版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
微生物工程發(fā)酵第二章菌種制備原理與技術(shù)第一頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.1發(fā)酵工業(yè)微生物菌種概述菌種是微生物工程的核心;選育、保藏、復(fù)壯第二頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.1.2發(fā)酵工業(yè)常用微生物種類細(xì)菌主要生產(chǎn)氨基酸、核酸、酶、多糖、有機(jī)酸等常用菌種:Escherichiacoli;Bacillussubtilis;Lactobacilluslactis;Corynebacteriumglutamicum第三頁,共四十三頁,2022年,8月28日放線菌主要生產(chǎn)抗生素、某些特定的酶;常用菌種:Streptomyceslividans;S.coelicolor;S.hygroscopicus;Micromonosporaechinospora;Actinoplanesferrugineus;第四頁,共四十三頁,2022年,8月28日酵母主要生產(chǎn)酒精、有機(jī)酸、單細(xì)胞蛋白常用菌種:SaccaromycescerevisiaePichiapastorisCandidaglabrataC.tropicalsPhaffiarhodozymaYarrowialipolitica第五頁,共四十三頁,2022年,8月28日霉菌主要生產(chǎn):抗生素、有機(jī)酸、酶、色素;PenicilliumchrysogenumAspergillusnigerA.oryzaeRhizopusoryzae第六頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.1.3發(fā)酵工業(yè)微生物的基本要求遺傳穩(wěn)定易于產(chǎn)生繁殖體必須是純種或明確的少數(shù)幾種菌組成的簡單混菌系統(tǒng),不應(yīng)帶有雜菌及噬菌體;種子的生長必須旺盛、迅速;產(chǎn)生所需產(chǎn)物的時(shí)間短;容易分離提純;有自身保護(hù)機(jī)制,抵抗雜菌和噬菌體污染的能力強(qiáng);能保持較長的良好經(jīng)濟(jì)性能;菌株對(duì)誘變劑處理比較敏感,可能選育出高產(chǎn)的菌株;菌種不是病原菌,不產(chǎn)生任何有害的生物活性物質(zhì)和毒素第七頁,共四十三頁,2022年,8月28日菌種的制備原理和方法菌株獲得的主要方法:向菌種保藏機(jī)構(gòu)索??;從保藏機(jī)構(gòu)獲取菌種進(jìn)行分離篩選有兩個(gè)好處:經(jīng)濟(jì)性指導(dǎo)性
從自然界分離篩選;從某些發(fā)酵制品中分離;第八頁,共四十三頁,2022年,8月28日從自然界篩選目標(biāo)菌株的方法與步驟含微生物樣品的采集(含微生物樣品的富集培養(yǎng))微生物的分離野生型目的菌株的篩選鑒定第九頁,共四十三頁,2022年,8月28日微生物的分離
稀釋涂布法劃線法;第十頁,共四十三頁,2022年,8月28日生化反應(yīng)法;
高溫下培養(yǎng):分離嗜熱細(xì)菌;培養(yǎng)基中不含N:分離固氮菌;培養(yǎng)基加抗生素:分離抗性菌;第十一頁,共四十三頁,2022年,8月28日組織分離法
第十二頁,共四十三頁,2022年,8月28日合理的篩選策略是關(guān)鍵!第十三頁,共四十三頁,2022年,8月28日氨基酸產(chǎn)生菌的篩選
樣品
分離
初篩(除真菌)
在分離平板上生長獲得多個(gè)單菌落復(fù)印平板(copy法)
平板培養(yǎng),其中有產(chǎn)生氨基酸的菌落分泌氨基酸對(duì)應(yīng)到copy前相應(yīng)
u.v線殺死長好的菌落
位置,找到目的菌落
再鋪上一層含營養(yǎng)缺陷型試驗(yàn)菌的瓊脂
培養(yǎng)后
產(chǎn)氨基酸菌落周圍有生長圈
目的菌落進(jìn)行液體培養(yǎng),對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定量測定篩選產(chǎn)物含量高的菌株第十四頁,共四十三頁,2022年,8月28日對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行菌種篩選時(shí),有兩條經(jīng)驗(yàn):進(jìn)化上向上兼容;次生代謝在進(jìn)化上后移,芽孢菌以上更有篩選意義/jpkc第十五頁,共四十三頁,2022年,8月28日分離篩選工作在實(shí)際中應(yīng)用的幾個(gè)方面從被污染的生產(chǎn)及科研用菌中分離目的菌;
生產(chǎn)中長期使用的菌種的定期分離篩選;從各種育種方法處理的微生物材料中分離篩選適于工業(yè)目的的優(yōu)良菌株;從已知菌種和大自然中分離新菌株尋找新的發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)生菌;尋找老產(chǎn)品的新的優(yōu)良菌株。/jpkc第十六頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.1.5適應(yīng)性進(jìn)化(菌株馴化)Adaptiveevolution通過人工措施使微生物逐步適應(yīng)某一條件,而定向選育微生物的方法;(檸檬酸)第十七頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.1.6菌種的保藏保藏、退化、復(fù)壯第十八頁,共四十三頁,2022年,8月28日菌種的退化和防止菌種退化:菌株由于移接傳代或保藏之后,群體中某些生理特征或形態(tài)特征逐漸減退或完全喪失的現(xiàn)象,主要表現(xiàn)為生長速度變慢和目標(biāo)產(chǎn)物生產(chǎn)能力的下降;第十九頁,共四十三頁,2022年,8月28日防止退化的方法:盡量減少傳代;經(jīng)常進(jìn)行純化;創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件;單核細(xì)胞的移植傳代;采用有效的保藏方法;第二十頁,共四十三頁,2022年,8月28日菌種的復(fù)壯
在菌種已經(jīng)發(fā)生衰退的情況下,通過純種分離和測定生產(chǎn)性能等方法,從衰退的群體中找到尚未衰退的個(gè)體,以達(dá)到恢復(fù)該菌種原有性狀的措施;方法:純種分離(單細(xì)胞分離);
淘汰法;
寄生體內(nèi)復(fù)壯法;第二十一頁,共四十三頁,2022年,8月28日工業(yè)微生物菌種的保藏不死、不變、不亂;第二十二頁,共四十三頁,2022年,8月28日斜面保藏法4℃;非長期保存;1-3個(gè)月需傳代,可傳3-4代;第二十三頁,共四十三頁,2022年,8月28日液體石蠟油保藏法;尤其適用于絲狀擔(dān)子菌;一般存活期為5~7年,有的可以達(dá)到10年以上,但以2~3年轉(zhuǎn)管第二十四頁,共四十三頁,2022年,8月28日冷凍干燥保藏法;5-10年,不適合絲狀真菌;第二十五頁,共四十三頁,2022年,8月28日液氮超低溫保藏法;-196℃;第二十六頁,共四十三頁,2022年,8月28日甘油低溫保存:15%甘油,-80℃;第二十七頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.2微生物誘變育種2.2.1誘變育種目的提高目的物產(chǎn)量;改善菌種特性、提高產(chǎn)物質(zhì)量;簡化工藝條件;開發(fā)新品種;第二十八頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.2.2誘變育種基本步驟①出發(fā)菌株originalstrain的選擇:具備一定生產(chǎn)能力或某種有利性狀;純種;已發(fā)生過其他突變;對(duì)誘變劑敏感的增變變異株;第二十九頁,共四十三頁,2022年,8月28日②出發(fā)菌株的純化③單細(xì)胞懸液的制備;④誘變劑及誘變劑量的選擇⑤誘變處理方式(單因子、復(fù)合因子)⑥誘變菌株的篩選第三十頁,共四十三頁,2022年,8月28日高通量篩選技術(shù):第三十一頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3微生物原生質(zhì)體育種
和基因組改組育種2.3.1原生質(zhì)體的特征對(duì)外界變化更敏感;對(duì)誘變劑更敏感;對(duì)某些噬菌體失去敏感;第三十二頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3.2微生物原生質(zhì)體再生育種①出發(fā)菌株的選擇②菌體的活化③原生質(zhì)體的制備④原生質(zhì)體再生⑤菌株的分離⑥篩選第三十三頁,共四十三頁,2022年,8月28日原生質(zhì)體的制備:酶解法預(yù)處理:
細(xì)菌(青霉素);放線菌(甘氨酸);
霉菌(脂肪酶);酵母菌(EDTA或巰基乙醇)置于穩(wěn)定劑中;酶的選擇:放線菌、細(xì)菌(溶菌酶)霉菌(蝸牛酶或纖維素酶)酵母(蝸牛酶或葡聚糖酶)第三十四頁,共四十三頁,2022年,8月28日原生質(zhì)體再生(細(xì)胞壁)雙層平板上,半固體培養(yǎng)基中;第三十五頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3.3微生物原生質(zhì)體誘變育種原生質(zhì)體技術(shù)+誘變育種技術(shù)出發(fā)菌株的選擇菌體的活化原生質(zhì)體的制備誘變育種原生質(zhì)體再生菌株的分離篩選第三十六頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3.4微生物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù)整條染色體DNA、片段DNA或者質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體獲得轉(zhuǎn)化子的育種技術(shù);出發(fā)菌株的選擇菌體的活化原生質(zhì)體的制備轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體再生菌株的分離篩選第三十七頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3.5微生物原生質(zhì)體融合技術(shù)用物理、化學(xué)或生物學(xué)的方法處理兩親株原生質(zhì)體,促使其融合,經(jīng)染色體交換、重組而達(dá)到雜交的目的,通過篩選而得到集二者優(yōu)良性狀于一體的穩(wěn)定融合子;第三十八頁,共四十三頁,2022年,8月28日出發(fā)菌株的選擇(具有較大遺傳差異的近親菌株)菌體的活化原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體再生菌株的分離篩選第三十九頁,共四十三頁,2022年,8月28日原生質(zhì)體融合
兩親株原生質(zhì)體混合于高滲透壓的穩(wěn)定劑中,在促融劑的誘導(dǎo)作用下,接觸融合成異核體,經(jīng)核融合成雜合二倍體,再經(jīng)染色體交換產(chǎn)生重組體,稱融合子;物理方法:電融合、激光融合化學(xué)方法:PEG(1000-6000分子量)第四十頁,共四十三頁,2022年,8月28日2.3.6基因組該組育種在微生物全基因組改造中快速進(jìn)行特定群體的基因交換重組,從而增加群體遺傳多樣性,改良群體中個(gè)體性能等的連續(xù)遺傳改變及表型選擇過程;人工誘變+原生質(zhì)體融合第四十
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 二零二四萬科高品質(zhì)住宅區(qū)商品房買賣合同3篇
- 二零二四學(xué)校食堂特色菜系承包與研發(fā)合同3篇
- 2025年度企業(yè)并購重組財(cái)務(wù)盡職調(diào)查合同2篇
- 二零二五版礦產(chǎn)資源中介服務(wù)合同范本6篇
- 二零二五版?zhèn)€人與個(gè)人間消費(fèi)信貸合同樣本3篇
- 2025年投標(biāo)員實(shí)習(xí)報(bào)告撰寫與實(shí)習(xí)反饋優(yōu)化合同3篇
- 2024離婚協(xié)議范本:離婚法律事務(wù)處理參考樣式18篇
- 2025版旅行社民俗文化體驗(yàn)游合同樣本3篇
- 年度調(diào)直機(jī)市場分析及競爭策略分析報(bào)告
- 2024碎石加工承包合同2
- 《黃河頌》示范公開課教學(xué)PPT課件【統(tǒng)編人教版七年級(jí)語文下冊】
- TSEESA 010-2022 零碳園區(qū)創(chuàng)建與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范
- GB/T 19867.5-2008電阻焊焊接工藝規(guī)程
- 2023年市場部主管年終工作總結(jié)及明年工作計(jì)劃
- 第三章旅游活動(dòng)的基本要素課件
- 國有資產(chǎn)出租出借審批表(學(xué)校事業(yè)單位臺(tái)賬記錄表)
- 安全生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)管控實(shí)施細(xì)則
- 30第七章-農(nóng)村社會(huì)治理課件
- 考研考博-英語-東北石油大學(xué)考試押題三合一+答案詳解1
- 出國學(xué)生英文成績單模板
- 植物細(xì)胞中氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的一些已知或未知的功能
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論