大腸桿菌的測(cè)定

糞大腸桿菌的測(cè)定大腸菌群是指一群在37℃培養(yǎng)24小時(shí)能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。作為糞便污染指標(biāo)，有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義?；靖拍罴S大腸菌群是總大腸菌群的一個(gè)亞種,直接來(lái)自糞便,除了它耐熱,在44~44.5℃的高溫條件仍可生長(zhǎng)繁殖并將色氨酸代謝成吲哚處,其他特性均與總大腸菌群相同?？偞竽c菌群中的細(xì)菌除了生活在腸道中,在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在,但這些在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養(yǎng)的最適合溫度為25℃,如在37℃培養(yǎng)則仍可生長(zhǎng),但如果將培養(yǎng)溫度上升至44.5℃則不可生長(zhǎng),而直接來(lái)自糞便的大腸菌群,習(xí)慣于37℃左右生長(zhǎng),如將培養(yǎng)溫度升高至44.5℃仍可繼續(xù)生長(zhǎng)。因此,可用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開(kāi)。。基本概念在37℃培養(yǎng)生長(zhǎng)的大腸菌群,包括糞便內(nèi)生長(zhǎng)的大腸菌群稱為“總大腸菌群”在44.5℃仍能生長(zhǎng)的大腸菌群稱為“糞大腸菌群”,糞大腸菌群細(xì)菌在衛(wèi)生學(xué)上具體有重要的意義基本概念測(cè)定方法糞大腸菌群測(cè)定的方法有多管發(fā)酵法和濾膜法。這里只討論濾膜法的測(cè)定,該方法所需的儀器簡(jiǎn)單,操做簡(jiǎn)便快速,適用于地表水、地下水及廢水中糞大腸桿菌的測(cè)定。原理濾膜是一種微孔性薄膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜（孔徑0.45μm）的濾器中，經(jīng)過(guò)抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于M.FC培養(yǎng)基上，44.5℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)濾膜上生長(zhǎng)的此特性的菌落數(shù)，計(jì)算出每1L水樣中含有糞大腸菌群數(shù)。培養(yǎng)基成分胰胨10g蛋白胨5g酵母浸膏3.0g氯化鈉5.0g乳糖12.5g膽鹽三號(hào)1.5g1%苯胺藍(lán)水溶液10mL1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氫氧化鈉液中）10mL蒸餾水1000mL培養(yǎng)基配制方法將上述培養(yǎng)基中的成分（除苯胺藍(lán)和玫瑰色酸外），置于蒸餾水中加熱溶解，調(diào)節(jié)pH為

7.4，分裝于小燒瓶?jī)?nèi)，每瓶100mL，于115℃滅菌20min。貯于冰箱中備用。臨用前，按上述配方比例，用滅菌吸管分別加入已煮沸滅菌的1%苯胺藍(lán)溶液1mL及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氫氧化鈉液中）1mL，混合均勻。加熱溶解前，加入1.2%～1.5%瓊脂可制成固體培養(yǎng)基測(cè)定步驟1、水樣量的選擇：

水樣量的選擇根據(jù)細(xì)菌受檢驗(yàn)的特征和水樣中預(yù)測(cè)的細(xì)菌密度而定。

如未知水樣中糞大腸菌的密度，就應(yīng)按下表所列體積過(guò)濾水樣，以得知水樣的糞大腸桿菌密度。先估計(jì)出適合在濾膜上計(jì)數(shù)所應(yīng)使用的體積，然后再取這個(gè)體積的1/10和10倍，分別過(guò)濾。理想的水樣體積是一片濾膜上生長(zhǎng)

20～60個(gè)糞大腸菌群菌落，總菌落數(shù)不得超過(guò)200個(gè)。2、濾膜及濾器的滅菌

將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌三次，每次15min。前兩次煮沸后需更換水洗滌2～3次，以除去殘留溶劑。

濾器和墊圈分別用紙包好，在使用前先經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30min。濾器滅菌也可用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌3、過(guò)

濾

用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，穩(wěn)妥地固定好濾器。

將適量的水樣注入濾器中，加蓋，開(kāi)動(dòng)真空泵即可抽濾除菌使用M.FC培養(yǎng)基。培養(yǎng)基含或不含瓊脂，不含瓊脂的培養(yǎng)基使用已用M.FC培養(yǎng)基飽和的無(wú)菌吸收墊。將濾過(guò)水樣的濾膜置于瓊脂或吸收墊表面。將培養(yǎng)皿緊密蓋好后，置于能準(zhǔn)確恒溫于44.5℃±0.5℃的恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水浴中，經(jīng)24h±2h培養(yǎng)4、培養(yǎng)結(jié)果的觀察糞大腸菌群菌落在M.FC培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，其他非糞大腸菌群菌落呈灰色、淡黃色或無(wú)色。正常情況下，由于溫度和玫瑰酸鹽試劑的選擇性作用，在M.FC培養(yǎng)基上很少見(jiàn)到非糞大腸菌菌落必要時(shí)可將可疑菌落接種于