人體瘧原蟲鏡檢技課件

人體瘧原蟲鏡檢技術(shù)一、概述二、瘧原蟲生活史三、人體瘧原蟲形態(tài)特征四、血片制作與染色一、概述

瘧疾是由按蚊叮咬傳播瘧原蟲引起寄生蟲病。瘧原蟲是單細(xì)胞真核生物，屬原生動(dòng)物門、孢子綱、真球蟲目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。自然界瘧原蟲有149種，能感染人體的瘧原蟲只有四種：即間日瘧（Pv）、惡性瘧（Pf）、三日瘧（Pm）、卵形瘧（Po）四種。在我國間日瘧最常見，分布最廣，發(fā)病最多；惡性瘧次之，但對人體危害嚴(yán)重，常引起腦型瘧等兇險(xiǎn)發(fā)作。三日瘧偶爾發(fā)現(xiàn)，卵形瘧已無病例報(bào)告。瘧原蟲生活史紅細(xì)胞外期紅細(xì)胞內(nèi)期蚊體內(nèi)發(fā)育人體內(nèi)發(fā)育配子生殖孢子增殖1紅細(xì)胞外期按蚊刺吸人血時(shí)，子孢子隨唾液進(jìn)入人體，約30分鐘隨血流侵入肝細(xì)胞。在肝細(xì)胞內(nèi)，子孢子→滋養(yǎng)體→裂體增殖→紅外期裂殖體→裂殖子（約12000個(gè)）→肝細(xì)胞破裂→裂殖子散出→血竇，一部分裂殖子被吞噬細(xì)胞吞噬，一部分則侵入紅細(xì)胞內(nèi)發(fā)育。目前認(rèn)為間日瘧原蟲和卵形瘧原蟲的子孢子有：速發(fā)型和遲發(fā)型。2紅細(xì)胞內(nèi)期由肝細(xì)胞釋放出的紅細(xì)胞外期裂殖子侵入紅細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行裂體增殖，稱為紅細(xì)胞內(nèi)期（紅內(nèi)期）。包括滋養(yǎng)體和裂殖體兩個(gè)階段?；具^程：環(huán)狀體→大滋養(yǎng)體→未成熟裂殖體→成熟裂殖體→裂殖子→健康紅細(xì)胞，重復(fù)上述過程幾次，部分裂殖子在紅細(xì)胞內(nèi)不再進(jìn)行裂體增殖，而發(fā)育為配子體。紅內(nèi)期增殖周期：間日瘧和卵形瘧為48h/代；三日瘧72h/代；惡性瘧36-48h/代。3.1雄配子形成雄配子體幾分鐘內(nèi)核分裂為4-8塊，胞質(zhì)亦向外伸出4-8條細(xì)絲，核分別進(jìn)入細(xì)絲內(nèi)，稱出絲現(xiàn)象，即雄配子形成細(xì)絲脫離母體，在蚊胃腔中游動(dòng)，即雄配子或小配子3.2動(dòng)合子和卵囊的形成雌雄配子受精，形成圓球形的合子。合子數(shù)小時(shí)后變?yōu)殚L形的香蕉狀的能活動(dòng)的動(dòng)合子。動(dòng)合子穿過蚊胃壁的上皮細(xì)胞，停留在胃壁的上皮細(xì)胞和外層彈性纖維膜之間，蟲體變圓并分泌囊壁形成球形的卵囊，卵囊也稱囊合子。3.3孢子增殖卵囊逐漸長大并向蚊胃壁外突出囊內(nèi)的核和胞質(zhì)反復(fù)分裂進(jìn)行孢子增殖，生成成千上萬的子孢子子孢子呈梭形，10～15μm×1μm主動(dòng)從卵囊壁鉆出或因卵囊破裂后散出，隨血淋巴流入蚊體組織。只有到蚊唾腺內(nèi)的子孢子才具有傳染性。3.4雌性按蚊--終宿主--蟲媒蚊唾液腺內(nèi)含有瘧原蟲子孢子當(dāng)雌蚊刺吸人血時(shí)，可隨唾液進(jìn)入人體雌性按蚊飽餐人血三、人體瘧原蟲形態(tài)特征在紅細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)瘧原蟲是確診瘧疾和鑒別蟲種的重要依據(jù)瘧原蟲基本構(gòu)造相同-細(xì)胞膜、質(zhì)、核瑞氏Wright或姬氏Giemsa染色：核染成紫紅色，胞質(zhì)呈蘭色，瘧原蟲消化血紅蛋白產(chǎn)物-瘧色素呈棕黃色瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)各期形態(tài)各不相同三期六種形態(tài)滋養(yǎng)體期：大、小滋養(yǎng)體裂殖體期：成熟、未成熟裂殖體配子體期：雌、雄配子體1、薄血膜瘧原蟲形態(tài)特征（1）間日瘧：環(huán)狀體、滋養(yǎng)體、裂殖體、配子體（2）惡性瘧：環(huán)狀體、配子體薄血膜間日瘧環(huán)狀體2.1未成熟裂殖體（immature

schizont）薄血膜間日瘧環(huán)狀體惡性瘧薄血膜環(huán)狀體薄血膜惡性瘧環(huán)狀體大滋養(yǎng)體間日瘧惡性瘧蟲體不規(guī)則，較大；阿米巴樣，空泡明顯；瘧色素細(xì)小，黃褐色。較小，圓形；空泡??；早期瘧色素細(xì)小，金黃色，晚期結(jié)成塊狀，黃褐色。薄血膜間日瘧滋養(yǎng)體未成熟裂殖體間日瘧惡性瘧圓形或不規(guī)則，核分裂為2個(gè)以上，空泡消失；瘧色素分布不勻。圓形，核分裂為2個(gè)以上；瘧色素集成團(tuán)塊。薄血膜間日瘧未成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體薄血膜間日瘧成熟裂殖體雌配子體間日瘧惡性瘧大于正常紅細(xì)胞，圓形；核小，致密，深紅色，偏于一側(cè)，胞漿深藍(lán)色；瘧色素散在。新月形，兩端較尖；核小，致密，深紅色，位于中央；胞漿深藍(lán)色；瘧色素圍于核周。雄配子體間日瘧惡性瘧大于正常紅細(xì)胞，圓形；核大，疏松，淺紅色，多位于中央；胞漿淺藍(lán)色或淡紅色；瘧色素散在。臘腸形，兩端鈍圓，核大，疏松，淡紅色，位于中央；胞漿淺藍(lán)色或淺紅色；瘧色素位于核周。薄血膜配子體薄血膜配子體惡性瘧配子體

惡性瘧配子體惡性瘧配子體大配子體和大滋養(yǎng)體的形態(tài)區(qū)別大配子體大滋養(yǎng)體蟲體大小幾乎充滿被寄生的紅細(xì)胞不超過被寄生紅細(xì)胞的3/4核一個(gè)，較大且致密，周圍有一圈空白的不染色帶一個(gè)，延長呈帶狀，周圍無明顯的不染色帶胞漿邊緣清楚，不含空泡邊緣不整齊，多有空泡瘧色素顆粒較多,較粗，均勻散在顆粒較少,較細(xì)，分布不均勻大配子體和大滋養(yǎng)體的形態(tài)區(qū)別吉氏染色液被寄生紅細(xì)胞形態(tài)

間日瘧

惡性瘧紅細(xì)胞脹大，退色，薛氏點(diǎn)鮮紅、細(xì)小、數(shù)多。紅細(xì)胞大小正常，色稍紫；茂氏點(diǎn)紫紅色，粗大，數(shù)少。2、厚血膜中瘧原蟲形態(tài)厚血膜的血量多，紅細(xì)胞重疊且干燥較慢，致使瘧原蟲皺縮，空泡縮小或消失，蟲體變形，蟲種鑒別比薄血膜困難。

厚血膜中小滋養(yǎng)體胞漿可呈環(huán)狀，也可收縮在核的一側(cè)或兩側(cè)，也可圍核分布等，形成各種形態(tài)。間日瘧原蟲的環(huán)較大，胞漿較厚；核一個(gè)；蟲體形態(tài)常呈分號(hào)“；”和感嘆號(hào)“！”；品型惡性瘧原蟲的環(huán)纖細(xì)，較小，著色較淺；核1－2個(gè)，蟲體形態(tài)常呈分號(hào)“；”、飛鳥“︵.︵”、V狀“V”和斷環(huán)“O”狀等；厚血膜中間日瘧大滋養(yǎng)體間日瘧原蟲呈阿米巴樣，形狀不規(guī)則。核位于胞質(zhì)中或邊緣；胞漿常斷裂成幾塊或縮成圓形，瘧色素分布不均。厚血膜中間日瘧裂殖體蟲體較大，核2個(gè)以上，一般12－24個(gè)，除蟲體略為縮小且著色較深外，均與薄血膜的相似。厚血膜中間日瘧配子體除蟲體略為縮小且著色較深外，均與薄血膜的相似。一般蟲體較大，圓形，色素粗大，大配子核小，偏與一側(cè)，胞漿深蘭色。小配子核大，居中，胞漿淺蘭色。厚血膜中惡性瘧配子體惡性瘧原蟲大配子體為新月形，小配子體為臘腸形。核居中，瘧色素圍在核周，外為一圈胞漿。此外，還可見配子體的胞漿部分或全部消失，只留下核和瘧色素，或核和胞漿均消失，只留下一些瘧色素厚血膜中紅細(xì)胞一般染色后，寄生的紅細(xì)胞溶解，輪廓消失。但間日瘧有時(shí)尚留下紅細(xì)胞的“影子”和薛氏點(diǎn)。惡性瘧常見紅細(xì)胞“影子”和茂氏點(diǎn)瘧色素瘧色素與原蟲在一水平面上有立體感；黃褐色、深褐色、金黃色。形狀如沙粒狀、短桿狀等，可聚集成堆。瘧色素在瘧原蟲診斷，蟲期判斷中有著重要作用。厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)厚血膜間日瘧原蟲形態(tài)本片中部有兩個(gè)白細(xì)胞，在其左上方、左下方各有一個(gè)大滋養(yǎng)體；其右上方有兩個(gè)大滋養(yǎng)體，胞漿皆已縐縮成數(shù)塊，但皆有紅細(xì)胞殘骸可見間日瘧蟲體位于本片中部，胞漿皺縮為多塊，色素聚集于蟲體右上方；本蟲上方為一個(gè)大滋養(yǎng)體間日瘧厚血膜惡性瘧環(huán)狀體厚血膜惡性瘧配子體厚血膜瘧原蟲鑒別要點(diǎn)在厚血膜中必須根據(jù)瘧原蟲的核、胞漿、瘧色素三個(gè)條件鑒別是否是瘧原蟲及蟲種。具備上述三條中的二個(gè)條件也能給與判定。有時(shí)因染色較淺，看不到核和胞漿，但看到典型的瘧色素也可判定。瘧原蟲與其它物體的鑒別疑似瘧色素：血膜上的染料殘?jiān)盎覊m，有時(shí)被誤認(rèn)為瘧色素?？梢罁?jù)顆粒大小、色澤及分布范圍加以區(qū)別。轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)時(shí)，可見殘?jiān)盎覊m浮于紅細(xì)胞上，于瘧原蟲不在一平面。疑似瘧原蟲核：球菌、白細(xì)胞破裂后散出的顆粒、血小板，皆為紅色小點(diǎn)，與瘧原蟲核相似，最易混淆。但球菌形體較大，邊緣光滑，常見多個(gè)聚集一處，分布較廣。中性和嗜酸性粒細(xì)胞顆粒，著色較淡，邊緣整齊，附近常有白細(xì)胞碎屑。血小板：紅點(diǎn)結(jié)構(gòu)松散，花瓣?duì)?，?－5成群。瘧原蟲與其它物體的鑒別

疑似瘧原蟲胞漿：網(wǎng)織紅細(xì)胞殘留物和白細(xì)胞殘留物通常為藍(lán)色，與瘧原蟲胞漿相似，與某些紅點(diǎn)結(jié)合在一起，易誤診為瘧原蟲。如似大滋養(yǎng)體，可根據(jù)有無瘧色素特點(diǎn)加以區(qū)別。如似小滋養(yǎng)體，可依據(jù)蟲體大小、折光是否均勻、核與胞漿是否在一個(gè)平面上進(jìn)行區(qū)別。四、血片的制作與染色1、材料玻片：推玻片（具有光滑的邊緣）、載玻片一次性采血針75%的醫(yī)用消毒酒精（濕棉球）干棉球（止血用）標(biāo)簽、記號(hào)筆：載玻片上標(biāo)識(shí)與編號(hào)玻片盒玻片的處理：（1）新玻片常有游離的堿質(zhì)，使用前應(yīng)用重鉻酸鉀洗液或稀鹽酸（將濃鹽酸稀釋10倍）浸泡24小時(shí)，然后用自來水反復(fù)沖洗，晾干或烘干備用。（2）舊的玻片，應(yīng)放入5%的肥皂或洗衣粉水中煮沸20分鐘，再用熱水將肥皂或血膜等污物洗去，用自來水反復(fù)沖洗，必要時(shí)再置95%乙醇中浸泡1小時(shí)，然后擦干或烘干備用。2、采血厚血膜血量約為5立方毫米左右(即一小滴)，涂成邊緣光滑之園形，直徑約0.8—1.0厘米左右。薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約2.5厘米，寬約2厘米3、制片瘧原蟲鏡檢要求在一張玻片上必須同時(shí)制作厚、薄血膜。（1）涂制厚血膜：取玻片2張，1張作載片，1張作推片（具有光滑邊緣）。用右手拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用該端中部刮取血液1~1.5μl。將左下角的血滴涂于載片的右端1/3處，由里向外劃圈涂成直徑為0.8~1cm的圓形厚血膜（厚度以1個(gè)油鏡視野內(nèi)可見到5~10個(gè)白細(xì)胞為宜）。厚血膜外觀：圓形，厚薄均勻。過厚易于脫落，過薄達(dá)不到檢出率的要求。涂制厚血膜（2）推制薄血膜：用干棉球抹凈玻片角上的血漬，然后將推片下緣（最好為磨口邊緣）平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片與推片之間向兩側(cè)擴(kuò)展至約2cm寬時(shí)，使兩玻片保持30~45度夾角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜（角度過大、速度過快，血膜太薄，反之血膜則太厚），用力要均勻，中途勿停頓，理想的薄血膜，應(yīng)是一層均勻分布的血細(xì)胞。薄血膜外觀：呈舌狀，頭體尾明顯，厚薄均勻。位于玻片1/2～1/3處。推制薄血膜

厚、薄血膜的位置

每張載玻片上可做1個(gè)薄血膜和1個(gè)厚血膜，如圖4、血片的固定和脫膜薄血膜用甲醇固定現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染色。保存時(shí)間較長的標(biāo)本片厚血膜要脫血膜后保存。5、制作血片的注意事項(xiàng)自然干燥，不能太陽曬和火烤。血片放置待干時(shí)不可傾斜，否則厚血膜中血細(xì)胞沉在一邊，可使厚薄不勻。制成的血膜須完全干燥后(自然情況下約4-12小時(shí)才能全干燥；必要時(shí)，可置于37℃的暖箱中，促其速干)始可進(jìn)行固定及染色否則薄血膜中的紅細(xì)胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時(shí)脫落，而?，F(xiàn)網(wǎng)狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，血紅蛋白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。若把未經(jīng)固定的血片盛于氯化鈣的干燥器內(nèi)，然后放入冰箱中，可保存3年之久，并仍可較滿意的染色。