版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)專題2微生物的培養(yǎng)與應用一.研究思路㈠.篩選菌株:實驗室中微生物的篩選原理:人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等),同時抑制或阻止其他微生物生長。要分離一種微生物,必須根據(jù)該微生物的特點,包括營養(yǎng)、生理、生長條件等,采用選擇培養(yǎng)分離的方法,或抑制使大多數(shù)微生物不能生長,或造成有利于該菌生長的環(huán)境,經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后使該菌在群落中的數(shù)量上升,再通過平板稀釋等方法對它進行純培養(yǎng)分離。一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O4、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌2、實驗室中微生物的篩選原理:人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等),同時抑制或阻止其他微生物生長。什么是選擇性培養(yǎng)基?15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基:①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類?固體培養(yǎng)基㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目:1.直接計數(shù)法:這種方法是利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。此法的缺點是不能區(qū)分死菌和活菌。每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)2.間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法):⑴原理:在稀釋度足夠高時,微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的,即一個菌落代表原先的一個單細胞。⑵常用方法:稀釋涂布平板法。⑶注意事項每克樣品中的菌落數(shù)=(C÷V)×M其中,C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)。注意事項①為了保證結果準確,一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中,經(jīng)涂布,培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此,統(tǒng)計結果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。④涂布平板法所選擇倒平板的稀釋度很重要,一般以三個稀釋度中的第二個稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為最好。除上述兩種常用的計數(shù)方法外,還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數(shù)很低時,可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色,并經(jīng)處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數(shù);比濁法原理是在一定范圍內(nèi),菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可以借助于分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi),否則不準確。微生物計數(shù)法,發(fā)展迅速,現(xiàn)有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。㈢.設置對照:對照實驗是指除了被測試條件以外,其他條件都相同的實驗,其作用是比照實驗組,排除任何其他可能原因的干擾,證明確實是所測試和條件引起相應的結果。設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響,提高實驗結果的可信度。P22旁欄思考題想一想,如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?答:統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),最好能統(tǒng)計3個平板,計算出平板菌落數(shù)的平均值,然后按課本旁欄的公式進行計算。
P23討論問題A同學的結果與其他同學不同,可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同,二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個原因,可以通過實驗來證明。實驗方案有兩種。一種方案是可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實驗,如果結果與A同學一致,則證明A無誤;如果結果不同,則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng),作為空白對照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出,實驗結果要有說服力,對照的設置是必不可少的。二.實驗的具體操作
㈠.土壤取樣
從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右,再取樣,將樣品裝入事先準備好的信封中?!羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。㈡.制備培養(yǎng)基:制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。㈢.樣品的稀釋:◆應在火焰旁稱取土壤10g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中,塞好棉塞。◆在稀釋土壤溶液的過程中,每一步都要在火焰旁進行?!舴蛛x不同的微生物采用不同的稀釋度,其原因是不同微生物在土壤中含量不同,其目的是保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適于計數(shù)的平板。細菌稀釋度為104、105、106,放線菌稀釋度為103、104、105,真菌稀釋度為102、103、104。P24旁欄思考題:為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度?測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量,選用的稀釋范圍相同嗎?答:這是因為土壤中各類微生物的數(shù)量(單位:株/kg)是不同的,例如在干旱土壤中的上層樣本中:好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2185萬,放線菌數(shù)約為477萬,霉菌數(shù)約為23.1萬。因此,為獲得不同類型的微生物,就需要按不同的稀釋度進行分離,同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等?!羧绻玫搅?個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進行菌落的計數(shù),如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大,表明試驗不精確,需要重新實驗。㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時,每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果,以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。
◆為了提高效率,在操作時更加有條不紊,應當事先規(guī)劃時間。培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌一般在30~37℃培養(yǎng)1~2d,放線菌一般在25~28℃培養(yǎng)5~7d,霉菌一般在25~28℃的溫度下培養(yǎng)3~4d。思考與討論在微生物培養(yǎng)過程中,為什么每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目?菌種鑒定的依據(jù)是什么?答:不同種類的微生物,往往需不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間,每隔24h統(tǒng)計1次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時記錄作為結果,這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。不同種類的細菌形成的菌落,在大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等方面具有一度的特征,菌落特征可作為菌種鑒定的重要依據(jù)。三.結果分析與評價1.通過對照實驗,若培養(yǎng)物有雜菌污染,菌落數(shù)偏高;若培養(yǎng)物混入其他氮源,則菌落形態(tài)多樣,菌落數(shù)偏高,難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示:選擇每個平板上長有30——300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)不能相差懸殊,如相差較大,表示實驗不精確。四.課外延伸在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后,如果PH升高,指示劑將變紅,說明該細菌能夠分解尿素。測定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細菌過濾器過濾后,將濾膜放到伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng),大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色,通過記述得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。
1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是()A.培養(yǎng)細菌B.培養(yǎng)真菌C.使需要的微生物大量繁殖D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀,與其他微生物加以區(qū)別2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3
C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素實踐訓練CD3.下列說法不正確的是()A.科學家從70-80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶B.統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 巖土抗滑樁課程設計
- 小說寫作指導班課程設計
- 幼兒園民俗課程設計
- 大二java課程設計理財系統(tǒng)
- 幼兒園動物過冬課程設計
- 射頻識別寫卡課程設計
- 微課程設計開發(fā)流程圖
- 幼兒游戲課程設計思路
- 托班愛護牙齒課程設計
- 學校特色美育課程設計
- 第2課+古代希臘羅馬【中職專用】《世界歷史》(高教版2023基礎模塊)
- 金屬屋面工程防水技術規(guī)程
- 《福建省安全生產(chǎn)條例》考試復習題庫45題(含答案)
- 人工智能增強戰(zhàn)略規(guī)劃
- 無機材料與功能化學
- 110kV變電站及110kV輸電線路運維投標技術方案(第一部分)
- 消防設施安全檢查表
- 餐廳用電安全承諾書
- 吉林省延邊州2023-2024學年高一上學期期末學業(yè)質(zhì)量檢測數(shù)學試題(解析版)
- 2024年全國兩會精神主要內(nèi)容
- 小學六年級數(shù)學上冊應用題100道(全)-及答案
評論
0/150
提交評論