關(guān)掉儀器，查找修理手冊(cè)C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1section22、柱溫箱問(wèn)題2、ab、參照用戶手冊(cè)3、檢測(cè)器燈失效3、更換燈D、燈警告原因解決方法1、壓力超出極限值1、ab、檢查并調(diào)整極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見(jiàn)用戶手冊(cè)E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見(jiàn)用戶手冊(cè)F、刺耳的短音或長(zhǎng)音原因解決方法1、軸承失效1、見(jiàn)用戶手冊(cè)2、潤(rùn)滑不夠2、進(jìn)展恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑3、機(jī)械故障3、見(jiàn)用戶手冊(cè)由氣味、景象和聲音可以覺(jué)察的問(wèn)題〔除了味覺(jué)味。大局部的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到。A、溶劑的氣味原因解決方法1、漏液1section32、濺出2、a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原因解決方法1、儀器過(guò)熱1、a、檢查并調(diào)整通風(fēng)設(shè)施b、檢查并調(diào)整溫度設(shè)定c、關(guān)掉儀器，查找修理手冊(cè)C、讀數(shù)不正常原因解決方法1、壓力不正常1section22、柱溫箱問(wèn)題2、ab、參照用戶手冊(cè)3、檢測(cè)器燈失效3、更換燈D、燈警告原因解決方法1、壓力超出極限值1、ab、檢查并調(diào)整極限值的設(shè)定2、其它警示燈2、見(jiàn)用戶手冊(cè)E、警告音原因解決方法1、溶劑泄漏/濺出1、找到并解決2、其它警告音2、見(jiàn)用戶手冊(cè)F、刺耳的短音或長(zhǎng)音原因解決方法1、軸承失效1、見(jiàn)用戶手冊(cè)2、潤(rùn)滑不夠2、進(jìn)展恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑3、機(jī)械故障3、見(jiàn)用戶手冊(cè)常見(jiàn)故障及日常維護(hù)您更多的維護(hù)方法。溶劑瓶問(wèn)題維護(hù)1、進(jìn)口篩板堵塞1、a、更換〔3-6〕b、過(guò)濾流淌相，0.5u2、氣泡2、流淌相脫氣泵問(wèn)題維護(hù)1、氣泡1、流淌相脫氣、泵密封損壞3、單向閥損壞3、過(guò)濾流淌相，運(yùn)用在線過(guò)濾，預(yù)備備用單向閥進(jìn)樣閥問(wèn)