動物墊料中志賀菌檢測方法編制說明-內(nèi)蒙古

編制說明項目名稱：動物墊料中志賀氏菌檢測方法項目編號：內(nèi)質(zhì)監(jiān)標(biāo)函（ 2018）154號-108編制單位：呼和浩特海關(guān)編制時間：2018.6-2019.12一、工作簡況本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)《局關(guān)于下達(dá)2018年第一批內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項目計劃的通知》[內(nèi)質(zhì)監(jiān)標(biāo)函（2018）154號]，本標(biāo)準(zhǔn)是由呼和浩特海關(guān)提出并歸口，項目計劃編號為108。呼和浩特海關(guān)牽頭成立由相關(guān)領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員和具有標(biāo)準(zhǔn)化專業(yè)知識的人員組成的標(biāo)準(zhǔn)起草組。起草組在充分調(diào)查研究、綜合分析和試驗驗證的基礎(chǔ)上，起草標(biāo)準(zhǔn)初稿和編制說明，并廣泛征求意見。對意見進(jìn)行匯總整理，修改完善標(biāo)準(zhǔn)初稿，形成地方標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。第一起草單位：中華人民共和國呼和浩特海關(guān)；第二起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。主要起草人：趙治國、延涵、盛萬里、王海艷、陳林軍、崔強、敖威華、李軍燕、羅曉平、韓祎陟。二、標(biāo)準(zhǔn)制定的背景及意義動物墊料與動物關(guān)系密切。近年來隨著生物科學(xué)研究的飛速發(fā)展，動物作為其研究中不可缺少的重要組成部分，備受各國政府的重視和科學(xué)家的關(guān)注。墊料是為動物營造舒適的人工環(huán)境，進(jìn)行環(huán)境控制的基礎(chǔ)條件和必要材料，是對動物產(chǎn)生直接作用和影響的環(huán)境因素。動物墊料與動物健康、福利息息相關(guān)，同時也對養(yǎng)殖業(yè)、動物及其相關(guān)科研方面甚至社會經(jīng)濟發(fā)展有十分重大的影響。因此，墊料的質(zhì)量評定與控制非常必要。我國動物墊料標(biāo)準(zhǔn)化、商品化尚處于初級階段。歐美等發(fā)達(dá)國家早已實行墊料商品化生產(chǎn)，有專業(yè)的工廠，并且各道工序的質(zhì)量要求非常嚴(yán)格。但我國對動物墊料的研究還處于初級階段，與墊料相關(guān)的文獻(xiàn)報道甚少，墊料生產(chǎn)監(jiān)管環(huán)節(jié)薄弱，檢測標(biāo)準(zhǔn)缺乏。近年來我國政府及從業(yè)人員逐漸認(rèn)識到動物墊料中存在的問題，開始對墊料質(zhì)量評價方面的問題進(jìn)行改進(jìn)。因此要想使動物的質(zhì)量管理與國際接軌，動物墊料生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化、商品化就變得至關(guān)重要。我國動物墊料標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量管理相對滯后，影響相關(guān)行業(yè)發(fā)展。我國對動物墊料的研究才剛剛起步，現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)和實驗動物相關(guān)管理條例中，對動物墊料的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)定幾乎空白，稀數(shù)資料對于墊料的規(guī)定只有：應(yīng)選用吸濕性好、塵埃少、無異味、無毒性、無油脂的材料；須經(jīng)消毒、滅菌后方可使用。如此籠統(tǒng)的規(guī)定在一定程度上制約了我國動物墊料標(biāo)準(zhǔn)不能緊跟國際標(biāo)準(zhǔn)， 同時限制了藥品、生物制品、動物等產(chǎn)品的出口，還使科研論文將不能被同行接受。因此要想提高相關(guān)學(xué)科競爭力，就必須加強墊料標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量管理，從動物墊料微生物指標(biāo)監(jiān)測入手。我國動物墊料微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)幾乎空白， 亟待建立相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。近年來，我國政府及從業(yè)人員逐漸認(rèn)識到動物墊料對動物健康及下游產(chǎn)業(yè)的重大意義，墊料相關(guān)研究報道逐年增多，積累了一定的理論基礎(chǔ)。但目前，我國尚未對國內(nèi)墊料質(zhì)量建立統(tǒng)一評價體系、風(fēng)險分析、國家標(biāo)準(zhǔn)及配套法規(guī)。其中，墊料中微生物特別是致病微生物的含量對動物健康、福利和產(chǎn)品等影響重大，但目前動物墊料中微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)屬于空白，亟待建立科學(xué)完善的動物墊料微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)，該工作將對國內(nèi)墊料建立統(tǒng)一質(zhì)量評價體系、風(fēng)險分析及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)等有力促進(jìn)。動物墊料中志賀氏菌對動物的危害極大。 動物墊料志賀氏菌是影響動物健康和動物實驗結(jié)果的國際公認(rèn)的重要環(huán)境因素之一， 因此動物墊料中志賀氏菌的檢測十分重要。志賀氏菌屬的細(xì)菌，是細(xì)菌性痢疾的病原菌，屬于腸桿菌科，分4個群：痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌、宋內(nèi)氏志賀氏菌。由志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾是最為常見的，它不僅可以通過食物和水源傳播，也可以通過糞口傳播和接觸傳播。造成志賀氏菌感染的大多數(shù)原因是由環(huán)境衛(wèi)生惡劣、食材或者人類、動物攜帶志賀氏菌等原因造成的，也通常通過水源污染和接觸傳播引起。人和靈長類動物是志賀氏菌的最宜寄主，但是近年來我國也有養(yǎng)雞場大規(guī)模爆發(fā)志賀氏菌感染的事件。 據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，全球每年約有1.2億志賀氏菌引起嚴(yán)重腸道感染的病例，估計造成 60余萬死亡病例。10—100個志賀氏菌，經(jīng)口投喂即可造成腸道感染。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，在志賀氏菌流行的季節(jié)，養(yǎng)殖場周圍的床鋪、桌椅、門把手等生活用具，甚至是感染者的手指上都可以檢出志賀氏菌。志賀氏菌引起的疾病不論在發(fā)達(dá)國家還是在發(fā)展中國家都嚴(yán)重地?fù)p害著動物及人類的健康，也給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失。我國食源性致病菌中，由志賀氏菌引起的感染人數(shù)占細(xì)菌性食源性疾病總病例的 8.5%。志賀氏菌病的危害如此之大，使用志賀氏氏菌污染的墊料容易引起動物發(fā)病及攜帶病菌， 含有志賀氏菌的動物產(chǎn)品又會導(dǎo)致公共衛(wèi)生事件的發(fā)生。動物體內(nèi)排出的志賀氏菌，即可能污染食物導(dǎo)致人的食物中毒，也可能由于人類接觸而造成的疾病的發(fā)生。因此檢測墊料中志賀氏菌成為重中之重。建立動物墊料志賀氏菌檢測標(biāo)準(zhǔn)，保障動物健康急不可待。動物墊料與動物糞便直接接觸，容易滋生細(xì)菌，尤其是腸道致病微生物，致使墊料被志賀氏菌污染，從而威脅動物的健康與福利，并且對養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展與國際間動物及產(chǎn)品貿(mào)易帶來巨大的影響，甚至威脅到人類社會的生產(chǎn)與生活。但是對于動物墊料志賀氏菌檢測標(biāo)準(zhǔn)幾乎空白，還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)和方法，所以建立動物墊料志賀氏菌檢測標(biāo)準(zhǔn)已刻不容緩。本實驗室具有多年微生物檢測的經(jīng)驗，本方法的開發(fā)和應(yīng)用，在檢測技術(shù)方面填補我區(qū)的空白、彌補了自治區(qū)沒有現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的不足，能夠使動物墊料中志賀氏菌的檢測更加高效、準(zhǔn)確、安全。本方法的開發(fā)和應(yīng)用將會使我區(qū)在動物墊料中志賀氏菌的檢測先進(jìn)性方面達(dá)到國內(nèi)領(lǐng)先水平，為我區(qū)動物墊料質(zhì)量安全管理部門更快更好的管控提供可靠保障。因此，加強動物墊料中志賀氏菌的檢測對確保全區(qū)農(nóng)業(yè)持續(xù)、健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。三、主要起草過程2018.06-2018.08 地標(biāo)前期基礎(chǔ)工作：收集動物墊料樣本，查閱志賀氏菌資料，檢索志賀氏菌檢測的相關(guān)文獻(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)。2018.10-2019.09 前期實驗條件的摸索：包括前處理方法的優(yōu)化、對照，不同墊料中志賀氏菌的檢出率，最終確定實驗方案，編寫編制說明。2019.10-2019.11 驗證單位進(jìn)行驗證。2019.12 編寫地標(biāo)并定初稿。四、現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》和GB/T20001.4-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗方法標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)則編寫。還參照相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)編寫指南的要求。在編制本標(biāo)準(zhǔn)的過程中參考了以下標(biāo)準(zhǔn)： ISO21567：2004《Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Horizontalmethodforthedetectionofshigellaspp.》、《美國FDA細(xì)菌學(xué)分析手冊第八版（BAM）志賀氏菌》、GB14925-2010《實驗動物環(huán)境及設(shè)施》、 GB4789.5-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗志賀氏氏菌檢驗》、GB4789.31-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體診斷檢驗》、GB/T14926.47-2008《實驗動物 志賀菌檢測方法》、GB/T8381.2-2005《飼料中志賀氏菌的檢測方法》。綜合參考了國內(nèi)外與志賀氏菌檢測相關(guān)的檢測標(biāo)準(zhǔn)，力求該標(biāo)準(zhǔn)能夠高效準(zhǔn)確的檢測墊料中志賀氏菌，同時兼顧標(biāo)準(zhǔn)的廣泛應(yīng)用。本標(biāo)準(zhǔn)完全符合現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，不存在任何與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標(biāo)準(zhǔn)相違背之處。相關(guān)強制性標(biāo)準(zhǔn)2項：GB14925-2010《實驗動物環(huán)境及設(shè)施》，本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了實驗動物及動物實驗設(shè)備和環(huán)境的技術(shù)要求及檢測方法，同時規(guī)定了墊料、飲水和籠具的原則要求。但針對墊料該標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了“墊料的材質(zhì)應(yīng)符合動物的健康和福利要求，應(yīng)滿足吸濕性好、塵埃少、無異味、無毒性、無油脂、耐高溫、耐高壓等條件；墊料必須經(jīng)滅菌處理后方可使用”。本地標(biāo)適用于墊料中志賀氏菌檢測，明確規(guī)定了不同類別墊料取樣方法，標(biāo)準(zhǔn)中志賀氏菌鑒定過程增加了新的鑒定手段，確保檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。五、主要內(nèi)容及檢測方法的確定5.1取樣方法的確定及優(yōu)化根據(jù)動物墊料的物理性狀將其分為顆粒狀 /粉末狀墊料和平面狀墊料，針對不同性狀的墊料采取不同的取樣方法。顆粒狀或粉末墊料樣品取樣方法國內(nèi)外食品和飼料中志賀氏菌檢測法中常用的取樣方法為稱取法， 本標(biāo)準(zhǔn)中針對顆粒狀或粉末墊料樣品（木屑、玉米芯、秸稈、紙屑等）參考通用做法采用稱取25g的方法進(jìn)行取樣。平面墊料樣品取樣方法針對平面墊料（膠墊、托盤等）采用表面涂抹取樣法，無菌操作將涂抹 25cm2-100cm2平面樣品的棉拭子置入裝有 25m