標準解讀
《LY/T 2350-2014 松褐天牛攜帶松材線蟲的PCR檢測技術(shù)規(guī)范》是一項針對松褐天牛是否攜帶松材線蟲進行分子生物學檢測的標準。該標準詳細規(guī)定了從樣品采集、處理到最終通過PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))技術(shù)對松材線蟲DNA進行檢測的具體步驟和技術(shù)要求。
在樣品采集部分,明確了需要選取疑似被感染的松樹作為樣本來源,并且特別指出了對于松褐天牛成蟲或其幼蟲的正確收集方法,包括使用特定工具捕捉以及如何保存這些昆蟲以確保后續(xù)實驗的有效性。
樣品處理階段,則涉及到如何從捕獲的天牛中提取出可能存在的松材線蟲DNA。這里描述了一系列操作流程,比如將昆蟲組織置于適當?shù)木彌_液中破碎細胞壁釋放核酸物質(zhì),然后經(jīng)過離心等步驟去除雜質(zhì)獲得純凈的DNA溶液。
接下來是PCR擴增過程,標準中提供了推薦使用的引物序列,這些引物能夠特異性地識別并擴增松材線蟲特有的基因片段。同時,還給出了詳細的PCR反應(yīng)條件設(shè)置指南,包括溫度循環(huán)參數(shù)等關(guān)鍵信息,確保實驗結(jié)果準確可靠。
最后,在數(shù)據(jù)分析與報告撰寫方面,《LY/T 2350-2014》也給出了一定指導原則。它強調(diào)了陽性對照和陰性對照的重要性,用于驗證實驗體系的有效性和排除假陽性/假陰性的可能性。此外,還建議采用凝膠電泳或其他適當?shù)姆椒▉碇庇^展示PCR產(chǎn)物,并基于此作出最終判斷。
整個標準旨在為林業(yè)工作者及相關(guān)研究人員提供一套科學合理、易于操作的技術(shù)方案,以便更有效地監(jiān)測和防控由松褐天牛傳播引起的松材線蟲病害問題。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2014-08-21 頒布
- 2014-12-01 實施
文檔簡介
ICS65020
B65.
中華人民共和國林業(yè)行業(yè)標準
LY/T2350—2014
松褐天牛攜帶松材線蟲的PCR檢測
技術(shù)規(guī)范
TechnicalregulationfordetectingBursaphelenchusxylophilusfrom
PinesawerMonochamusalternatusHoebPCRamlification
y(p)yp
2014-08-21發(fā)布2014-12-01實施
國家林業(yè)局發(fā)布
LY/T2350—2014
前言
本標準按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標準由全國林業(yè)有害生物防治標準化技術(shù)委員會歸口
(SAC/TC522)。
本標準負責起草單位華南農(nóng)業(yè)大學
:。
本標準參加起草單位國家林業(yè)局森林病蟲害防治總站江西省贛州市林業(yè)有害生物防治檢疫局
:、。
本標準主要起草人王新榮孫思朱孝偉王永孔祥超宋玉雙黃敬怡任路路馬偉杰陳晨賴福勝
:、、、、、、、、、、。
Ⅰ
LY/T2350—2014
松褐天牛攜帶松材線蟲的PCR檢測
技術(shù)規(guī)范
1范圍
本標準規(guī)定了松褐天牛Monochamusalternatus成蟲攜帶松材線蟲Bursaphelenchus
(Hope)[
xylophilus檢測技術(shù)的一般原則和技術(shù)要求
(SteineretBuhrer)Nickle]PCR。
本標準適用于利用技術(shù)定性檢測攜帶松材線蟲的松褐天牛
PCR。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GB/T6682—2008
動物源性飼料中馬驢源性成分定性檢測方法方法
GB/T21107—2007、PCR
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件
。
31
.
松褐天牛MonochamusalternatusHope
又名松墨天牛屬昆蟲綱鞘翅目天牛科墨天牛屬
,(Insecta),(Coleoptera),(Cerambycidae),
Monochamus是松樹的一種重要蛀干害蟲又是松材線蟲的主要傳播媒介松褐天牛成蟲中后胸攜
(),,。
帶較多松材線蟲松褐天牛成蟲形態(tài)圖和脫翅松褐天牛成蟲中后胸示意圖參見附錄
。A。
32
.
松材線蟲Bursaphelenchusxylophilus
松材線蟲隸屬于線蟲綱滑刃目滑刃亞目滑刃總科
(Nematoda),(Aphelenchida),(Aphelenchina),
滑刃科傘滑刃亞科傘滑刃屬
(Aphelenchoidoidea),(Parasitaphelenchidae),(Bursaphelenchinae),
Bursahelenchus是引起松樹枯萎死亡的直接原因也是本標準所要檢測的目標
(p),,。
33
.
聚合酶鏈式反應(yīng)polymerasechainreactionPCR
;
聚合酶鏈式反應(yīng)是體外酶促合成特異片段的一種方法由高溫變性低溫退火及適溫延伸
,DNA,、
等幾步反應(yīng)組成一個周期循環(huán)進行使目的得以迅速擴增具有特異性強靈敏度高操作簡便
,,DNA,、、
和省時等特點參見中的規(guī)定
。GB/T21107—20073.1。
34
.
引物primer
一段短核苷酸序列其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點在聚合反應(yīng)時刺激合成一條與模板
。,,
互補的的序列
DNA。
35
.
內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)internaltranscribedspacer
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