第3節(jié)、動物的克隆

一、動物細胞的培養(yǎng)和克隆形成1、廣義的動物組織培養(yǎng)(組培)包括：2、動物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展：1885年，雞神經(jīng)板在生理鹽水中培養(yǎng)成活。1903年，皮膚及白細胞培養(yǎng)于腹水及血清中，存活1個月。1907年，美，蛙胚神經(jīng)管培養(yǎng)在蛙淋巴液中，觀察到細胞的阿米巴運動，創(chuàng)立了懸浮培養(yǎng)法。細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。3、動物細胞培養(yǎng)過程★動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（氨基酸、無機鹽、維生素、葡萄糖、動物血清等）3、溫度和pH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：CO2培養(yǎng)箱保證細胞順利的生長增殖動物細胞的培養(yǎng)過程

幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)單個細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，細胞增殖能力強成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液細胞系、細胞株細胞增殖去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？細胞懸浮液轉(zhuǎn)入特殊培養(yǎng)液中培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞系（可傳代的細胞）連續(xù)細胞系：有限細胞系：二倍體細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系（遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，具不死性、致瘤性）細胞株：從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。4、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)：5、細胞系、細胞株：

細胞系是泛指可傳代的細胞，細胞株是具有特殊性質(zhì)的細胞系。通過一定的選擇或純化后，細胞株一般具有恒定的染色體組型、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性等。連續(xù)細胞系有限細胞系致瘤性不死性連續(xù)細胞株有限細胞株海拉(HeLa)細胞系電鏡照片細胞

懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖(遺傳物質(zhì)改變)(人教版)植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)理論基礎(chǔ)培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的獲得細胞或

細胞分泌蛋白細胞的全能性細胞株、細胞系植物體快速繁殖、培育無病毒植株等葡萄糖、

動物血清蔗糖、

植物激素液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細胞增殖6、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾

素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質(zhì)。（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，

為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。7、克隆培養(yǎng)法1、克隆培養(yǎng)法概念：2、特征：3、基本要求：遺傳性狀均一、表現(xiàn)性狀相似。便于研究。必須保證分離出來的細胞是一個而不是多個。把一個細胞從群體中分離出來培養(yǎng)，使之繁殖成一個新的細胞群體的技術(shù)。（克隆培養(yǎng)與群體培養(yǎng)是一個等位概念）7、克隆培養(yǎng)法4、提高克隆形成率的措施：5、用途：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加血清、激素刺激、CO2培養(yǎng)箱、PH值等如從普通細胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細胞系。二、動物的細胞融合技術(shù)及其應(yīng)用誘導(dǎo)方式物理法：離心、振蕩、電融合技術(shù)化學(xué)法：聚乙二醇生物法：滅活的仙臺病毒1、細胞融合與細胞雜交：滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通，細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞2.雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備：(1).傳統(tǒng)抗體生產(chǎn)方法：抗原動物體內(nèi)抗體刺激效應(yīng)B(抗體不純)篩選單一效應(yīng)B細胞不能增值，產(chǎn)生大量抗體特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏。(2).單克隆抗體制備過程：設(shè)計方案：一個B淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞雜交瘤細胞+化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。特性：2.制備過程：（1）給小鼠抗原注射的目的是什么？誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)的特異性免疫應(yīng)答，分化出漿細胞。（2）兩次篩選的目的相同嗎？不同，第一次篩選是為了篩選雜交瘤細胞，第二次篩選是做抗體檢驗，篩選產(chǎn)生特異性抗體的細胞。（3）最后培養(yǎng)有幾種方案？兩種，體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)。三、動物的克隆繁殖1、動物細胞全能性的表現(xiàn)程度：低等動物細胞的全能性一般比較容易體現(xiàn)。癌細胞仍能逆轉(zhuǎn)為正常細胞。無論是分化還是癌變，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性并沒有改變。2、動物難以克隆的根本原因：基因表達的調(diào)控使得細胞中合成了專一的蛋白質(zhì)。一類基因是維持生存的；另一類基因隨著組織器官和發(fā)育階段不同而選擇性表達。如：哺乳動物的紅細胞只

有少量的線粒體。3、細胞核移植實驗和動物的克隆繁殖：胚胎細胞核的移植成功率遠高于成體細胞。綿羊“多莉”克隆過程：克隆羊成功的分子細胞生物學(xué)機理：體細胞克隆成功的意義：1、證明了高度分化的細胞也可以回復(fù)到類似受

精卵時期的功能。2、證明了細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用。應(yīng)用：為遺傳疾病的治療、優(yōu)良品種的培育等提供了重要途徑；對瀕危動物的保存也有重要意義。重組移核細胞丟失了源于乳腺細胞的調(diào)節(jié)蛋白，經(jīng)過三次分裂后，原乳腺細胞的調(diào)節(jié)蛋白便全部被卵細胞質(zhì)中的蛋白因子替換了，因此核DNA被重新編排，細胞開始表達自己的基因。細胞工程常用的技術(shù)手