藥理實驗研究的設計及實施中應注意的問題課件

2023/2/91藥理實驗研究的設計及實施中應注意的問題

2023/2/92

藥理實驗研究中，為避免今后不出現(xiàn)不必要的麻煩，應該充分考慮以下幾方面的問題：

(一)確定目標和撰寫好開題報告

(二)實驗方法與觀察指標的選定原則

(三)動物實驗和實驗動物的基本要求

(四)掌握實驗設計中重復、對照、隨機的原則(五)作好預實驗(六)實驗記錄中的問題

(七)撰寫好論文的要點

2023/2/93(一)確定目標和撰寫開題報告的重要性：

1.目標

進行實驗設計時，首先必須明確實驗研究的目標（這一目標必須集前沿性、開創(chuàng)性、實用性和可行性為一體）。然后，始終圍繞這一目標來設計實驗，切忌目標不明、貪大求全、胸中無數(shù)。大量閱讀文獻，始終做到胸中始終有數(shù)、有的放矢。

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所以研究中：◎開始時，應有目標和完善的計劃；工作結束時，應有充分的總結。◎但最有效率的做法是：在實驗中，始終圍繞目標，并及時地、不斷地分析、總結。并可以隨時調整實驗目標，而不是等到實驗完成時，才開始收集、整理數(shù)據(jù)和總結。

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2.開題報告的撰寫：開題報告的重要性

▲開題報告是研究的計劃及論文的提綱，應十分重視，不應掉以輕心。

▲開題報告不僅僅要列出各分題研究的內容，而是應按照實驗研究的目的、假說、結論來精心組織。

2023/2/97分成三大類：

（1）引言：◎為什么我要做這件工作？◎別人巳作了哪些工作？◎我的主要的目的和假設是什么？

（2）結果和討論：◎結果可能是什么？◎實驗和測試方法是什么？

（3）結論：◎我所作的一切意味著什么？◎是否能證實或否定了什么假設？◎我的結論可能是什么？◎結果與他人不同之處何在（價值）？

接下來，把每一部分再仔細組織，盡可能以清晰、緊湊的流程圖或圖表來展示。

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(二)實驗方法與觀察指標選定原則

1.觀察指標要有專一性和可靠性，能反映被研究問題的本質：例如：用實體瘤篩選抗癌藥，常以瘤重量變化作指標；而用腹水癌篩選時，則常以動物存活日期、腹水、癌細胞數(shù)作指標。又例如：動脈血壓，在研究抗高血壓藥時，它是個特異性藥理指標；但研究治療急性腎炎的藥時，則并非所有急性腎炎病人特異性指標(約20、30％病例血壓不升高)，而應選擇尿常規(guī)和腎功能等作為重點指標。2023/2/910

2.觀察指標必須盡量是可用客觀方法定性、定量地測量的：

如血壓、血糖、心率、血細胞數(shù)目、體重等都是客觀準確的定量數(shù)據(jù)，應盡量多用。而抑郁、愉快、麻木、頭昏、疼痛等主觀感覺，應盡量少用。2023/2/911

(三)動物實驗和實驗動物要求：

1.動物實驗的基本要求：

當前，動物實驗和實驗動物都要求達到實驗室操作規(guī)范（goodlaboratorypractice,GLP）和標準操作程序（standardoperatingprocedure,SOP）。

▲即對實驗動物、實驗室的條件、工作人員的素質、技術水平、操作方法，都要求標準化和規(guī)范化。2023/2/9133.微生物學和寄生蟲學標準：

▲要求選用三級實驗動物：排除人獸共患病排除實驗動物本身的傳染病，排除影響實驗研究的相應微生物和寄生蟲

▲使實驗研究始終沒有或很少有外源干擾，以有利于實驗獲得可靠的數(shù)據(jù)。

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4.從實驗有效性來選擇實驗動物：

▲應選擇合適的實驗動物進行實驗，才能證明其陽性存在的有效性。因不同種類的動物對同一藥物的反應，一般是相似的；但有的不僅有量的差異，甚至還可有質的不同。

如組胺對狗，貓等可使血壓↓；而對家兔則可使血壓↑。因此一個藥物的研究往往需要應多用幾種動物，其中至少應有一種哺乳類。

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又如以高膽固醇膳食飼喂雞、鴿、豬、兔、狗、猴，均可以誘發(fā)的高脂血癥或動脈粥樣硬化。但家兔主動脈粥樣硬化明顯，而心肌冠狀動脈只有粥樣小斑塊，只引起小灶性心肌梗塞。而猴、豬情況與人較類似，其心冠狀動脈前降支可形成較大斑塊，較易引起大片的心肌梗塞。

▲所以一般應選擇一種以上的實驗動物進行實驗，才能證明其陽性的普遍性。

2023/2/9176.動物的年齡、性別、機能狀態(tài)及生活環(huán)境：應根據(jù)實驗目的要求，選擇和安排動物，使實驗更符合臨床要求。

如抗前列腺肥大藥應選老年動物避孕藥應選性成熟的動物等

即符合代表性的原則2023/2/9187.其它因素：

如動物性別、年齡、體重、營養(yǎng)狀況、飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)人員的素質和責任心等都可影響實驗結果。

2023/2/919三.各種動物或標本的特點：

（一）小鼠：

▲小鼠個體小，飼養(yǎng)管理方便，生產(chǎn)繁殖快，質量控制嚴格，價廉可以大量供應。

▲全世界科研工作者均采用國際公認的品系的小鼠和按標準的條件進行試驗，其實驗結果的科學性、可靠性、可重復性均較高，易得到國際認可。因此，小鼠被廣泛應用于種類科研實驗中，其用量最大，用途最廣。2023/2/921二、大鼠：

也是醫(yī)學上最常用的實驗動物之一，價格較廉，可以大量供應。其用量僅次于小鼠，大鼠體型比小鼠大，且已育成近交系，突變系和封閉群。它們還可用于生物學和遺傳學特性研究。

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▲生理學研究：大鼠可用于垂體、腎上腺系統(tǒng)的研究。利用手術摘除某些內分泌器官，可以了解各腺體的作用和它們之間的互相關系。也可用作生殖生理、胚胎學、畸胎學的模型動物。大鼠無膽囊，膽管相對較粗大，可采用膽總管插管收集膽汁進行消化功能的研究。2023/2/9hujinguan23

▲藥理學和毒理學研究：

常用的高血壓大鼠（SHR）和中風型（SHRSP）大鼠，作心血管藥物藥理和藥物篩選。大鼠還可作長期毒理學試驗研究。

大鼠還可用于核醫(yī)學、計劃生育、胃潰瘍、中毒性肝炎、肝壞死、肝硬化、實驗性腹水、關節(jié)炎和老年病學、齲齒、慢性支氣管炎等疾病的實驗模型。2023/2/925

▲生殖生理和避孕藥的研究：

家兔可誘發(fā)排卵，所以能準確地計算排卵時間，獲得不同時間的胚胎學資料。

▲眼科研究：

新西蘭兔中出現(xiàn)的遺傳性青光眼，是很好的青光眼模型，為研究人的青光眼發(fā)病及治療提供了理想的實驗動物。也用于角膜瘢痕和角膜移植研究。

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▲心血管疾病研究：

家兔實驗性動脈粥樣硬化是20世紀初形成的模型，沿用至今。家兔可形成高血脂癥、彌漫性血管內凝血、急性循環(huán)障礙、心肌梗塞、心律失常、高血壓、肺原性心臟病、慢性肺動脈高壓、肺心病和一過性高血壓等模型。

▲熱原試驗：

SPF家兔對熱原物質反應靈敏。常規(guī)應用于制藥和藥檢部門檢查制品的熱原性。2023/2/929

五、狗：

▲實驗外科學研究：

狗主要應用于實驗外科學研究，臨床醫(yī)學在研究探索新的手術或麻醉方法時，如心血管外科、胸外科、斷肢再植、器官和組織移植等等，常須首先選用狗作動物實驗，取得經(jīng)驗與技巧以后才試用于臨床。

▲藥理、毒理學研究:

狗可選用于各種化學物品及藥品的臨床前毒理學實驗。2023/2/930

六、貓：

貓的用量相對較少，主要應用于以下幾個方面的研究工作。

▲生理學研究：貓具有極為敏感的神經(jīng)系統(tǒng)，頭蓋骨和腦的形狀固定，是腦神經(jīng)生理學研究的較好實驗動物。

▲藥理學研究：

貓可用于腦室灌流研究藥物的作用部位，藥物通過血腦屏障的機理和過程。貓血壓穩(wěn)定，血管壁韌，心搏力強，便于手術操作，能描記出完好的曲線故貓適用于進行藥物對血液循環(huán)系統(tǒng)作用機理的分析研究等。2023/2/931

七、靈長類：

靈長類和人類的分類學地位最為接近，在形態(tài)和功能上有很多與人相似之處，因此是生物醫(yī)學研究中的最佳模型。

▲生理學研究：用于腦功能、血液循環(huán)、呼吸生理、生殖生理、內分泌及老年醫(yī)學方面的研究。

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▲傳染病和疫苗的研制：

某些靈長類動物可感染人類所特有的傳染病，特別是其它動物不可復制的傳染病，如脊髓灰質炎、腦炎、肝炎、麻疹、痢疾和瘧疾等。

▲藥理學研究：

恒河猴的生殖生理和人類非常相似，故可用做人類避孕藥的研究。新的鎮(zhèn)靜劑進入臨床使用前要用猴進行試驗?！滩游锬Ｐ停?/p>

用猴免疫缺陷病毒感染獼猴，可獲得與人類相似的艾滋病，提供研究用動物模型。2023/2/933

八、兩棲類：

兩棲類動物主要應用生理和藥理學科研與教學。用蛙腿腓腸肌和坐骨神經(jīng)觀察外周神經(jīng)生理功能與藥物對外周神經(jīng)和骨骼肌的作用。刺激蛙皮膚觀察反射弧，作脊髓性休克，脊髓反射分析實驗。

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供藥理實驗的動物：既可是正常動物、麻醉動物及病理模型的整體動物實驗；也可采用離體器官、組織和細胞的離體實驗等。

2023/2/935（四）實驗設計的三大原則：

重復性(Replication)

對照（comparison）隨機性(Randomization)

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1.重復性與樣本的大?。?/p>

（1）重復性：

由于實驗動物的個體差異或實驗誤差，在適當范圍內重復愈多，則實驗結果愈正確性和可靠。（但必須是在同樣條件下，把實驗結果重復出來，才算是可靠的實驗）重復還可予測實驗變異（系統(tǒng)誤差）。2023/2/937

（2）樣本的大小：

在進行藥理實驗設計時，碰到的另一問題就是該用多少動物或多大的樣本？

樣本加大肯定能提高精密度；但是人力，物力和時間的消耗也隨之增加，不符合經(jīng)濟原則。而且單純加大樣本也不一定能排除“偏差”。所以，在實驗設計中，正確估計樣本大小，是一個重要的課題。

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◆樣本大小確定的一般原則：①按統(tǒng)計學要求，進行樣本大小的設計算。②根據(jù)他人的研究經(jīng)驗、預試的結果和實驗所需的精確度來綜合考慮。③一般來說，計量研究，動物可少些；計數(shù)研究，動物需多些。大、小白鼠，兩組對比時：計量資料每組不應少于10只；計數(shù)資料每組不少于30只。豚鼠、家兔：計量資料時每組不少于6只，計數(shù)資料每組不少于20只。貓、狗：計量資料不應少于5只，計數(shù)資料不少于10只等。2023/2/939

2.對照：（1）對照的原則（4點）

a.所有藥理實驗的設計都必須設立對照組。

b.對照組與實驗組之間應除用藥、處理的區(qū)別之外，其他條件（如實驗動物、實驗方法、儀器、環(huán)境及時間等）應盡可能一致。

d.在動物種屬，性別、窩別，年齡，體重，健康狀況等方面也應盡量相同。2023/2/940

c.對照組動物數(shù)：把對照組動物安排得比試驗組動物少一些是錯誤的；其實按t公式，10個對照與20個治療動物、20個對照與10個治療動物的結果可靠性是相同的。最經(jīng)濟的是兩組動物數(shù)相等。當然，如果經(jīng)過預試，估計試驗組會有較多的動物在實驗結束前死亡，試驗組動物數(shù)也可適當增加。2023/2/941

(2)對照形式：根據(jù)實驗研究的內容的不同，有：

a.空白對照：是指在不加任何處理的“空白”條件下進行觀察的對照。較少使用。

b.假處理對照；即除研究的藥物外，對照組的動物要經(jīng)受同樣的處理（如麻醉、手術、餵飼或注射不含藥物的溶媒或生理鹽水等）。這種對照的可比性好，常使用。

c.標準對照；以已知的標準值或正常值作為對照如長毒中，藥物對血細胞的影響等。

d.組間對照：在實驗中，設定若干組，各組間互為對照，平行進行對比，最常使用。（后面有專門論述）。2023/2/942

3.隨機化：由于藥理實驗的對象為生物樣本，本身存就在有差異。因此，除設立“對照組”外，樣本的分組的隨機化也十分重要，因為隨機化可以避免有意或無意造成的“偏差”。如采用隨機表。要注意隨機不等于隨意。2023/2/943

舉例：完全隨機設計法：

該法主用于單因素、大樣本的實驗。

即先將全部動物編號，按統(tǒng)計學書中的“隨機數(shù)字表”，任取一段數(shù)字，依次排配各個動物的編號。

2023/2/944除32023/2/945

(五)預實驗預實驗是必要的，它是正式實驗前的一亇重要步驟，也是實驗設計的實踐探索。根據(jù)預實驗的結果或經(jīng)驗教訓，可對原始的實驗設計作必要的修正，是完善實驗設計的一個不可缺少的步驟。2023/2/946

一般通過預備實驗可解決以下問題：

1.修正實驗動物種類和例數(shù)。

2.檢查實驗的觀察指標是否客觀、靈敏和可靠

3.改進實驗方法和熟練實驗技術操作。

4.探索試驗藥物的劑量，確定正式試驗用藥劑量

5.發(fā)現(xiàn)值得進一步研究的線索。2023/2/947

(六)實驗記錄通過預備實驗后，應擬出正式實驗時的記錄的格式，并打印成冊。以保證正式實驗能有條理、按秩序地進行，不至遺漏重要的觀測指標和項目，保證結果的完整性和正確性。

2023/2/948

實驗記錄一般應包括以下內容：

1.實驗動物：品種、體重、性別、標記，編號等。

2.實驗藥物：來源、批號、劑型，濃度，劑量及給藥途徑等。

3.實驗環(huán)境：實驗時間(日期，鐘點)，室溫，濕度等。

4.實驗方法、步驟及進程：詳細的時間記錄。

5.觀測指標結果的記錄：包括原始描記圖紙等的搜集。

6.實驗工作者：如輪值安排的記錄。

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（七)論文撰寫

1.每次實驗告一段落后，對所獲結果須隨時作出統(tǒng)計、整理、分析處理及思考。有時可發(fā)現(xiàn)一些問題，便于及時小結，有利于改進下一步工作，少走或不走彎路，為最后撰寫打下所堅實的基礎。2023/2/950題目：畫龍點睛，反映全文的精華摘要：最重要的部分！

背景寫清,結果有數(shù)據(jù),結論要推敲前言：交代來龍去脈方法與結果：是人家能重復的方法討論：結合你的發(fā)現(xiàn)，忌變成綜述文獻：要充分，引高和新的文章圖表：規(guī)范，精致

下面具體討論如下：

2023/2/951

前言

文章的第1或2段應該完全用來寫前言。

要特別注意寫好開頭幾句話，最好是簡潔地陳述工作的目的，并指明該工作為什么重要。如為什么研究？什么意義？創(chuàng)新在什么地方（也可包括有待解決的問題）？2023/2/952材料

◆受試藥物的規(guī)格和來源

◆主要檢測儀器、試劑等

◆動物的情況

◆統(tǒng)計學方法2023/2/953方法和結果

◆方法是人家能重復的方法。

◆結果一般用圖表，數(shù)據(jù)表達。

◆方法和結果撰寫應按邏輯順序、不是實驗時間順序。

◆應包括統(tǒng)計學分析結果。2023/2/954

◆方法和結果分段應明確，并有副標題（可用黑體字標明）。盡可能使副標題具體，并且內容豐富（可使讀者清楚地通覽全文，并迅速找到他們感興趣的內容）。

◆結果中的正文是為解釋數(shù)據(jù)的，因而是次要的，盡量壓縮，文章越短，越易讀。2023/2/955

結論

◆結論應是由一些簡短的短語和句子組成。除非是為了特殊的強調，一般不要重復在結果部分已經(jīng)有的內容。

◆結論不僅僅只是一個總結，還可巧妙地增加一些新的，更高層次的敘述，并且應該明確的表明本人工作的意義。2023/2/956討論◆實驗結果的本質？表現(xiàn)的規(guī)律？◆與他人相關結果的比較更好？◆對結果的分析解釋?！艚Y果的重要意義?！粲绊懡Y果因素的探討?！舸嬖诘膯栴}論的分析和討論。2023/2/957

參考文獻文獻都要要認真看過，不要弄錯全—個人復習的全部有關的文獻近—近期、部分過期文獻的累列新—新、舊觀點都應羅列2023/2/958

6.論文的投稿選擇高一點的刊物注意刊物的讀者范圍可投石問路注意不同刊物投稿要求寫好投稿信2023/2/959

（八）中藥藥理實驗研究設計的特殊性：

2023/2/960

中藥藥理實驗設計除應注意上述藥理試驗設計的基本內含外，還應注意中藥藥理研究的特殊性，即在實驗設計中，一定要以中醫(yī)藥的基本理論為指導，既要面向現(xiàn)代化、面向世界與未來，又必須留意和遵循中醫(yī)藥的傳統(tǒng)經(jīng)驗、理論和方法。在中藥藥理實驗研究中，應特別注意以下幾點：2023/2/961

1.受試中藥及制劑的質量標準化問題：

①中藥生藥品種復雜，如不經(jīng)品種鑒定，其實驗研究結果就很不可靠；②不同的藥用部位、產(chǎn)地，采集季節(jié)、貯藏以及加工炮制等都可能影響到其藥理作用；③供試制劑的制作、提取、保存等等也將影響實驗結果。因此，有時為同一名稱的中藥或同一種制劑，其實驗結果往往是各地的報導，甚至同一實驗室，不同批次藥物的實驗結果都可能不盡相同，甚至相反。所以，中藥藥理實驗中，嚴格控制各種因素的影響，十分重要，也很難。2023/2/962

2.中醫(yī)藥理論、傳統(tǒng)經(jīng)驗與現(xiàn)代藥理、藥化研究的配合的問題：

中藥藥理的實驗研究，目前尚未形成獨立、系統(tǒng)的方法，而幾乎都是沿用現(xiàn)代藥理實驗方法來進行。實踐中，若脫離了中醫(yī)藥理論與傳統(tǒng)的經(jīng)驗，只強調提取中藥的有效成份，采用現(xiàn)代藥理學的方法來進行研究，就非常容易丟失中