食品中有害物質(zhì)的檢測1教學(xué)文案

食品中有害物質(zhì)的檢測1第一節(jié)概論一、有害物質(zhì)與有毒物質(zhì)的概念在自然界中,當(dāng)某物質(zhì)或含有該物質(zhì)的物料被按其原來的用途正常使用時,若因該物質(zhì)而導(dǎo)致人體生理機能、自然環(huán)境或生態(tài)平衡遭受破壞時,則稱該物質(zhì)為有害物質(zhì)。有毒物質(zhì):一般的定義為凡是以小劑量進入機體,通過化學(xué)或物理化學(xué)作用能夠?qū)е陆】凳軗p的物質(zhì)。有毒物質(zhì)是相對的劑量決定表14-1毒物毒性分級毒性分級大白鼠一次口服半數(shù)致死量（LD50mg/kg）人一次性致死量（g/kg）劇毒<1<0.05高毒1~500.05~0.5中等毒50~5000.5~5.0低毒500~50005.0~15微毒>5000>15二、食品中有害物質(zhì)的種類與來源食品中有害物質(zhì)分三大類：①是生物性有害物質(zhì),如黃曲霉、口蹄疫致病菌等；②是化學(xué)性有害物質(zhì),如DDT、氯丙醇、河豚毒素、重金屬、放射性元素等；③是物理性有害物質(zhì),如金屬屑、石子、動物排泄物等。1、內(nèi)源性危害：食品中天然存在的有毒有害成分，如河豚毒素、苦杏仁苷等；存在于食品中的生理作用成分，如蛋白酶抑制劑；食物中的營養(yǎng)不平衡。2、外源性危害：食品中的微生物污染，如經(jīng)口傳染的病菌、細菌毒素、霉菌毒素；人為摻假，有意加入的食品添加劑，如亞硝酸鹽；意外或偶然進入食品的化學(xué)物質(zhì)，如殘留農(nóng)藥、重金屬、多氯聯(lián)苯。

3、誘發(fā)性危害：在食品加工、儲藏過程中誘發(fā)食品內(nèi)或生物體內(nèi)生成有害物質(zhì)，如油脂氧化產(chǎn)生過氧化物、亞硝酸鹽與胺反應(yīng)生成亞硝基化合物。三、加強食品中有害物質(zhì)檢測的必要性食品危害的潛在來源：第二節(jié)食品中有害物質(zhì)常用的檢測方法薄層色譜法氣相色譜法高效液相色譜法質(zhì)譜法色—質(zhì)聯(lián)用酶聯(lián)免疫吸附劑測定第三節(jié)食品中農(nóng)藥殘留及其檢測殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺螨劑、植物生長調(diào)節(jié)劑、殺鼠藥…農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥施用后，殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝產(chǎn)物、降解物和雜質(zhì)的總稱。殘留的數(shù)量叫殘留量。農(nóng)藥殘留是目前影響我國食品和農(nóng)產(chǎn)品安全的主要因素，已經(jīng)給我國農(nóng)產(chǎn)品銷售、出口和消費者的身體健康帶來了嚴(yán)重影響。對人體危害：通過食物和水的攝入、空氣吸入和皮膚接觸等途徑對人體造成多方面的危害，如急、慢性中毒和致癌、致畸、致突變作用等；對環(huán)境危害：污染環(huán)境，破壞生態(tài)平衡。污染食品：使一些食品殘留少量農(nóng)藥。食品中農(nóng)藥殘留的來源：1.施用農(nóng)藥對農(nóng)作物的直接污染2.農(nóng)作物從污染的環(huán)境中吸收農(nóng)藥3.通過食物鏈、生物富集污染食品4.其他來源的污染：事故性污染主要農(nóng)藥有機氯殺蟲劑有機磷殺蟲劑擬除蟲菊殺蟲劑氨基甲酸酯殺蟲劑1.有機氯農(nóng)藥（Organochlorinepesticides,OCPs）主要有六六六粉(六氯環(huán)己烷)、DDT(二氯二苯三氯乙烷)毒性特點：難分解、半衰期10年以上，高殘留；污染食品嚴(yán)重，脂溶性強，蓄積于脂肪和脂肪高的組織；中等毒性，致癌、致畸作用。性質(zhì)：不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醇、石油醚、環(huán)己烷，對光、熱、酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定。特點：由于這類農(nóng)藥具有較高的殺蟲活性,殺蟲譜廣,對溫血動物的毒性較低,持續(xù)性較長,加之生產(chǎn)方法簡單,價格低廉,因此,這類殺蟲劑在世界上相繼投入大規(guī)模的生產(chǎn)和使用,其中,“六六六”、DDT等曾經(jīng)成為紅極一時的殺蟲劑品種。但,從20世紀(jì)70年代開始,許多工業(yè)化國家相繼限用或禁用某些OCPs,其中主要是DDT、“六六六”及狄氏劑。我國早已停止生產(chǎn)和使用有機氯農(nóng)藥。但由于其性質(zhì)穩(wěn)定,在自然界不易分解,屬高殘留品種,因此在世界許多地方的空氣、水域和土壤中仍能夠檢測出微量OCPs的存在,并會在相當(dāng)長時間內(nèi)繼續(xù)影響食品的安全性,危害人類健康。2.有機磷農(nóng)藥（OPPs）是含有C—P鍵或C—O—P、C—S—P、C—N—P鍵的有機化合物。應(yīng)用廣。（1）分類：高毒有機磷（早期發(fā)展，現(xiàn)已被禁止使用）

如對硫磷（1605）、內(nèi)吸磷（1059）、甲胺磷（3911）等；中等毒有機磷

如樂果、殺螟松、倍硫磷等；低毒有機磷

如敵百蟲、馬拉硫磷、雙硫磷等。（2）特點化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易分解，污染食品后殘留時間短，在生物體不易蓄積。在加工處理過程（碾磨、洗滌、去皮、烹調(diào)）中可減少。以急性毒性為主，表現(xiàn)出神經(jīng)中毒癥狀。長時間接觸對肝臟功能有損。過量或施用時期不當(dāng)或使用高毒農(nóng)藥是造成有機磷農(nóng)藥污染食品的主要原因特點：有機磷殺蟲劑由于藥效高,易于被水、酶及微生物所降解,很少殘留毒性等,因而從20世紀(jì)40年代到70年代得到飛速發(fā)展,在世界各地被廣泛應(yīng)用,有140多種化合物正在或曾被用作農(nóng)藥。但是,有機磷殺蟲劑存在抗性問題,某些品種存在急性毒性過高和遲發(fā)性神經(jīng)毒性問題。從70年代以后,有機磷殺蟲劑的研究和開發(fā)速度大大放慢了,但在殺蟲劑領(lǐng)域,目前它仍被廣泛使用。3.氨基甲酸酯類是一種高效、低毒、低殘留的農(nóng)藥。通式：常見的有：甲萘威、呋喃丹、速滅威等。甲萘威這些氨基甲酸酯農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)與日常生活中,主要用作殺蟲劑、殺螨劑、除草劑、殺軟體動物劑和殺線蟲劑等。20世紀(jì)70年代以來,由于有機氯農(nóng)藥受到禁用或限用,且抗有機磷農(nóng)藥的昆蟲品種日益增多,因而氨基甲酸酯的用量逐年增加,這就使得氨基甲酸酯的殘留情況倍受關(guān)注。4.擬除蟲菊酯類是模擬天然除蟲菊酯化學(xué)結(jié)構(gòu)而合成的農(nóng)藥。常用的有氯菊酯、溴菊酯、氯氰菊酯、甲醚菊酯。

特點：高效、低毒、低殘留，在環(huán)境中的降解以光解為主；對膽堿酯酶無抑制作用；親脂性強，可溶于多種有機溶劑，在水中的溶解度小,在酸性條件下穩(wěn)定，在堿性條件下易分解。1973年第一個對光穩(wěn)定的擬除蟲菊酯苯——醚菊酯開發(fā)成功之后,溴氰菊酯、氯氰菊酯、殺滅菊酯等優(yōu)良品種相繼問世。目前,已合成的菊酯數(shù)以萬計,迄今已商品化的擬除蟲菊酯有近40個品種,在全世界的殺蟲劑銷售額中占20％左右。擬除蟲菊酯主要應(yīng)用在農(nóng)業(yè)上,如防治棉花、蔬菜和果樹的食葉和食果害蟲,特別是在有機磷、氨基甲酸酯出現(xiàn)抗藥性的情況下,其優(yōu)點更為明顯。除此之外,擬除蟲菊酯還作為家庭用殺蟲劑被廣泛應(yīng)用,它可防治蚊蠅、蟑螂及牲畜寄生蟲等。食品中農(nóng)藥殘留分析檢測技術(shù)1.薄層色譜法（TLC）2.氣相色譜法（GC）占70%3.氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）4.液相色譜法（HPLC）5.液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）6.超臨界流體色譜（SFC）7.毛細管電泳（CE）8.免疫分析（IA）食品中有機氯農(nóng)藥殘留量測定GB/T5009.19①GC-ECD法配標(biāo)準(zhǔn)混合使用液樣品提?。ㄓ帽⒓和?、乙醚、石油醚等）與凈化（用H2SO4磺化）、濃縮（K—D減壓濃縮）、GC檢測、ECD（電子捕獲）檢測器。色譜柱用硬質(zhì)玻璃柱，若用不銹鋼柱，易引起農(nóng)藥分解。采樣液體樣品時，應(yīng)用玻璃瓶，不能用塑料瓶。檢測器的溫度不應(yīng)低于250℃，否則，檢測器很難平衡。注意尾吹氣流量及分流比。②TLC法食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定

GB/T5009.20-2003原理：果蔬中有機磷殘留提取有機溶劑凈化氣化注入GC

濃縮色譜柱中分離FPD檢測記錄色譜峰比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰外標(biāo)定量（多用峰高）蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測GB/T5009.199-2003方法一速測卡法（紙片法）實驗原理：膽堿脂酶可催化靛酚乙酸脂（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍色），有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿脂酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥的存在。實驗試劑：1、固化有膽堿脂酶和靛酚乙酸脂試紙卡片（速測卡）；2、pH7.5磷酸鹽緩沖液：分別稱取15.0g磷酸氫二鈉[Na2HPO4?12H2O]與1.59g無水磷酸二氫鉀[KH2PO4]，用500mL蒸餾水溶解。實驗步驟：1、整體測定法（1）選取具有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上.(2)取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。（3）將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。注意：每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。2、表面測定法（粗篩法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2～3滴緩沖液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。（2）取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。（3）放置10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。（4）將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。注意：每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。結(jié)果判斷：結(jié)果以酶被有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（陰性）表示。與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。對陽性結(jié)果的樣品，可用其他方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。注意事項及說明：1、速測卡靈敏度指標(biāo)如下表所示。部分農(nóng)藥檢出限參考表農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）甲胺磷1.7乙酰甲胺磷3.5久效磷2.5對硫磷1.7敵敵畏0.3甲萘威2.5水胺硫磷3.1敵百蟲0.3好年冬1.0馬拉硫磷2.0樂果1.3呋喃丹0.5氧化樂果2.32、速測卡符合率：在檢出的30份以上陽性樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗證，陽性結(jié)果的符合率應(yīng)在80%以上。3、蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提法，減少色素的干擾。方法二酶抑制率法（分光光度法）實驗原理：根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中加入生化反應(yīng)底物碘化硫代乙酰膽堿和乙酰膽堿酯酶，如果蔬菜不含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留或殘留量低，酶的活性就不被抑制，加入的底物就能被酶水解，水解產(chǎn)物與加入的顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)。如果蔬菜的提取液含有農(nóng)藥并殘留量較高時，酶的活性被抑制，底物就不被水解，當(dāng)加入顯色劑時就不顯色或顏色變化很小。用分光光度計在412nm處或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，就可以判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的情況。第四節(jié)食品中獸藥殘留及其檢測典型的獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。但是,隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展,一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的動物保健品或飼料添加劑,也屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用途有防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品的品質(zhì)等。獸藥殘留是指動物性產(chǎn)品的任何可食部分含有獸藥母化合物或其代謝物。獸藥最高殘留限量（MRLVD）是指某種獸藥而在食物中或食物表面產(chǎn)生的的最高允許獸藥殘留量（單位μg/kg,以鮮重計）。獸藥殘留主要是由于各種正常用藥和藥物濫用造成的,另外,休藥期(是指自停止給藥到動物獲準(zhǔn)屠宰或其動物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時間)過短,是造成動物性食品獸藥殘留過量的另一個重要原因。第五節(jié)食品中霉菌毒素及其檢測食品中黃曲霉毒素B1的測定GB/T5009.22—2003

黃曲霉毒素（AFT）是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，根據(jù)其在365nm紫外光下呈現(xiàn)的熒光顏色可分為B、G兩大類。根據(jù)Rf值不同，又分為B1、B2、G1、G2、M1、M2等，其中以AFTB1毒性、致癌性最強，且含量多。

常以B1為主要指標(biāo)。

黃曲霉毒素的基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素。

AFT主要污染：花生、花生油、玉米、大米、乳制品、腌制魚肉等，M1和M2主要存在于牛奶中。性質(zhì)：難溶于水，不溶于乙醚、石油醚及己烷。易溶于油、甲醇、丙酮、氯仿、苯及乙腈等有機溶劑。對光、熱、酸較穩(wěn)定，對堿和氧化劑則不穩(wěn)定。其純品為無色結(jié)晶，紫外線對低濃度AFT有破壞性。據(jù)統(tǒng)計全世界每年平均有2%的谷物由于霉變不能食用。霉菌毒素引起的中毒大多通過被霉菌污染的糧食，油料作物以及發(fā)酵食品等引起。霉菌毒素多數(shù)有較強的耐熱性,一般的烹調(diào)加熱方法不能使其破壞。當(dāng)人體攝入的霉菌毒素量達到一定程度后,可引起中毒。霉菌中毒往往表現(xiàn)為明顯的地方性和季節(jié)性，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突變等。薄層層析法原理

樣品中黃曲霉毒素B1，經(jīng)有機溶劑提取、濃縮、薄層分離后，在波長365nm紫外光下產(chǎn)生藍紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯示熒光的最低檢出量來測定黃曲霉毒素B1的含量。

儀器和試劑

(1)儀器小型粉碎機、樣篩、電動振蕩器、玻璃濃縮器、玻璃板5cm×20cm、薄層板涂布器、展開槽(內(nèi)25cm×6cm×4cm)、紫外光燈100一125w帶波長365nm濾光片、微量注射器(2)試劑①三氯甲烷、正己烷或石油醚(沸程30～60℃或

60～90℃)、甲醇、苯、乙腈、無水乙醚或乙醚經(jīng)無水硫酸鈉脫水、丙酮。以上試劑在試驗前需先進行空白試驗，如不干擾測定即可使用，否則需逐一進行重蒸。

②硅膠G(薄層色譜用)、三氟乙酸、無水硫酸鈉、氯化鈉、苯一乙腈(98+2)混合液、甲醇水溶液(55+45)。

③黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取1～1.2mgAFTB1標(biāo)準(zhǔn)品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀釋至100mL，避光、于冰箱4℃保存。此標(biāo)準(zhǔn)液濃度約為10ug／mL。先用紫外分光光度計測定其濃度，再用苯一乙腈混合液調(diào)整其濃度恰為10.0ug／mL。在350nm，AFTB1在苯一乙腈(98+2)混合液中的摩爾消光系數(shù)為19800。

④黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液：I液(1.0ug／mL)：取1mLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)液(10.0ug／mL)于10mL容量瓶中，用苯一乙腈混合液稀釋、定容。Ⅱ液(0.2ug／mL)：取I液1mL，按上法定容5mL。Ⅲ液(0.04ug／mL)：取液Ⅱ1mI，按上法定容5mI。⑤次氯酸鈉溶液(消毒用)：取100g漂白粉，加入500mL水，攪拌均勻。另將80g工業(yè)用碳酸鈉(Na2CO3·10H2O)溶于500mL溫水中。將兩液合并、攪拌、澄清、過濾。此液含次氯酸約25g／L。污染的玻璃器皿用次氯酸鈉溶液浸泡可達到去毒的效果。

分析步驟一、樣品處理

取大樣，經(jīng)粗碎及連續(xù)多次用四分法縮減至0.5～lkg后全部粉碎。糧食樣品全部通過20目篩，花生樣品全部通過10目篩，混勻。二、提取稱取20.00g經(jīng)粉碎樣品，置于250mL具塞錐形瓶中，加30mL正己烷或石油醚和100mL甲醇水溶液，瓶塞上涂一層水、蓋嚴(yán)防漏。振蕩30min，靜置片刻，以疊成折疊式的快速定性濾紙過濾于分液漏斗中，待下層甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞錐形瓶內(nèi)。取20.00mL甲醇水溶液(相當(dāng)于4.0g樣品)置于另一125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振搖2min、靜置分層，如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可滴加甲醇促使分層。放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約10g預(yù)先用三氯甲烷濕潤的無水硫酸鈉的定量慢速濾紙，過濾于50mL蒸發(fā)皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重復(fù)振搖提取，三氯甲烷層一并濾于蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗過濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中。

將蒸發(fā)皿放在通風(fēng)柜，于65℃水浴上通風(fēng)揮干，然后于冰盒上冷卻2～3min后，準(zhǔn)確加入1mL苯一乙腈混合液。用帶橡皮頭的滴管的管尖將殘渣充分混合，若有苯的結(jié)晶析出，將蒸發(fā)皿從冰盒上取出，繼續(xù)溶解、混合，晶體即消失，再用此滴管吸取上清液轉(zhuǎn)移于2mL的具塞試管中。三、測定

①單向展開法

a．薄板制備：稱取3g硅膠G，加2～3倍量的水，研磨1～2min呈糊狀后，倒入涂布器推成5cm×20cm，厚度約0.25mm的薄層板3塊。在空氣中干燥15min，在100℃活化2h，取出，放干燥器中保存。

b．點樣：在距薄層板下端3cm的基線上用微量注射器或血色素吸管滴加樣液。一塊板可滴加4個點，點距邊緣和點間距為lcm，點直徑約3mm，在同一板上滴加點的大小應(yīng)一致，滴加時可用吹風(fēng)機用冷風(fēng)邊吹邊加。滴加樣式如下：

第一點：10μLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.04μg／mL)。

第二點：20μL樣液。

第三點：20μL樣液+10μL0.04μg／mLAFTBl標(biāo)液。

第四點：20μL樣液+10μL0.2μg／mLAFTB1標(biāo)液。

c．展開與觀察：在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，預(yù)展12cm，取出揮干。再于另一展開槽內(nèi)加10mL丙酮一三氯甲烷(8+92)，展開10～12cm，取出，在紫外光下觀察結(jié)果。d．確證試驗:

第一點：10μL0.04μg／mLAFTBl標(biāo)準(zhǔn)使用液。第二點：20μL樣液于以上兩點各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反應(yīng)5min后，用吹風(fēng)機吹熱風(fēng)2min(板上溫度不高于40℃)，再于薄層板上滴加以下兩點。第三點：10μL0.04μg／mLAFTBl標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點：20μL樣液。按上法展開并觀察，樣液是否產(chǎn)生與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四兩點，可依次作為樣液與標(biāo)準(zhǔn)的衍生物空白對照。e．稀釋定量：

若樣液中熒光強度比最低檢出量強，則根據(jù)其強度估計，減少滴加微升數(shù)，或?qū)右合♂尯笤俚渭硬煌⑸龜?shù)，直至樣液點的熒光強度與最低檢出量的熒光強度一致為止。滴加式樣如下：第一點：l0μLAFTB1標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.04μg／mL)。第二點：根據(jù)情況滴加10μL樣液。第三點：根據(jù)情況滴加15μL樣液。第四點：根據(jù)情況滴加20μL樣液。f．結(jié)果計算：

式中：X一樣品中AFTBl的含量，ug／kg；V1一加入苯一乙腈混合液的體積，mL；V2—出現(xiàn)最低熒光時滴加樣液的體積，mL；D一樣液的總稀釋倍數(shù)；m1—加入苯一乙腈混合液溶解時相當(dāng)樣品的質(zhì)量，g；0.0004—AFTBl的最低檢出限量，ug。②雙向展開法（滴加兩點法）

(1)點樣：取薄層板三塊，在距下端3cm基線上滴加AFTB1標(biāo)液與樣液。即在距左邊緣0.8～1cm處各滴加10uLAFTB1(0.04ug／mL)標(biāo)準(zhǔn)液，在距左邊緣2.8～3cm處各滴加20uL樣液。然后在第二塊板的樣液點上加滴l0uLAFTBl(0.04ug／mL)標(biāo)準(zhǔn)液，在第三塊板的樣液點上加滴10uLAFTB1(0.2ug／mL)標(biāo)準(zhǔn)液。(2)展開：

a．橫向展開：10mL無水乙醚，展至板端后，取出揮干。根據(jù)情況，可再重復(fù)l～2次。b．縱向展開：以丙酮一三氯甲烷(8+92)展開至10～12cm為止。

(3)觀察與評定結(jié)果：

a．在紫外燈下觀察第一、二塊板，若第二塊板的第二點在AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點的相應(yīng)處出現(xiàn)最低檢出量，而第一板在與第二板的相同位置上未出現(xiàn)熒光，則樣品中AFTBl含量<5ug／kg.

b．若第一塊板在與第二塊板的相同位置上出現(xiàn)熒光點，則將第一塊板與第三塊板比較，看第三塊板上第二點與第一塊板上第二點的相同位置上的熒光點是否與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點重疊，如果重疊，再進行確證試驗。在具體測定中，三塊板可以同時做，也可按順序做。當(dāng)?shù)谝粔K板出現(xiàn)陰性時，第三塊板可以省略，如第一塊板為陽性，則第二塊板可省略，直接做第三塊。

(4)確認(rèn)試驗：另取薄層板二塊，于第四、五兩板距左邊緣0.8～1cm處，各滴加10uLATTB1(0.04ug／mL)標(biāo)準(zhǔn)液及一小滴三氟乙酸；在距左邊緣2.8～3cm處，于第四板滴加20uL樣液及一小滴三氟乙酸；于第五板滴加20uL樣液、10uLAFTBl(0.04ug／mL)標(biāo)準(zhǔn)液及一小滴三氟乙酸，反應(yīng)5min后，用熱風(fēng)吹2min(板上溫度不高于40℃)。再用雙向展開法展開后，觀察樣液是否產(chǎn)生與AFTB1標(biāo)準(zhǔn)點重疊的衍生物。觀察時，可將第一板作為樣液的衍生物空白板。若樣液AFTB1含量較高時，則將樣液稀釋后，按單向展開法中d做確認(rèn)試驗。(5)稀釋定量：(6)結(jié)果計算：

同單向展開法。

說明及注意事項

用過后受污染的玻璃器皿，應(yīng)經(jīng)次氯酸溶液(25g／L)，浸泡消毒數(shù)小時后再清洗之！

酶聯(lián)免疫(ELISA)法

實驗原理：

采用間接競爭ELISA方法，樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)提取、脫脂、濃縮后與定量特異性抗體反應(yīng)，多余的游離抗體則與酶標(biāo)板內(nèi)的包被抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)記物和底物后顯色，與標(biāo)準(zhǔn)比較測定含量。主要的食品包裝材料及其有害物的種類包裝材料類別包裝材質(zhì)可能污染物備注熱塑性塑料聚乙烯（PE）單體乙烯,低聚乙烯,增塑劑、穩(wěn)定劑不宜盛裝油脂；其再生品不可作食品包裝材料聚丙烯（PP）增塑劑、穩(wěn)定劑可包裝各種食品,其再生品不可作食品包裝材料聚苯乙烯（PS）常殘留有苯乙烯、乙苯、甲苯、異丙苯等揮發(fā)性物質(zhì)FDA規(guī)定用于食品包裝的該材料苯乙烯含量小于1％聚氯乙烯（PVC）單體氯乙烯、增塑劑、穩(wěn)定劑氯乙烯有麻醉、致癌、致畸作用食品加工過程中形成的有害物質(zhì)煙熏、油炸、焙烤、腌制等加工技術(shù),在改善食品的外觀和質(zhì)地,增加風(fēng)味,延長保存期,鈍化有毒物質(zhì)（如酶抑制劑、紅細胞凝集素）以及提高食品的可利用度等方面發(fā)揮了很大作用,但隨之還產(chǎn)生了一些有害物質(zhì),相應(yīng)的食品存在著嚴(yán)重的安全性問題,對人體健康可產(chǎn)生很大的危害。在這幾類食品加工過程中形成的有害物質(zhì)主要可分為三類：N-亞硝基化合物、多環(huán)芳烴和雜環(huán)胺。在習(xí)慣吃熏魚的冰島、芬蘭和挪威等國家,胃癌的發(fā)病率非常高。我國胃癌和食管癌高發(fā)區(qū)的居民也有喜食煙熏肉和腌制蔬菜的習(xí)慣。N-亞硝基化合物N-亞硝基化合物(NOC)是一大類有機化合物,根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu),可分為兩類：一類為亞硝胺,另一類為N-亞硝酰胺。通過對300多種N-亞硝基化合物的研究,已經(jīng)證明約90％具有強致癌性,其中N-亞硝酰胺是終末致癌物,亞硝胺需要在體內(nèi)活化后才能成為致癌物。含有N-亞硝基化合物較多的食品有：干魷魚（30