中藥比較藥代動(dòng)力學(xué)研究思路與應(yīng)用宋敏課件

1中藥比較藥代動(dòng)力學(xué)研究思路與應(yīng)用2中藥研究現(xiàn)狀中藥研究熱點(diǎn)：質(zhì)量控制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ) 質(zhì)量控制：DNA分子標(biāo)記技術(shù)建立部分動(dòng)物藥的鑒別方法采用生物自顯影技術(shù)、細(xì)胞膜技術(shù)、生物活性測(cè)定等生物方法建立藥材的定性鑒別和定量分析方法采用“一標(biāo)多測(cè)”技術(shù)建立多成分含量測(cè)定方法；采用指紋圖譜分析法建立部分藥材的整體質(zhì)量控制方法--逐步由單一指標(biāo)性成分定性定量向活性、有效成分及生物測(cè)定的綜合檢測(cè)過(guò)渡

3中藥藥代動(dòng)力學(xué)∈藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究目前，研究手段大多與化學(xué)藥物相類似，針對(duì)已知活性成分單體進(jìn)行研究，但單味中藥即是一個(gè)化學(xué)分子庫(kù)，且有效成分不甚明確，相互間可能存在的影響關(guān)系不明確。thekavaextractincreasedtheoralbioavailabilityofkawaininratwhichwasalsothemaincauseoftheadversedrugreactionPharmacokineticsanddispositionofthekavalactonekawain:interactionwithkavaextractandkavalactonesinvivoandinvitro.Drug.Metab.Dispos.2005,33,1555–1563.中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究現(xiàn)狀5中藥藥代動(dòng)力學(xué)有效成份單體與其在中藥提取物中的體內(nèi)過(guò)程并不一致，勢(shì)必在藥理作用上得以體現(xiàn)SuchasdihydrotanshinoneandcryptotanshinonewerelessactiveinacetylcholinesteraseinhibitorywhenisolatedRen,Y.H.,Peter,J.H.,Robert,C.H.,Melanie-Jayne,R.H.,2004.NovelditerpenoidacetylcholinesteraseinhibitorsfromSalviamiltiorrhiza.PlantaMed.2004,70,201–204.6中藥藥代動(dòng)力學(xué)藥理作用差異salvinolicacidB,whichisthemainhydrophiliccomponentinS.miltiorrhizaBge.,showedlowereffectiveconcentrationininvitroangiogenesisstudythanthecrudeextract

Crude

extractofSalviamiltiorrhizaandsalvianolicacidBenhancein

vitroangiogenesisinmurineSVRendothelialcellline.Planta

Med.2003,69,26-32中草藥間的相互配伍反應(yīng)及與其他藥物的相互作用日益得到重視，但仍需進(jìn)一步研究7

挖掘丹參藥材中共存組份之間可能存在的相互影響情況，認(rèn)識(shí)丹參藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為臨床用藥提供指導(dǎo)，為新藥開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。第一部分

丹參提取物有效成分比較藥代動(dòng)力學(xué)9丹參水溶性成分:丹酚酸B和原兒茶醛

丹酚酸B：丹參水溶性成分中含量最高和藥典規(guī)定的含量測(cè)定指標(biāo)成分。 原兒茶醛：丹酚酸B在體外可能的降解產(chǎn)物。10實(shí)驗(yàn)條件ThermoFinniganSurveyorLC-TSQQuantumUltraAM液相色譜串聯(lián)四極質(zhì)譜系統(tǒng)(美國(guó)菲尼根質(zhì)譜公司)。色譜柱：Waters-C18250mm4.6mm,5m (預(yù)柱為C18,10mm4.6mm,5m)；流動(dòng)相：甲醇(A)－1％冰乙酸(B)為流動(dòng)相， 梯度洗脫：0min(40％A)-4min(40％A)-4.1min(80％A)-10min(80％A)；流速：1.0mL·min-1，柱后分流，0.3mL·min-1進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)器；進(jìn)樣量：20l。一、原兒茶醛的藥動(dòng)學(xué)研究11質(zhì)譜圖Massspectraofprotocatechualdehyde(A)andinternalguaiacol(B)AB13藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)Sprague-Dawley大鼠6只，雌雄各半，體重250±10g，由南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于灌藥4小時(shí)后給食。大鼠灌胃給藥原兒茶醛62mg·kg-1。分別于給藥后2、5、10、15、20、30、40min和1.0、1.5、2.0、3.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過(guò)的試管中，3000r·min-1離心10min，轉(zhuǎn)移血漿，置-20℃保存待測(cè)。14原兒茶醛藥－時(shí)曲線Meanplasmaconcentration-timecurveafterigprotocatechualdehyde62mg·kg-1inrat達(dá)峰時(shí)間在10～15min，而后以極快的速度消除，180min后只能測(cè)到少數(shù)大鼠的血藥濃度。15色譜條件與質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件 丹酚酸B是三分子丹參素和一分子咖啡酸的縮合物，雖然在負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式下也可生成m/z717的[M-H]-，繼而經(jīng)二級(jí)碰撞脫去一分子丹參素產(chǎn)生子離子m/z519[M-198-H]-，但在相同的碰撞能量下也可生成脫去兩分子丹參素的子離子m/z321，兩者豐度相差不大，不夠穩(wěn)定如圖所示；相比較正離子監(jiān)測(cè)模式下[M+Na]＋峰m/z741較穩(wěn)定，且其子離子m/z561為脫去一分子咖啡酸后生成，豐度較強(qiáng)，因此被選用。ABNegativemode; B.Positivemode二、丹酚酸B的藥動(dòng)學(xué)研究17三、丹參水溶性提取物的中

丹酚酸B和原兒茶醛的藥動(dòng)學(xué)灌胃試液的配制：取丹參干燥藥材粉末500g，水1000mL提取三次，每次1hour，過(guò)濾后濾液濃縮，再分別用60%,85%和95%的乙醇沉淀鞣質(zhì)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，用適量生理鹽水溶液即得，HPLC-UV測(cè)定其中丹酚酸B含量為26mg/mL，原兒茶醛為6.2mg/mL。18血藥濃度經(jīng)時(shí)過(guò)程

大鼠灌胃給藥丹參水提物（其中相當(dāng)于丹酚酸B260mg·kg-1和原兒茶醛62mg·kg-1）后的丹酚酸B和原兒茶醛的藥－時(shí)曲線。Meanplasmaconcentration-timeprofilesofsalvianolicacidBandprotocatechualdehydeinratafterigofDanshenwatersolubleextract19小結(jié)與討論原兒茶醛：大鼠灌胃給藥原兒茶醛單體后的AUC為64754.0ng/ml·min，而灌胃給藥含有相同含量原兒茶醛的丹參水提物后，其AUC只有25067.9ng/ml·min，即單體給藥的AUC為提取物給藥的2.6倍，Cmax為5.1倍，MRT為0.4倍，可見(jiàn)原兒茶醛單體給藥時(shí)吸收較好，而消除快；以提取物方式給藥后的原兒茶醛呈一房室模型，即只在中央室少量吸收，未向周邊室分布就開(kāi)始消除。Comparisonoftheplasmaconcentration-timeprofilesofprotocatechualdehyde21小結(jié)

經(jīng)過(guò)大鼠原兒茶醛和丹酚酸B的藥動(dòng)學(xué)比較研究可知，丹參藥材水溶性提取物中的其他組份可直接影響原兒茶醛和丹酚酸B的吸收及消除，分別對(duì)它們產(chǎn)生抑制和促進(jìn)作用。因此，利用中藥中含有的“標(biāo)志成分”的純品（或標(biāo)準(zhǔn)品）進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究是必要的，這也是目前中藥藥動(dòng)學(xué)研究的重要方法，可以提供較好的參考，但卻不能以此代替中藥材提取物或中藥復(fù)方制劑（更復(fù)雜）的藥動(dòng)學(xué)研究。22丹參脂溶性成分的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究

同時(shí)分析檢測(cè)7個(gè)活性成分，獲得其中5個(gè)成分的大鼠體內(nèi)的經(jīng)時(shí)過(guò)程Meanratio-timeproseveralcompoundsinDanshenaceticetherextract23藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì) Sprague-Dawley大鼠18只，平分為3組，每組雌雄各半，體重250±10g，大鼠于受試的前晚起禁食，不禁水，于給藥4小時(shí)后進(jìn)食。3組大鼠分別灌胃給藥丹參酮ⅡA單體8.0mg·kg-1

隱丹參酮單體5.7mg·kg-1丹參脂溶性提取物 （相當(dāng)于分別含隱丹參酮、丹參酮ⅡA為5.7和8.0mg·kg-1） 分別于給藥后5、10、15、20、30、40min和1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0h從眼底靜脈叢取血0.5mL，置肝素鈉抗凝處理過(guò)的試管中，3000r·min-1離心10min，轉(zhuǎn)移血漿，置-20℃保存待測(cè)。25Meanconcentration–timeprofilesoftanshinoneIIAinratplasmaafterintra-gavageofcryptotanshinone(5.7mg/kg),tanshinoneIIA(8.0mg/kg)andtanshinonesextract(23.3mg/kg)(mean±S.D.,n=6).藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果-226結(jié)果分析與討論1.灌胃丹參酮ⅡA

或隱丹參酮單體后丹參酮ⅡA

的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果比較： 根據(jù)隱丹參酮的代謝物丹參酮ⅡATmax為25min可以發(fā)現(xiàn)，隱丹參酮在大鼠體內(nèi)很快就發(fā)生脫氫反應(yīng)被代謝丹參酮ⅡA，灌胃丹參酮ⅡA8mg/kg時(shí)AUC為499.37ng/ml·min還沒(méi)有灌胃隱丹參酮5.7mg/kg時(shí)代謝產(chǎn)生的丹參酮ⅡA的AUC為560.68ng/ml·min高，說(shuō)明丹參酮ⅡA的口服吸收很不好。 比較灌胃丹參酮ⅡA和灌胃隱丹參酮后丹參酮ⅡA的消除半衰期，經(jīng)方差分析（P=0.46＞0.05）結(jié)果表明兩者無(wú)明顯差異。丹參酮ⅡA

隱丹參酮29第一部分結(jié)論

丹參提取物比較藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明，中藥材中的其他成分對(duì)其“標(biāo)志成分”或“藥效成分”的體內(nèi)過(guò)程有較大的影響。 拮抗：原兒茶醛； 協(xié)同：丹酚酸B、丹參酮ⅡA及隱丹參酮； 促進(jìn)轉(zhuǎn)化：隱丹參酮代謝為丹參酮ⅡA。30第二部分

復(fù)方中藥藥代動(dòng)力學(xué)有效成份單體與其在中藥提取物中的體內(nèi)過(guò)程并不一致，復(fù)方中藥成分更加復(fù)雜，是否也存在相互作用someingredientsintheHuang–Lian–Jie–Du–TanghadpharmacokineticinteractionwithbaicalinandwogonosideComparativepharmacokineticsofbaicalinafteroraladministrationofpurebaicalin,RadixScutellariaeextractandHuang–Lian–Jie–Du–Tangtorats.J.Ethnopharmacol.2007,110,412–418.31第二部分

復(fù)方丹參制劑比較藥代動(dòng)力學(xué)

丹參和三七配伍后主要活性成分藥代動(dòng)力學(xué)相互作用，探討它們的配伍機(jī)制32復(fù)方丹參方的藥代動(dòng)力學(xué)研究復(fù)方丹參方由丹參、三七和冰片三味藥材組成。是活血化瘀的名方，廣泛用于治療冠心病、心肌梗塞、心絞痛、抗血栓等心血管疾病。來(lái)源于丹參的酚酸類成分和二萜醌類成分及來(lái)源于三七的皂苷類成分是復(fù)方丹參方中的主要藥效物質(zhì)。33復(fù)方丹參方主要活性成分結(jié)構(gòu)三七皂苷R1人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1酚酸類成分二萜醌類成分皂苷成分34受試灌胃混懸液的制備和含量測(cè)定丹參灌胃液： 丹參片30片，CMC-Na制備三七灌胃液： 三七片20片，同法制備丹參-三七配伍灌胃液： 丹參片30片+三七片20片，同法制備含量測(cè)定(mg·mL-1)丹參三七丹參-三七丹參素0.21—0.21紫草酸0.44—0.44迷迭香酸0.27—0.27丹酚酸B4.05—4.05丹酚酸A0.16—0.16丹參酮ⅡA0.19—0.19隱丹參酮0.20—0.20三七皂苷R1—0.460.46人參皂苷Rg1

—1.751.75人參皂苷Rb1

—2.022.0235藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)三周期自身對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì)

健康比格犬8只，雌雄各半，給藥劑量均為1ml/kg周期1丹參混懸液：相當(dāng)于丹參素0.21mg·kg-1，丹參酮ⅡA0.19mg·kg-1，隱丹參酮0.20mg·kg-1

周期2三七混懸液：相當(dāng)于三七皂苷R10.46mg·kg-1，人參皂苷Rg11.75mg·kg-1和人參皂苷Rb12.02mg·kg-1周期3丹參-三七配伍混懸液

灌服前及灌服后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24、48、72、96和120h分別經(jīng)前肢靜脈取血約3.5mL，置肝素化離心管中，900g離心10min分取血漿，于-80℃避光保存供血藥濃度測(cè)定用。比格犬經(jīng)過(guò)足夠長(zhǎng)的清洗期后開(kāi)始下一周期試驗(yàn)。36血藥濃度測(cè)定結(jié)果配伍前后藥動(dòng)學(xué)行為有顯著差異：丹參素、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1配伍后，AUC減少44%，Cmax顯著降低，t1/2縮短，清除速率加快。配伍后，AUC顯著降低，Cmax顯著減小，CLz/F增大配伍后，AUC顯著降低，Cmax顯著減小，Tmax延后，CLz/F未見(jiàn)明顯變化37血藥濃度測(cè)定結(jié)果配伍前后藥動(dòng)學(xué)行為無(wú)顯著差異：丹參酮ⅡA

、隱丹參酮38小結(jié)與討論藥動(dòng)與藥效：配伍對(duì)于丹參素和三個(gè)皂苷成分的藥代動(dòng)力學(xué)行為有較大影響。但這并不一定意味著中藥配伍后整體藥效的下降。丹參、三七配伍作為經(jīng)典的藥對(duì)，其活血化瘀的療效優(yōu)于單味藥已久經(jīng)考驗(yàn)。文獻(xiàn)報(bào)道，人參皂苷Rb1對(duì)于心肌細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的活性在5nmol時(shí)出現(xiàn)最大值；人參皂苷Rg1和Rb1均在濃度為40μg·mL-1時(shí)有最強(qiáng)的神經(jīng)保護(hù)作用，而在更高劑量時(shí)無(wú)作用甚至出現(xiàn)反作用腸道菌群作用：皂苷成分口服進(jìn)入體內(nèi)后，大部分在腸道菌群的作用下水解生成其代謝產(chǎn)物，僅有小部分能進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)。39PublicationsMinSong,Tai-junHang,ZhengxingZhang,Hong-YuanChen.Effectsofthecoexstingditerpenoidtanshinonesonthepharmacokineticsofcryptotanshinoneandtanshino