診斷酶學(xué)第五版

關(guān)于診斷酶學(xué)第五版第一頁，共五十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)概述（一）酶的組成、結(jié)構(gòu)和功能●

酶的本質(zhì)---絕大部分的酶是蛋白質(zhì)，有些酶是核酸和酶蛋白組成的復(fù)合體，極少數(shù)酶的本質(zhì)是核酸?！?/p>

酶的特性---極高的催化效率、高度的特異性

(specificity)以及催化作用的可調(diào)節(jié)性一、酶的概念與特征第二頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶的結(jié)構(gòu)和功能●

酶是蛋白質(zhì)，具有一、二、三級結(jié)構(gòu)，有些酶還具有四級結(jié)構(gòu)?！駟误w酶(monomericenzyme)---只由一條多肽鏈構(gòu)成●寡聚酶(oligomericenzyme)---由多個相同或不同亞基以非共價(jià)鍵連接的酶●多酶體系(multienzymesystem)---由幾種不同功能的酶彼此聚合而成的多酶復(fù)合物●酶的必需基團(tuán)(essentialgroup)---與酶的活性密切相關(guān)的基團(tuán)●酶的活性中心(activecenter)---組成具有能與底物結(jié)合并起催化反應(yīng)的特定空間結(jié)構(gòu)區(qū)域第三頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）酶的催化作用機(jī)制●酶主要通過與底物形成一種或多種中間復(fù)合物來降低反應(yīng)的活化能。

●在酶促反應(yīng)中，酶與底物結(jié)合時，底物首先和酶分子上的活性中心相結(jié)合，形成酶－底物中間復(fù)合物（ES），降低反應(yīng)的活化能，顯著提高了反應(yīng)速度。第四頁，共五十五頁，2022年，8月28日（三）酶的命名、分類與編號●

酶的命名---習(xí)慣命名法、系統(tǒng)命名法●

酶的分類---可分為六大類氧化還原酶(oxido-reductases)、轉(zhuǎn)移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構(gòu)酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases)●

酶的編號---用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類，第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)?！?/p>

酶的命名---習(xí)慣命名法、系統(tǒng)命名法（四）酶分類與編號第五頁，共五十五頁，2022年，8月28日

習(xí)慣用名英文縮寫EC編號系統(tǒng)名乳酸脫氫酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶MAO1.4.3.4單胺：氧化還原酶γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST2.6.1.1L-門冬氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶）(GOT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸轉(zhuǎn)磷酸酶堿性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學(xué)分析中常用酶的名稱與編號第六頁，共五十五頁，2022年，8月28日二、同工酶的概念與特征●同工酶是指催化相同化學(xué)反應(yīng)，但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶?！窀鶕?jù)同工酶的來源和結(jié)構(gòu)不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復(fù)等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。第七頁，共五十五頁，2022年，8月28日第八頁，共五十五頁，2022年，8月28日三、工具酶●通常把酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶?！癯Ｓ霉ぞ呙付酁檠趸€原酶類。第九頁，共五十五頁，2022年，8月28日1．偶聯(lián)H2O2的工具酶及其指示反應(yīng)

利用葡萄糖氧化酶等工具酶使相應(yīng)底物被氧化生成H2O2。在POD的直接催化下，H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色的色素,再進(jìn)行比色測定。

2．NAD(P)+或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng)

作為工具酶的脫氫酶如LD將底物的氫原子去除后傳遞給NAD(P)+而形成NAD(P)H。因NAD(P)H在340nm有特征性光吸收，可借此用分光光度法進(jìn)行檢測。

（一）工具酶參與的指示反應(yīng)

第十頁，共五十五頁，2022年，8月28日第十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）酶循環(huán)法

（405nm）第十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日（三）代謝物濃度的酶法測定技術(shù)

直接法1．終點(diǎn)法

酶偶聯(lián)法2．動力學(xué)法

第十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)酶測定技術(shù)酶活性測定主要利用酶有加速化學(xué)反應(yīng)（催化）的特性，通過測定被加速化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率，根據(jù)酶促反應(yīng)中底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來計(jì)算酶活性濃度的高低。第十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶促反應(yīng)動力學(xué)●酶促反應(yīng)

第十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日●酶促反應(yīng)進(jìn)程第十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日一、酶活性測定

（一）定時法測定酶活性

終點(diǎn)法——是在酶促反應(yīng)平衡期（[S]或[P]不變）任何一點(diǎn)進(jìn)行測定，故不需終止反應(yīng)。第十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日1．直接法

是在不終止酶促反應(yīng)條件下，直接通過測定反應(yīng)體系中底物或產(chǎn)物理化特性的變化如吸光度、熒光、旋光性、pH、電導(dǎo)率、粘度等，從而計(jì)算出酶活性濃度。

2．間接法

在原反應(yīng)體系中加入另一些酶試劑，所進(jìn)行的酶促反應(yīng)和被測酶反應(yīng)偶聯(lián)起來。

連續(xù)測定酶反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物的濃度隨時間變化的多點(diǎn)數(shù)據(jù)，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算酶活性濃度的方法。（二）連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性

第十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶偶聯(lián)反應(yīng)

ABCD

酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶

Ei——指示酶Ea——輔助酶ExEiEa工具酶第十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H+

乳酸＋NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯(lián)法測定ALT340nm－△A/minα-酮酸標(biāo)本中GLDH標(biāo)本中①②試劑1試劑2第二十頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶耦聯(lián)法測定舉例第二十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日(三)干擾因素

1．其他酶和物質(zhì)的干擾2．酶的污染3．非酶反應(yīng)4．分析容器的污染5．沉淀形成

第二十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日

（四）血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化

(1)方法選擇

(2)儀器和設(shè)備

(3)試劑

(4)儀器參數(shù)的設(shè)置

1．方法類型2．波長3．樣品量與試劑量

4.稀釋水量5．反應(yīng)時間6．孵育時間

7.延遲時間8.監(jiān)測時間9.試劑吸光度上、下限10.底物耗盡限額11.線性度12.試劑空白速率13.線性范圍14.計(jì)算因子F值

(五)部分分析前因素對酶活性測定的干擾

1．溶血2．抗凝劑3．標(biāo)本儲存溫度第二十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日（六）酶活性濃度的單位

1.酶活性單位（1）慣用單位（2）國際單位---在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底物轉(zhuǎn)變一微摩爾的酶量為一個國際單位。（3）Katal單位---在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉(zhuǎn)化一摩爾底物的酶量。1katal＝60×106U

第二十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日

2.酶活性濃度單位

以每單位體積所含的酶活性單位數(shù)表示。（1）表示方法---U／L

（2）酶活性濃度單位的計(jì)算---用連續(xù)監(jiān)測法測定時，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計(jì)算。第二十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日3.參考值和正常上限倍數(shù)的應(yīng)用（1）參考區(qū)間（2）正常上限倍數(shù)的應(yīng)用正常上限(upperlimitsofnormal，

ULN)倍數(shù)作為酶活性濃度的表示法，就是測定值除以正常上限值。第二十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日（七）系數(shù)K值的計(jì)算與應(yīng)用1.系數(shù)K值的意義與設(shè)置2.系數(shù)K值的類型與計(jì)算第三十頁，共五十五頁，2022年，8月28日（八）臨床酶學(xué)測定的標(biāo)準(zhǔn)化

1.標(biāo)準(zhǔn)化途徑

1．使用推薦方法和參考方法

2．使用公認(rèn)的酶校正物或酶參考物

2.酶活性濃度測定的參考系統(tǒng)

1．建立原級參考方法

2．制備原級參考物

3．建立參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)第三十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日（一）測定原理（二）免疫化學(xué)測定的優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)主要有：①靈敏度高②特異性高③能用于一些不表現(xiàn)酶活性的酶蛋白④特別適用于同工酶的測定局限性主要有：①制備足夠量的提純酶作為抗原和具有免疫化學(xué)性質(zhì)的抗血清較困難②測定步驟多，操作繁瑣③測定成本高二、酶質(zhì)量測定第三十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日三、同工酶檢測

第三十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日

(一)電泳法---瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、毛細(xì)管電泳

●

用電泳法進(jìn)行同工酶分析時，如顯示的區(qū)帶數(shù)與同工酶數(shù)不一致時，要特別注意巨分子酶的存在。

(二)層析法第三十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日血清LD電泳圖譜分析第三十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日正常和病理狀況時血清CK同工酶譜第三十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日(三)免疫分析法

免疫抑制法

利用同工酶的一種亞基與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計(jì)算出該型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性×2：CK-MB活性；所測CK-MM和CK-MB之總活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。第三十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日

(四)動力學(xué)分析法

1．底物特異性分析法

2．抑制劑分析法

3．pH分析法

4．熱失活分析法

(五)蛋白酶水解法第三十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日第三節(jié)常用酶及同工酶測定的臨床應(yīng)用

一、血清酶血清酶活性升高的原因：●組織器官受損造成細(xì)胞破壞或細(xì)胞膜通透性增高，細(xì)胞內(nèi)的某些酶大量釋放入血；●細(xì)胞的轉(zhuǎn)換率增高或細(xì)胞的增殖加快，其特異的標(biāo)志酶釋放入血；●細(xì)胞內(nèi)酶的合成或誘導(dǎo)增強(qiáng)；●酶的清除受阻。第三十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日1、血清酶的來源（1）血漿特異酶（2）非血漿特異酶①外分泌酶②細(xì)胞酶2、血清酶的去路（1）血清酶的半壽期（2）血清酶的失活和排泄（一）血清酶的來源與去路

第四十頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）血清酶的生理差異

1．性別

2．年齡

3．進(jìn)食

4．運(yùn)動

5．妊娠

6．其他第四十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日

常用的酶譜：(1)心肌酶譜---AST、LD、CK、CK-MB、CK-MB亞型或CK-MM亞型(2)肌酶譜---LD、AST及其同工酶、CK-MM亞型(3)肝酶譜---ALT、LD、γ-GT、ALP、ChE、MAO(4)腫瘤酶譜---ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、

γ-GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS(5)胰酶譜---AMY及其同工酶、LPS、彈力蛋白酶-1、磷脂酶A2（三）血清酶的臨床應(yīng)用

第四十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日第四十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日二、尿液酶三、漿膜腔積液酶四、腦脊液酶

第四十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日五、同工酶的診斷價(jià)值

LD同工酶——心肌梗死、肝功能損傷和惡性腫瘤CK同工酶——心肌梗死、肌肉疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病AST同工酶——肝臟、心肌等細(xì)胞損傷程度的判斷GP同工酶——急性心肌梗死ARS同工酶——膀胱癌ALD同工酶——肝臟疾病、心肌梗死、神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病和惡性腫瘤γ-GT同工酶——肝臟占位性病變AMS同工酶——急性胰腺炎、腮腺炎ALP同工酶——肝膽疾病、骨骼疾病ACP同工酶——前列腺疾病GST同工酶——肝臟疾病、肺癌第四十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日1、轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶DeRitis比值（AST／ALT）——對于急、慢性肝炎的診斷、鑒別診斷以及判斷轉(zhuǎn)歸也有特別價(jià)值。急性肝炎時比值＜1，肝硬化時比值≥2，肝癌時比值≥3?！懊改懛蛛x”現(xiàn)象——重癥肝炎時由于大量肝細(xì)胞壞死，血中ALT逐漸下降，而膽紅素卻進(jìn)行性升高，常是肝壞死的前兆。第四十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日2、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶γ-GT同工酶分為γ-GT1、γ-GT2、γ-GT3和γ-GT4四種，正常人只見γ-GT2和γ-GT3。重癥肝膽疾病和肝癌時常有γ-GT1出現(xiàn)，乙醇性肝壞死和膽總管結(jié)石時常有γ-GT2增加，γ-GT4與膽紅素增高密切相關(guān)。第四十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日3、肌酸激酶及其同工酶和亞型

●

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在3種同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在細(xì)胞線粒體內(nèi)還存在另一CK同工酶，即所謂線粒體CK(CK-Mt)，也稱CK4?！?/p>

CK-MM亞型測定對早期AMI的檢出更為敏感，一般以CK-MM3／CK-MMl＞1．0作為診斷AMI的標(biāo)準(zhǔn)●

CK-MB2亞型在AMI早期診斷和判斷有無再灌注上有很高的靈敏度和特異性。一般CK-MB2>1．9U／L或CK-MB2／CK-MB1>1．5可作為AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。第四十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日4、乳酸脫氫酶及其同工酶●

AMI時，LD由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲，通常在梗死8-18h升高，48-144h達(dá)峰值，可顯著升高(>5ULN)，因其半壽期較長，增高持續(xù)時間可達(dá)5-10d，此時其他酶已恢復(fù)正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價(jià)值?！?/p>

測定血清及胸腹水中LD含量常用來鑒別其為漏出液抑或滲出液，若胸水LD／血清LD＞0.6、腹水LD／血清LD＞0.4為滲出液，反之為漏出液。●

骨骼肌和肝細(xì)胞損傷時常出現(xiàn)LD5＞LD4。急性肝炎時LD1和LD2相對下降，LD5升高；慢性肝炎時LD5升高，且LDl＜LD3；肝硬化時僅表現(xiàn)LD2下降和LD5升高；肝癌時LD5升高，但LD1＞LD3。惡性腫瘤如轉(zhuǎn)移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。第四十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日5、堿性磷酸酶及其同工酶●

人體各組織ALP同工酶可分為3大類，即胎盤ALP、腸ALP和肝／骨／腎ALP同工酶?！?/p>

肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達(dá)ULN的5—20倍。90％以上的肝外膽道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。●

胃腸道腫