獸殘分析中樣品的采集、保存、制備與前處理技術及方法建立步驟

1獸殘分析中樣品的采集、保存、制備與前處理技術及方法建立步驟王永娟2殘留分析的樣品樣品的前處理殘留檢測方法采樣與樣品制備（樣品預處理）提取凈化濃縮衍生化分辨檢測樣品處理測定分離殘留分析原理獸藥殘留分析的過程31樣品的采集、保存、制備1.1采樣1.2樣品封存1.3樣品的保存運輸1.4樣品制備41.1.1抽樣的基本原則嚴格按照規(guī)定的程序和方法執(zhí)行，確保抽樣工作的公正性和樣品的代表性、真實性。51.1.2人員抽樣人員不少于2人抽樣人員應經(jīng)過專門的培訓，具備相應資質(zhì)。抽樣人員應攜帶身份證、工作證、單位介紹信、抽樣單等文件。61.1.3工具肉類：不銹鋼刀具、自帶封口的食品衛(wèi)生塑料包裝袋、低溫樣品保存箱（盒）、一次性手套、標簽、盛放微生物檢驗用樣品的滅菌容器等。蛋類：潔凈衛(wèi)生的格狀專用盛蛋盤、樣品保存箱、一次性手套、標簽、盛放微生物檢驗用樣品的滅菌容器等。奶類：攪拌棒、取樣器、溫度計、塑料密封采樣瓶、低溫存奶箱、一次性手套、標簽、盛放微生物檢驗用樣品的滅菌容器等。蜂蜜：取樣桿，取樣瓶、一次性手套、標簽、盛放微生物檢驗用樣品的滅菌容器等。71.1.4組批飼養(yǎng)場：以同一養(yǎng)殖場、養(yǎng)殖條件相同、同一天或同一時段生產(chǎn)的產(chǎn)品為一檢驗批。屠宰場：以來源于同一地區(qū)、同一養(yǎng)殖場、同一時段屠宰的動物為一檢驗批。冷凍（冷藏）庫：以企業(yè)明示的批號為一檢驗批。市場：以產(chǎn)品明示的批號為一檢驗批。81.1.5一個樣品的組成及取樣量血樣：從頸靜脈或前腔靜脈取全血加抗凝劑。取樣量為牛：50～100ml；羊和豬：20～50ml。尿樣：收集清晨飼喂前的尿液100～200ml。蛋：從產(chǎn)蛋架上抽取，取樣量不少于10枚；奶：從全場混合奶中取，取樣量不少于1000ml。蜂蜜：每個樣品量為1000克91.1.5一個組織樣品的組成動物肌肉肝腎脂肪牛300-500克400-500克(取整葉)雙腎各取1/2（縱切）200克羊300-500克400-500克(取整葉)雙腎各取1/2（縱切）200克豬300-500克400-500克(取整葉)雙腎各取1/2（縱切）200克雞300-500克200-500克(取6只雞全肝)6只雞全腎50-100克(6只雞脂肪)兔300-500克400-500克(取5只兔全肝)5只兔全腎5只兔脂肪101.1.6養(yǎng)殖場抽樣數(shù)量豬、羊（尿樣、血液）動物數(shù)量（樣本數(shù)）抽樣數(shù)（個）5055110081015001250015111.1.6養(yǎng)殖場抽樣數(shù)量牛（尿樣、血液、奶）動物數(shù)量（樣本數(shù)）抽樣數(shù)（個）5003501100071001500010500110000121000015121.1.6養(yǎng)殖場抽樣數(shù)量家禽（蛋）動物數(shù)量（樣本數(shù)，只）抽樣數(shù)（個）100011001500035001100005100008131.1.6養(yǎng)殖場抽樣數(shù)量-蜂蜜從每個蜂場抽取10％的蜂群，每一群隨機取1張未封蜂坯，用分蜜機分離后取1000g。141.1.7屠宰廠抽樣（動物組織）數(shù)量家畜（豬、羊）動物數(shù)量（樣本數(shù)，頭）抽樣數(shù)（個）10051015008501200010200015151.1.7屠宰廠抽樣（動物組織）數(shù)量家禽（雞、鴨、鵝）、兔動物數(shù)量（樣本數(shù)，只）抽樣數(shù)（個）100011001500035001100005100008161.1.8蜂蜜加工廠（場）取樣批量（件）最低取樣數(shù)（件）＜50550－10010101－500每增加100，增取5＞501每增加100，增取2171.1.9市場樣品采集鮮肉若成堆產(chǎn)品，則在堆放空間的四角和中間設采樣點，每點從上、中、下三層取若干小塊混為一份樣品；若零散產(chǎn)品，則隨機從3～5片胴體上取若干小塊混為一份樣品。每份500～1500克。凍肉小包裝凍肉同批同質(zhì)隨機取3～5包混合，總量不得少于1000克。若成堆產(chǎn)品，取樣方法同鮮肉。18雞蛋按批次分別在貨件不同部位隨機抽樣在50件以內(nèi)者，抽檢2件；50至100件者，抽檢4件；101至500件者，每增加50件增抽1件（所增不足50件者，按50件計）；500件以上者，每增加100件增抽1件（所增不足100件者，按100件計算）。19液體乳品一般可采用虹吸法，或者用簡單的玻璃管按不同深度分層取樣。對于黏稠或含有固體懸浮或非均勻乳品應充分攪勻，然后再進行取樣。總量應不少于500克。小包裝、玻璃瓶裝乳品按取樣數(shù)量將內(nèi)容物連同包裝一起采樣。均可以按照每一生產(chǎn)班次，或同一批號的產(chǎn)品，隨機抽取原包裝乳品2～4包/瓶。1.1.9市場樣品采集20冷庫、市場抽樣數(shù)量檢驗批量（件）最少取樣數(shù)（件）1-25126-1005101-25010251-50015501-1000171001-25002021組織樣品的取樣取樣時不得將待取樣品和已取樣品進行任何洗滌處理，取樣時用不銹鋼手術剪或手術刀割取樣品，戴一次性塑料手套操作。221.1.10縮分小樣為保證樣品檢驗結(jié)果的可重復性或能進一步仲裁，每個樣品都應分成至少兩個相同的小樣，每個小樣的數(shù)量都能滿足每次進行完整分析的需要。分樣可以在采樣點或檢驗部門的實驗室進行。分樣時，必須避免污染或任何能引起殘留物含量變化因素的產(chǎn)生。231.1.11抽樣單填寫樣品編號：格式為[動物品種代碼]/[樣品種類代碼]/[抽樣日期]。例：2001年7月10日抽取的牛肝樣品第一份，其編號為：B/L/010710-1。代碼動物品種牛羊豬雞兔魚蜂蜜代碼BOPCRFBe樣品種類肌肉脂肪肝腎血液尿液蛋代碼MFLKBUE樣品種類奶蜂蜜心肺腦皮膚毛發(fā)代碼MiHbHLuCSHa25采樣單填寫樣品名稱：所取樣品的種類及部位。例：血樣，全肝，背脊肉等。動物品種：所取樣品動物的名稱。年齡：牛、羊按年計，豬按月計，兔、雞按日計。抽樣基數(shù)：抽樣當天的出欄率（養(yǎng)殖場）、屠宰量（屠宰廠）、存貨量（冷庫）。樣本數(shù)量：所取樣品的重量或體積。批號：樣品所在批的批號，若無，則填“無”。保存情況：運輸前所采取的保存方式、保存溫度及持續(xù)時間。采樣機構(gòu)(蓋章)采樣人(簽字)；采樣日期；被采樣單位負責人簽名。26填寫采樣單的注意事項采樣單填寫的內(nèi)容應真實、詳實；應采用黑色鋼筆或簽字筆填寫，字跡清楚，不潦草，不得涂改；采樣單應填寫完整，在采樣人一欄至少應有兩名采樣人簽字。填寫抽樣單最少一式三份，分別由抽樣單位、被抽樣單位（隨留樣保存）和行政主管部門各1份.271.2樣品封存抽樣人員和被檢單位代表共同確認樣品的真實性、代表性和有效性。將每份樣品分別封存，粘貼封條。抽樣人員和被檢單位代表分別在封條上簽字蓋章。封樣包裝材料應清潔、干燥，不會對樣品造成污染和傷害；包裝容器應完整、結(jié)實、有一定抗壓性。281.3樣品保存運輸為確保被分析物的穩(wěn)定性和樣品的完整性，采集的樣品應由專人妥善保存，并在規(guī)定的時間內(nèi)送達檢測單位。取樣后凍肉樣應在冷凍狀態(tài)下保存，蜂蜜：-10℃，禽蛋：0～4℃，牛奶：2～6℃條件下儲存。生鮮樣品取樣后應在0℃～4℃條件下24小時內(nèi)送達檢測單位。運輸工具應保持清潔無污染。防止貯存地點和裝卸地點可造成的污染。291.4樣品制備又稱為樣品預處理，主要指采樣后至化學分析前試樣的準備工作。不屬于化學分析過程，僅是采樣工作的繼續(xù)。包括樣品勻化、縮分、過篩、離心、過濾、防腐和抑制降解等過程。301.4.1樣品的制備液體、漿體或懸浮液體:一般是將樣品充分混勻攪拌。常用的攪拌工具有玻璃捧、電動攪拌器、液體采樣器?；ゲ幌嗳艿囊后w:如油與水的混合物，分離后分別采取。固體樣品:應先破碎或切分，然后搗碎、研磨或用其他方法研細、搗勻。常用工具有絞肉機、磨粉機、研缽、高速組織搗碎機等。罐頭類:肉、魚類罐頭應預先清除骨頭、調(diào)味料（蔥、辣椒等）后再搗碎，常用高速組織搗碎機等。在制備過程中，應注意防止樣品制備中易揮發(fā)性成分的逸散、避免樣品制備中樣品組成成分及理化性質(zhì)發(fā)生變化、防止樣品制備中的操作不當造成污染，而影響檢測數(shù)據(jù)的準確性。311.4.2制樣程序領取樣品:從相關部門領取需要制備的樣品，觀察樣品是否完好，如有腐敗、變質(zhì)、破損等非正常情況，應及時向發(fā)樣部門反映，并停止制樣，保存樣品。如樣品完好，則可開始制備樣品。制備樣品:根據(jù)樣品性質(zhì)、狀態(tài)，選擇適當?shù)闹苽浞椒ㄖ苽錁悠?。填寫制樣?樣品制備完畢后，應認真填寫制樣單，記錄制樣過程，制樣單的內(nèi)容包括：樣品名稱、樣品狀態(tài)、制樣時間、制樣間溫度等。存放樣品:制樣單填寫完畢后，制備的樣品應交與檢測人員檢測或放入指定地點保存以供檢測人員檢測取用。322樣品前處理2.1概述2.2提取方法2.3凈化方法2.4濃縮與富集2.5化學衍生化技術332.1樣品處理-概述目的:將待測組分從樣品基質(zhì)中分離出來，并達到儀器能夠檢測的狀態(tài)。主要作用包括:將藥物從樣品中釋放出來、除去樣品中的干擾雜質(zhì)、將待測組分轉(zhuǎn)換為可檢測的形式、達到可檢測的濃度范圍和溶于可進行分析的介質(zhì)。主要包括四項基本內(nèi)容：提取、凈化、濃縮、衍生化。分離或組分轉(zhuǎn)移是貫穿整個樣品處理過程的基本問題：液-液萃取、固相萃取34樣品處理-概述實際中每個處理步驟和方法不是固定和孤立的，在程序或作用上有時看不出明顯界限。如固相萃取可用于提取、凈化、濃縮和富集；濃縮既是提高組分濃度的手段，又是溶劑轉(zhuǎn)移和提高萃取效率的常用方法。樣品處理技術涉及因素多，操作復雜，方法靈活，直接影響個分析指標、成本和效率，一般占用70%以上的分析工作量。352.2提取方法提?。╡xtraction)：用物理的或化學的手段破壞待測組分與樣品成分間的結(jié)合力，將待測組分從樣品中釋放出來并轉(zhuǎn)移到易于分析的溶液狀態(tài)。提取平衡：待測物、樣品基質(zhì)、溶劑相似相溶原理提取過程首先應保證最大回收率，其次是減少樣品基質(zhì)的共萃取提取過程常與樣品制備過程一同進行，如勻漿、抑制樣品降解。362.2.1樣品類型尿液：不會乳化，但成分復雜，不穩(wěn)定，與組織濃度相關性差，分析前需調(diào)節(jié)pH值和水解軛合物，pH4-9。血漿：主要成分為水(90-93%)和可溶性蛋白(7%)。血漿成分較尿液復雜，組成和性質(zhì)比較穩(wěn)定，血藥濃度與組織濃度密切相關，pH7.24-7.54。膽汁：成分復雜且不穩(wěn)定，與尿液相似，分析前需調(diào)節(jié)pH值和水解軛合物，pH6.1-8.6，水分80-96%。奶：主要成分為水（87%）、蛋白質(zhì)（3.3%）、脂肪（3.7%）、糖類（4.7%），可稱為混懸有脂肪微粒的血漿，pH6.7。蛋：蛋黃主要成分為水（50%）、蛋白質(zhì)（16.5%）、脂肪（33%）、糖類，為疏水性環(huán)境，極性低的藥物殘留多，pH6.0-6.8；蛋清主要為水（88%）和蛋白質(zhì)（10.5%）。分析前需調(diào)節(jié)pH值，pH7.5-9.4。動物組織：肌肉的主要成分為水（75%）、蛋白質(zhì)（19%）、脂肪（2.5%）、糖類（1.2%），pH5.7。不同動物肌肉成分有差異。肝、腎為藥物的代謝或排泄器官，殘留物濃度高，消除緩慢。372.2.2提取溶劑的選擇遵循相似相溶的原則對待測組分溶解度大對于干擾雜質(zhì)溶解度小與樣本基質(zhì)有較好的相容性能有效釋放藥物具有脫蛋白和/或脫脂肪能力其他：沸點適中、黏度小、毒性低、易純化、價格低廉、易于進一步凈化。38常用提取溶劑乙腈、甲醇、丙酮：與樣品容易混合；易于操作；溶劑化作用和滲透能力強，黏度小，提取速度快；能使結(jié)合態(tài)的藥物釋放；脫蛋白和脂肪；提取液pH可以調(diào)節(jié)；帶測組分在提取樣品液中均勻分布；可定量移取提取液進行分析。混合溶劑：乙腈-甲醇、氯仿-甲醇、乙腈-水、己烷-丙酮等。二甲基亞砜、二甲基甲酰胺：沸點高，凈化中難以除去。非水溶性的極性溶劑：乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚：脂溶性殘留物無水硫酸鈉：通過鹽析作用提高組織樣品待測物的回收率。392.2.3提取方法如何提高提取速度？提高樣品的破碎程度，以增加擴散面積，減少擴散距離攪拌和重復提取延長提取時間使用黏度小的溶劑，適當提高溫度402.2.3提取方法

組織搗碎法:又稱勻漿提取法,一般將樣品和3-5倍樣品體積的溶劑加入搗碎杯,高速攪拌或勻漿。將樣品過濾或離心后移取提取液，殘渣重復提取1-2次，合并提取液進行凈化。不需要加熱，速度快，提取效果好。41振蕩法：將樣品和適量溶劑加入具塞錐形瓶，中速振蕩30分鐘或更長時間，樣品液過濾或離心后移取提取液即可。該方法操作簡便，可同時對多個樣品進行提取。常加無水硫酸鈉以提高回收率。2.2.3提取方法42索氏提取法：使用索氏提取器進行提取。要考慮組分的熱穩(wěn)定性，保證組分在長時間回流過程中不分解。該方法操作簡便，不需要轉(zhuǎn)移樣品，不受樣品基質(zhì)影響，是一種徹底提取法。但提取時間長，耗用較多溶劑（每個樣品300-500毫升），需要對提取液進行濃縮。適用于水分較少的樣品的提取。2.2.3提取方法43超聲波輔助提?。簩悠泛腿軇┓庞诿荛]的試管中，置于具有一定能量的超聲波水浴中，數(shù)秒鐘拿出，再放入、拿出。該方法操作簡單、一次可同時提取多個樣品。提取時間短、速度快、提取效率高。但要耗用大量的溶劑每個樣品（300-500毫升），。2.2.3提取方法44超臨界流體萃?。菏褂贸R界流體萃取儀原理：超臨界流體為兼具氣態(tài)和液態(tài)性質(zhì)的特殊狀態(tài)，萃取的速度快。特點：速度快，選擇性強，易于凈化。獲得的樣品可以直接進行分析，如進行GC或HPLC測定等。2.2.3提取方法45強化溶劑萃取：是由超臨界流體萃取衍生出來的一種提取方法。采用溶劑作流體，在高溫、高壓下提取樣品。其操作溫度比索氏提取發(fā)高，從而使溶劑具有更強的溶解能力。與索氏提取相比，速度快（10-20分鐘），溶劑用量?。?5毫升）。設備價格昂貴。2.2.3提取方法46微波輔助萃?。盒枰⒉ㄝ腿⊙b置。提高萃取效率：微波激活作用、提高溶劑活性2.2.3提取方法47樣品的消解：主要用于常規(guī)方法無法提取的樣品基質(zhì)（毛發(fā)、角質(zhì)、骨頭等）、組織結(jié)合力強的組分、結(jié)合殘留或軛合殘留物的處理酸消解法：對耐酸的藥物如有機氯農(nóng)藥。消解試劑如高氯酸-冰乙酸混合液、稀鹽酸等。溫度在80-90℃。消解開始時應充分振蕩或攪拌，是樣品分散。試劑用量一般為樣品量的2-3倍。堿消解法：主要用于動物樣品的消解，如魚肉、蛋、奶制品等。試劑有甲醇鈉、乙醇鈉、甲醇鉀、乙醇鉀。溫度為60度。樣品易發(fā)生乳化。酶消解法：主要用于組織蛋白、軛合物和結(jié)合物的水解，使藥物被釋放。常用的蛋白水解酶為枯草桿菌溶素和胰蛋白酶等。軛合物水解沒有β-葡糖苷酸酶和芳基硫酸酶等。酶水解條件溫和，但酶制劑價格高，水解時間長，有時會有更多雜質(zhì)被釋放，加重凈化負擔。2.2.3提取方法48冷凍干燥：先將樣品冷凍，置入凍干機內(nèi)進行減壓干燥，除去揮發(fā)性雜質(zhì)，向殘渣中加入有機溶劑進行萃取。適用于含水樣品中熱穩(wěn)定性差、水溶性的組分的預處理。制備“干混合物”：將樣品與足量的無水硫酸鈉或硫酸鎂混合研磨，然后用溶劑萃取或裝柱淋洗。起泡分離：利用泡沫除去溶解的物質(zhì)，常用于濃縮和分離水中的洗滌劑后其他表面活性劑。2.2.3提取方法492.2.4提取效率使用同位素標記的組分進行回收率試驗使用公認的徹底提取法比較測定結(jié)果選定方法的比較與重復502.3凈化方法提取過程中許多與待測組分溶解性相似的雜質(zhì)被一起轉(zhuǎn)移出來。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程。提取過程一般可以除去99%以上的樣品基質(zhì)，不到1%的共萃取物是主要的干擾物質(zhì)。雜質(zhì)：增加基線噪音、降低柱效、阻塞色譜管路、污染色譜柱和檢測器?；蚋蓴_色譜分離過程，導致待測物峰形異常和保留值變異增加。還可能影響衍生化反應。雜質(zhì)的存在將直接影響定性和定量的質(zhì)量，使檢測限升高和變異增加。512.3.1液-液萃取是一種利用待測組分與樣品雜質(zhì)在互不相溶的兩相中溶解性差異進行凈化的方法。原理：分配常數(shù)影響因素：溶劑、pH、離子對試劑、鹽析、其他操作方法：分液漏斗震蕩法、渦旋萃取、逆逆流萃取、特殊容器萃取等脫水、乳化、吸附損失522.3.2固相萃取優(yōu)點：可以凈化很小體積的樣品、溶劑用量小、選擇性高、速度快、不會發(fā)生乳化、引入雜質(zhì)少。SPE柱結(jié)構(gòu):柱體、固定相和濾板3部分。固定相類型：正相、反相、離子交換相固定相的選擇：非極性或低極性選用反相固定相，中等極性物質(zhì)反相或正相固定相均可應用，離子型或較強的有機酸、有機堿可選擇離子交換固定相為保證上樣時樣品被充分保留，樣品介質(zhì)應為弱溶劑。固相萃取分離機制與溶劑選擇分離機制弱溶劑（保留條件）強溶劑（洗脫條件）反相水、緩沖液或低濃度的甲醇或乙腈甲醇、乙腈或溶劑與水的混合物正相正己烷、甲苯等二氯甲烷、甲醇等陽離子交換低離子強度緩沖液高離子強度緩沖液低反離子強度高反離子強度pH＞固定相pKapH＜固定相pKapH＜分析物pKapH＞分析物pKa陰離子交換低離子強度緩沖液高離子強度緩沖液低反離子強度高反離子強度pH＜固定相pKapH＞固定相pKapH＞分析物pKapH＜分析物pKa54SPE方法的建立和操作-固定相活化目的是創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境和除去柱內(nèi)雜質(zhì)。一般首先使用一種強洗脫能力的溶劑（始溶劑）潤濕和凈化SPE柱，然后再用弱洗脫能力的溶劑（終溶劑）平衡SPE柱。一般每100毫克固定相用1-2毫升溶劑平衡。活化過程中和上樣前不要讓柱內(nèi)液體流干和空氣進入，否則柱床會出現(xiàn)裂隙，影響回收率、重復性和凈化效果。終溶劑的強度與樣品溶劑接近或更低，以免樣品被帶出造成回收率下降?；罨瘜艋Ч种匾?，不當?shù)幕罨Ｊ菍е聝艋『头治稣`差的來源55SPE方法的建立和操作-樣品上柱SPE柱容量一般為固定相中重量的1%-3%。流速越低，凈化效果越好，一般1-10毫升/分鐘。穩(wěn)定的流速對保證凈化的重復性是重要的。在保證樣品溶解時應盡可能使用弱溶劑溶解樣品，使組分在柱上有強保留，用較小溶劑體積即可將組分洗脫，也可減少雜質(zhì)流出。樣品的溶劑強度過高或體積過大可能造成穿漏，是回收率降低。有時樣品必須用強溶劑提取，可用弱溶劑稀釋至適宜的強度。56SPE方法的建立和操作-洗滌、洗脫洗滌：是為了除去不需要的組分或雜質(zhì)，所用溶劑一般略強于或等于樣品溶劑。洗脫：洗脫溶劑必須謹慎選擇，以保證用較小體積的溶劑將組分淋洗下來，并且避免溶劑太強洗出不必要的組分。洗滌或洗脫溶劑的體積一般為0.5-0.8毫升/100毫克。使用混合溶劑是獲得適宜強度溶劑的有效方法。利用洗脫分布圖可以快速選擇溶劑和固定相。572.3.3基質(zhì)固相分散技術其基本操作是將樣品直接與適量反相鍵合硅膠一起混合和研磨，使樣品被均勻分散于固定相顆粒表面，制成半固態(tài)裝柱，然后用類似與SPE的操作進行洗滌和洗脫。樣品與填料的比例通常為1：4特點：處理樣品速度快，溶劑用量少，但樣品量小，要求檢測方法具有較高的靈敏度。582.3.4免疫親合色譜使用連接有抗體的惰性基質(zhì)作為固定相。對某種或某類殘留組分選擇性吸附和富集，是殘留分析中有效的凈化方法之一。免疫吸附柱能重復使用592.3.5制備色譜法包括制備HPLC和TLC制備HPLC通常作為一種補充手段，用于常規(guī)方法難以凈化的樣品或?qū)艋蟾叩姆治龇椒?。將樣品溶液注入制備型液相色譜儀，收集一定時間段的流出組分，濃縮后測定。制備TLC凈化中，經(jīng)點樣、展開和干燥后將藥物斑點剝離，用溶劑將藥物浸出，濃縮后測定。602.3.6其他膜分離技術分子印跡技術凝膠滲透色譜固相微量萃取：是一種基于液-固吸附平衡的樣品富集方法，是一種無溶劑萃取方法，適用于揮發(fā)性或半揮發(fā)性組分的測定。吹掃-捕集：是用惰性氣體將液體樣品或樣品提取液中的揮發(fā)性物質(zhì)驅(qū)趕到氣相中，再帶入一個收集阱中收集后進行分析。用于環(huán)境樣品或高脂肪樣品中揮發(fā)性物質(zhì)的凈化。浸透限制固定相：可選擇性地保留小分子藥物而排除大分子蛋白質(zhì)，達到凈化和富集的目的?；腔簼饬蛩崤c樣品中的脂肪、油脂、蠟質(zhì)或色素等干擾物質(zhì)反應，生成高極性的水溶性產(chǎn)物，經(jīng)有機溶劑分配后除去。低溫冷凍：動物組織中的脂肪、蠟質(zhì)和水分等雜質(zhì)在低溫溶劑中沉淀析出，經(jīng)離心或過濾后除去。凝結(jié)劑沉淀法：將提取液濃縮，樣品溶于丙酮，加入凝結(jié)劑使蛋白、色素等雜質(zhì)沉淀除去，常用于水溶性較高組分的凈化。61膜分離技術膜分離是利用溶質(zhì)分子的大小、形狀和性質(zhì)等差異，對薄膜表現(xiàn)不同的通透性而達到分離或凈化的目的。超濾(ultrafiltration)、滲析(dialysis)、反滲透(reserveosmosis)自動序列滲析/痕量富集系統(tǒng)(automatedsequentialtraceenrichmentofdialysates)62也被稱為空間排阻色譜（SEC）。該方法基于尺寸排阻的分離原理，利用樣品中各組分分子大小不同，從而在凝膠中滯留時間不同而達到分離目的。凝膠滲透色譜（GPC）不僅可以用于分離和測定小分子物質(zhì)，而且還可以用于分析具有相同化學性質(zhì)但分子大小不同的高分子量物質(zhì)。凝膠滲透色譜（GPC）63

分子印跡技術分自印跡技術是以目標分子為模板，與功能單體通過共價鍵或非共價鍵的方式結(jié)合，再加入交聯(lián)劑進行聚合反應。印跡分子(模板)除去后，聚合物中留下了大量的空穴，這些空穴和模板分子在大小及形狀方而完全匹配。即“分子記憶”引入到聚合物中，該聚合物就具有反結(jié)合模板分子的選擇性能。以分子印跡聚合物(molecularlyimprintedpolymers,MIPs)作為固定相。642.4濃縮與富集旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮：速度快，溶劑可以回收。氣流吹蒸法K-D濃縮器：能使?jié)饪s、回流、洗滌和定容同時進行。真空離心濃縮法：用于熱敏性組分或粘稠液體的濃縮。濃縮過程中組分最易損失，穩(wěn)定性差、蒸汽壓或極性高的待測物損失更明顯。蒸發(fā)溫度不易過高，吹蒸速度不宜過快，不要將樣品直接蒸干（加入乙二醇、硬脂酸或液體石蠟作為保持劑）。必須干燥時最后緩緩吹入氮氣或空氣。652.5化學衍生化技術是指通過化學反應使待測組分定量生成適合于特定分析條件的化合物的一種方法目的：提高檢測的靈敏度與選擇性；改善色譜分離；提高理化穩(wěn)定性；分離結(jié)構(gòu)相似的組分；輔助定性。要求：反應速度快；反應易重復；定量完全；產(chǎn)物易純化；色譜行為良好、易于分離和檢測662.5.1GC衍生化方法硅烷化:凡結(jié)構(gòu)中含有活潑氫或可烯醇化酮基的化合物均可被硅烷化,常用試劑為三甲基硅烷化試劑,反應介質(zhì)一般為甲苯、乙醚、二甲基甲酰胺、乙腈、吡啶。操作用防止帶入水分。?；河糜诹u基、氨基和巰基的衍生化，常用的衍生化試劑為酸酐和鹵代酸酐，如乙酸酐、苯甲酸酐、乙酰氯、三氟乙酸酐等。咪唑類在衍生化過程中不產(chǎn)生酸，對促進反應和產(chǎn)物的穩(wěn)定性有利。一般在吡啶中，室溫下進行。酯化或烷基化：用于羧酸和其他酸性基團的衍生