實驗4離體蛙心灌流

實驗四蛙類離體心臟灌流

【目的】1.學習斯氏離體蛙心灌流法2.觀察K+、Ca2+及腎上腺素、乙酰膽堿等對離體心臟活動的影響?！驹怼?/p>

心肌具有自動節(jié)律性、傳導性和興奮性三大特征。離體和脫離神經支配的動物心臟,保持在適當?shù)沫h(huán)境中,在一定的時間內,仍然能夠有節(jié)律性地產生興奮和收縮。利用心肌細胞的這一特性,可用來制作離體心臟模型,通過灌流液中營養(yǎng)物質、電解質等的變化,來觀察心肌能量代謝、相應藥物、毒素和電解質水平對心肌活動的影響?！緝x器與設備】

蟾蜍，蛙用手術器械，蛙心套管，蛙心夾，張力換能器，RM6240，任氏液，2%CaCl2，2%KCl，0.01%腎上腺素，0.01%乙酰膽堿。三、實驗內容與操作步驟（一）離體蛙心灌流制作1.破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除心包膜和肝系膜（不要損傷血管）2.第1次結扎：雙結扎右主動脈3.第2次結扎：結扎左右肺靜脈、前腔靜脈（遠離靜脈竇）

4.第3次結扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線→在右肝靜脈（或左肝靜脈、或后腔靜脈）上用眼科剪剪一斜口→用加有任氏液的蛙心套管靜脈插管插入剪口→結扎固定（遠離靜脈竇）

5.第4次結扎：在左主動脈下穿線→在動脈上剪一斜口→插入動脈蛙心套管動脈插管（不要插入動脈球內）→結扎固定6.在所有結扎處外緣遠離心臟端剪除周圍血管，將與蛙心套管靜脈插管和動脈插管的離體蛙心固定在鐵架臺上離體蛙心循環(huán)回路靜脈插管動脈插管橡膠連接管蛙心灌流裝置安裝通道1受滴信號線RM6240記錄系統(tǒng)

點擊“實驗”菜單，選擇“蛙心灌流”，系統(tǒng)進入信號記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)：通道，時間常數(shù)：直流；濾波頻率10Hz；靈敏度3g，采樣頻率400Hz，掃描速度1s/div。實驗項目

1.描記正常的蛙心搏動曲線，觀察心跳頻率，心室收縮和舒張程度。2.向套管的任氏液中加2%CaCl21滴，觀察并記錄心博曲線的變化。實驗項目3.當心臟恢復正常時，向套管內加入2滴2%KCl溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即更換任氏液。4.當心臟恢復正常時，向套管內加入1滴0.01%腎上腺素溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即更換任氏液。5.當心臟恢復正常時，向套管內加入1滴0.01%乙酰膽堿溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即更換任氏液?！咀⒁馐马棥?/p>

每次換液時液面應保持一定的高度。每次換液或滴加試劑時應打標記。每個試劑瓶的滴管不能混淆，以免沾污試劑，影響結果。心臟表面隨時滴加任氏液，以免干燥。待心跳恢復正常后進行下一項實驗。表1CaCl2、KCl、腎上腺素和乙酰膽堿對心肌收縮力、心輸出量和心率的影響實驗項目心收縮張力（克）心輸出量（滴/min）心率（次/min）對照1-2滴2%CaCl21-2滴2%KCl1-2滴10-4腎上腺素1-2滴10-4乙酰膽堿

Ca2+作用機制：1.使慢反應自率細胞0期去極化加強，傳導性加強。2.慢反應自率細胞4期自動去極化速度加快，自率性加強。3.快反應工作肌細胞進入細胞內Ca2+多，心肌收縮力加強。K+影響的機制：1.心肌收縮力下降細胞外液ca2+、K+存在競爭性抑制關系，K+濃度升高時，ca2+內流減少，心肌細胞興奮一收縮耦聯(lián)作用減弱，心肌收縮力下降。2.心率減慢細胞外液K+濃度升高使膜對K+通透性升高，因此4相的K+外向電流增大，延緩了4相的凈內向電流的自動除極化效應，使心肌細胞自律性下降，心率減慢。腎上腺素作用機制：心臟，腎上腺素與β腎上腺素能受體結合產生正性變時、變力和變傳導作用，導致心率加快，傳導速度加快，使心輸出量增加，心肌收縮力增強。激活心肌細胞膜上的腺苷酸還化酶，使細胞內cAMP濃度增加，cAMP能激活心肌細胞膜上的鈣通道，使心肌動作電位平臺期的內流增加，心肌收縮力增強。乙酰膽堿作用機制：乙酰膽堿與心肌細胞膜上毒蕈堿型(M型)乙酰膽堿受體結合，導致心率減慢，心房肌收縮能力減弱，心房肌不應期縮短，房室傳導速度減慢，即具有急性變時、變力及變傳導作用。乙酰膽堿能普遍提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，從而使靜息電位絕對值增大，心肌興奮性下降，使心率減慢；復極加速，動作電位時程縮短，有效不應期縮短，由于乙酰膽堿能提高膜上K+通道的通透性，促使K+外流增加，復極加速，Ca2+內流量減少。加之乙酰膽堿可直接抑制Ca2+通道，減少內向Ca2+流的作用，致使心肌收縮能力下降?！咀鳂I(yè)】

1.計算加入2滴2%KCl后