實(shí)驗(yàn)4離體蛙心灌流

實(shí)驗(yàn)四蛙類離體心臟灌流

【目的】1.學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法2.觀察K+、Ca2+及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響?！驹怼?/p>

心肌具有自動(dòng)節(jié)律性、傳導(dǎo)性和興奮性三大特征。離體和脫離神經(jīng)支配的動(dòng)物心臟,保持在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中,在一定的時(shí)間內(nèi),仍然能夠有節(jié)律性地產(chǎn)生興奮和收縮。利用心肌細(xì)胞的這一特性,可用來(lái)制作離體心臟模型,通過(guò)灌流液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、電解質(zhì)等的變化,來(lái)觀察心肌能量代謝、相應(yīng)藥物、毒素和電解質(zhì)水平對(duì)心肌活動(dòng)的影響?！緝x器與設(shè)備】

蟾蜍，蛙用手術(shù)器械，蛙心套管，蛙心夾，張力換能器，RM6240，任氏液，2%CaCl2，2%KCl，0.01%腎上腺素，0.01%乙酰膽堿。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作步驟（一）離體蛙心灌流制作1.破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除心包膜和肝系膜（不要損傷血管）2.第1次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈3.第2次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈（遠(yuǎn)離靜脈竇）

4.第3次結(jié)扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線→在右肝靜脈（或左肝靜脈、或后腔靜脈）上用眼科剪剪一斜口→用加有任氏液的蛙心套管靜脈插管插入剪口→結(jié)扎固定（遠(yuǎn)離靜脈竇）

5.第4次結(jié)扎：在左主動(dòng)脈下穿線→在動(dòng)脈上剪一斜口→插入動(dòng)脈蛙心套管動(dòng)脈插管（不要插入動(dòng)脈球內(nèi)）→結(jié)扎固定6.在所有結(jié)扎處外緣遠(yuǎn)離心臟端剪除周圍血管，將與蛙心套管靜脈插管和動(dòng)脈插管的離體蛙心固定在鐵架臺(tái)上離體蛙心循環(huán)回路靜脈插管動(dòng)脈插管橡膠連接管蛙心灌流裝置安裝通道1受滴信號(hào)線RM6240記錄系統(tǒng)

點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“蛙心灌流”，系統(tǒng)進(jìn)入信號(hào)記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)：通道，時(shí)間常數(shù)：直流；濾波頻率10Hz；靈敏度3g，采樣頻率400Hz，掃描速度1s/div。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

1.描記正常的蛙心搏動(dòng)曲線，觀察心跳頻率，心室收縮和舒張程度。2.向套管的任氏液中加2%CaCl21滴，觀察并記錄心博曲線的變化。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入2滴2%KCl溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。4.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入1滴0.01%腎上腺素溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。5.當(dāng)心臟恢復(fù)正常時(shí)，向套管內(nèi)加入1滴0.01%乙酰膽堿溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。【注意事項(xiàng)】

每次換液時(shí)液面應(yīng)保持一定的高度。每次換液或滴加試劑時(shí)應(yīng)打標(biāo)記。每個(gè)試劑瓶的滴管不能混淆，以免沾污試劑，影響結(jié)果。心臟表面隨時(shí)滴加任氏液，以免干燥。待心跳恢復(fù)正常后進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。表1CaCl2、KCl、腎上腺素和乙酰膽堿對(duì)心肌收縮力、心輸出量和心率的影響實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目心收縮張力（克）心輸出量（滴/min）心率（次/min）對(duì)照1-2滴2%CaCl21-2滴2%KCl1-2滴10-4腎上腺素1-2滴10-4乙酰膽堿

Ca2+作用機(jī)制：1.使慢反應(yīng)自率細(xì)胞0期去極化加強(qiáng)，傳導(dǎo)性加強(qiáng)。2.慢反應(yīng)自率細(xì)胞4期自動(dòng)去極化速度加快，自率性加強(qiáng)。3.快反應(yīng)工作肌細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)Ca2+多，心肌收縮力加強(qiáng)。K+影響的機(jī)制：1.心肌收縮力下降細(xì)胞外液ca2+、K+存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制關(guān)系，K+濃度升高時(shí)，ca2+內(nèi)流減少，心肌細(xì)胞興奮一收縮耦聯(lián)作用減弱，心肌收縮力下降。2.心率減慢細(xì)胞外液K+濃度升高使膜對(duì)K+通透性升高，因此4相的K+外向電流增大，延緩了4相的凈內(nèi)向電流的自動(dòng)除極化效應(yīng)，使心肌細(xì)胞自律性下降，心率減慢。腎上腺素作用機(jī)制：心臟，腎上腺素與β腎上腺素能受體結(jié)合產(chǎn)生正性變時(shí)、變力和變傳導(dǎo)作用，導(dǎo)致心率加快，傳導(dǎo)速度加快，使心輸出量增加，心肌收縮力增強(qiáng)。激活心肌細(xì)胞膜上的腺苷酸還化酶，使細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度增加，cAMP能激活心肌細(xì)胞膜上的鈣通道，使心肌動(dòng)作電位平臺(tái)期的內(nèi)流增加，心肌收縮力增強(qiáng)。乙酰膽堿作用機(jī)制：乙酰膽堿與心肌細(xì)胞膜上毒蕈堿型(M型)乙酰膽堿受體結(jié)合，導(dǎo)致心率減慢，心房肌收縮能力減弱，心房肌不應(yīng)期縮短，房室傳導(dǎo)速度減慢，即具有急性變時(shí)、變力及變傳導(dǎo)作用。乙酰膽堿能普遍提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，從而使靜息電位絕對(duì)值增大，心肌興奮性下降，使心率減慢；復(fù)極加速，動(dòng)作電位時(shí)程縮短，有效不應(yīng)期縮短，由于乙酰膽堿能提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，復(fù)極加速，Ca2+內(nèi)流量減少。加之乙酰膽堿可直接抑制Ca2+通道，減少內(nèi)向Ca2+流的作用，致使心肌收縮能力下降?！咀鳂I(yè)】

1.計(jì)算加入2滴2%KCl后