多種分子和蛋白質(zhì)對(duì)血小板功能的負(fù)性調(diào)控,生理學(xué)論文

多種分子和蛋白質(zhì)對(duì)血小板功能的負(fù)性調(diào)控,生理學(xué)論文摘要：在血液循環(huán)系統(tǒng)中，血小板在抑制因子的作用下，處于靜息狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體出血或外界因素刺激時(shí)，血小板活化，產(chǎn)生聚集、黏附和釋放反響，釋放出二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子和5-羥色胺等物質(zhì)，招募更多的血小板黏附于出血處，進(jìn)而啟動(dòng)凝血經(jīng)過，發(fā)揮止血作用。當(dāng)止血反響完成后，血小板發(fā)生解聚，恢復(fù)到靜息狀態(tài)。然而，在病理?xiàng)l件下，血小板的內(nèi)在解聚能力下降，構(gòu)成過度活化的血小板，產(chǎn)生病理性血栓，導(dǎo)致急性缺血性心血管疾病的發(fā)生。臨床使用抗血小板藥物控制血小板的活化，治療急性缺血性心血管疾病。然而，當(dāng)前臨床上常用的抗血小板藥物發(fā)揮抗血小板活化作用的同時(shí)，影響了血小板正常的生理性止血作用，產(chǎn)生出血等副作用。因而，我們需要研發(fā)新型抗血小板藥物，使其既能發(fā)揮抗血小板作用，又能減少出血等副作用。本文將對(duì)血小板負(fù)性調(diào)控機(jī)制進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步研究抗血小板藥物提供思路。本文關(guān)鍵詞語：血小板;負(fù)性調(diào)控;解聚;Abstract：Innormalbloodflowcirculation,plateletsarestimulatedbyactivators,aswellasregulatedbysomeinhibitoryfactors.Whenthebodycompleteshemostasis,plateletsdepolymerizeandbacktorestingstate.However,underpathologicalcondition,theintrinsicdeaggregationabilityofplateletdecreases,andexcessiveplateletactivationproducespathologicalthrombus.Therefore,anti-platelettherapyisanimportantdirectionforthetreatmentofischemiccardiovasculardisease.Avarietyofclinicallyeffectiveanti-plateletmedicineshavebeendevelopedthroughplateletactivationmechanism,buttherearecommonbleedingadversereactionatthesametime.Inthisreview,wesummarizedthemechanismofplateletnegativeregulationtolimitplateletexcessiveactivation,inordertoprovidenewideaforfurtherstudyonanti-plateletdrugwithoutbleeding.Keyword：platelet;negativeregulation;depolymerization;心血管疾病，又稱世界第一殺手，每年奪去1000多萬人的生命，到2030年死亡人數(shù)將增加到2360萬[1]。在中國，五分之二的死亡歸因于心血管疾病，而絕大多數(shù)的急性心血管疾病與血栓構(gòu)成有關(guān)，如在動(dòng)脈粥樣硬化與心肌梗死中，血小板的激活是該經(jīng)過的啟動(dòng)因素[2]。血小板是由骨髓巨核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)產(chǎn)生的無核細(xì)胞碎片，當(dāng)血管發(fā)生損傷時(shí)，內(nèi)皮基質(zhì)暴露，血小板與之結(jié)合，并產(chǎn)生聚集、變形、黏附和顆粒內(nèi)容物的釋放等反響。血小板釋放的顆粒內(nèi)容物包括血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)、花生四烯酸(arachidonicacid,AA)、二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)、凝血酶、腎上腺素和5-羥色胺等物質(zhì)，這些沖動(dòng)劑與血小板外表相關(guān)受體結(jié)合，招募血流中更多的血小板到達(dá)血管損傷部位，最終啟動(dòng)凝血經(jīng)過，發(fā)揮止血作用[3]。然而，過度的血小板聚集構(gòu)成病理性血栓使血管閉塞導(dǎo)致缺血性腦卒中、心肌梗死等缺血性心血管疾病的發(fā)生。血小板不僅具有聚集的能力，還有內(nèi)在的解聚功能，血管栓塞性疾病及糖尿病患者的血小板不僅處于亞激活狀態(tài)，它的內(nèi)在解聚功能顯著降低[4]。血小板通過負(fù)性調(diào)控，阻斷血小板的繼續(xù)活化，使其解聚，進(jìn)而防止血栓的過度構(gòu)成[5]。多種分子和蛋白質(zhì)對(duì)血小板功能具有負(fù)性調(diào)控作用，綜述如下。1、一氧化氮一氧化氮(nitricoxide,NO)是一種中性氧化物，根據(jù)來源可分為內(nèi)源性一氧化氮和外源性一氧化氮。外源性一氧化氮是極不穩(wěn)定的有毒氣體，內(nèi)源性一氧化氮可為人體利用。內(nèi)源性一氧化氮由3種不同亞型的一氧化氮合酶(NOsynthase,NOS)催化L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)產(chǎn)生，細(xì)胞外的L-Arg經(jīng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)NOS催化生成NO和L-瓜氨酸[6]。NO有高度脂溶性，極易擴(kuò)散通過生物膜。內(nèi)源性NO導(dǎo)致血管擴(kuò)張，抑制血小板在內(nèi)皮細(xì)胞外表黏附和血小板的聚集作用。NO能夠結(jié)合直接溶于胞質(zhì)溶膠中的可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(solubleguanylylcyclase,sGC)。sGC通過產(chǎn)生環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)與NO結(jié)合，GMP又激活蛋白激酶G(proteinkinaseG,PKG)，進(jìn)而通過PKG抑制血小板活化[7]。NO又能夠刺激腺苷酸環(huán)化酶生成環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosphate,cAMP)，通過蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)抑制血小板聚集。NO還能夠減少血小板膜外表糖蛋白(如P-選擇素、CD63和GpIIb/IIIa)的表示出及顆粒的釋放，阻斷血小板在損傷內(nèi)皮細(xì)胞處沉積及與纖維蛋白原的結(jié)合，進(jìn)而阻斷血小板的活化[8]。NO抑制血小板源性生長因子和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，防止內(nèi)皮下層的平滑肌細(xì)胞暴露于這些強(qiáng)效促增殖的物質(zhì)。2、前列環(huán)素前列環(huán)素2(prostacyclin2,PGI2)是前列腺素家族的重要成員，屬于內(nèi)皮源性血管舒張因子，是血栓素的拮抗劑，具有抑制血小板凝集和擴(kuò)張血管的作用，可延緩血栓的構(gòu)成，用于肺動(dòng)脈高壓、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死等疾病的治療。PGI2通過作用于細(xì)胞膜上組織特異性的G蛋白偶聯(lián)受體，即前列環(huán)素受體(prostacyclinreceptor,IP-R)及相關(guān)的信號(hào)通路而發(fā)揮對(duì)心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。在血小板膜外表，PGI2通過刺激IP-R發(fā)揮抑制血小板活化的功能。激活后的IP-R能夠刺激腺苷酸環(huán)化酶合成cAMP，后者又激活PKA，能夠抑制血小板的活化[9]。NO還能夠加強(qiáng)抑制血小板的作用，兩者具有協(xié)同作用。然而，PGI2和NO都具有非常短的半衰期并且它們的抑制作用是可逆的，能夠被濃度較高的沖動(dòng)劑激活的血小板所掩蓋。因而，當(dāng)血小板抑制信號(hào)和活化信號(hào)的平衡被打破后，血小板的解聚主要由免疫受體酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitionmotif,ITIM)途徑介導(dǎo)的負(fù)性調(diào)控機(jī)制完成(圖1)。3、免疫受體酪氨酸抑制基序免疫受體酪氨酸抑制基序ITIM是免疫細(xì)胞的抑制性調(diào)節(jié)分子，如FcR、PD-1、CD-22和KIR等，基本構(gòu)造為I/VxYxxL(I:Ile,V:Val,Y:Tyr,L:Leu)。ITIM位于免疫細(xì)胞某些受體分子的胞內(nèi)段，酪氨酸被Ser活化后可招募并活化帶有SH2的PTP，阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用。ITIM被PTP分子上的SH2構(gòu)造域所結(jié)合，進(jìn)而招募PTP并使之活化，起到抑制PTK介入的激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作用。ITIM受體包括血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(plateletendothelialcelladhesionmolecule-1,PE-CAM-1)、癌胚抗原黏附分子-1/-2(carcinoembryonicantigencelladhesionmolecule-1/-2,CEACAM-1和CEACAM-2)和G6b-B。這些受體在細(xì)胞質(zhì)尾部具有共同的序列，能夠與包含非跨膜ptp、SHP-1和SHP-2的SH2構(gòu)造域結(jié)合，導(dǎo)致酪氨酸家族激酶的磷酸化，防止SFKs激活整合素IIb3[10]。酪氨酸激酶Syk和LAT去磷酸化后，還能夠通過抑制PLC的磷酸化和PIP3的水解，發(fā)揮抑制血小板活化的作用[11]。圖1血小板負(fù)性調(diào)控機(jī)制圖TULA-2:T細(xì)胞泛素配體-2;ADP：二磷酸腺苷；PLC：磷脂酶C;PIP2:4,5-磷脂酰肌醇二磷酸；IP3:1,4,5-三磷酸肌醇；DAG：甘油二酯；cAMP：環(huán)磷酸腺苷；PI3K：磷脂酰肌醇-3-激酶；AKT：蛋白激酶B;cGMP：環(huán)磷酸鳥苷；PPAR：過氧化物酶體增殖物活化受體；FXR：法尼酯X受體；RXR：視黃醇X受體；NFB：核因子B;NO：一氧化氮；ITIM：免疫受體酪氨酸抑制基序；PECAM-1：血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1;PKA：蛋白激酶A;PKG：蛋白激酶G4、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子PECAM-1又稱CD31，相對(duì)分子質(zhì)量大約為130000，屬于免疫球蛋白超家族，可與整合素v3結(jié)合，主要表示出于血小板、白細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，介入吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞活化T細(xì)胞穿越毛細(xì)血管壁的經(jīng)過[12]。PECAM-1由6個(gè)免疫球蛋白同源構(gòu)造域、19個(gè)殘基單通道跨膜構(gòu)造域和118個(gè)氨基酸細(xì)胞質(zhì)尾組成。PECAM-1在血小板中是其抑制性受體，在血小板負(fù)性調(diào)控的作用下，PECAM-1活化，其胞內(nèi)段的Y663和Y686位點(diǎn)激活蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase,PTK)，使ITIM磷酸化，成為含SH2構(gòu)造域的酪氨酸磷酸酶(SHP-1、SHP-2、SHIP)的潛在結(jié)合位點(diǎn)[13]。構(gòu)成PECAM-1/SHP-2復(fù)合物，在循環(huán)血細(xì)胞中能夠抑制太多的酪氨酸激酶的激活。SHP-1通過水解PIP2抑制第二信使IP3和DAG的構(gòu)成，阻斷血小板中Ca2+的外流，使Ca2+濃度降低，抑制PKC的活化，進(jìn)而抑制血小板的活化[14]。5、癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子-1(carcinembryonicantigenrelatedcellularadhesionmolecule-1,CEA-CAM-1)，也被稱作CD66a、膽汁糖蛋白(biliarglyeoprotein,BGP)和C-CAM，是一種細(xì)胞外表跨膜糖蛋白，也是癌胚抗原家族的一個(gè)成員，屬于免疫球蛋白超家族黏附分子。CEACAM-1廣泛地表示出于上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，具有延緩腫瘤的生長及上皮細(xì)胞的增殖、阻止T淋巴細(xì)胞的活化、促進(jìn)血管的構(gòu)成等多種生物作用。CEACAM-1/-2在鼠和人血小板中均有表示出，CEACAM-1與SHP-1以及SHP-2結(jié)合，誘導(dǎo)SFK脫磷酸化，非活性SFK不能磷酸化膠原介導(dǎo)的GPVI/FcR血小板活化信號(hào)通路[15]。CEACAM-2用于負(fù)性調(diào)節(jié)膠原誘導(dǎo)的GPVI-FcRg-鏈、C-型凝集素樣受體-2(C-typelectinlikereceptor-2,CLEC-2)和誘導(dǎo)的血小板活化信號(hào)傳導(dǎo)途徑。CEACAM-2具有基于ITIM介導(dǎo)的黏附和信號(hào)傳導(dǎo)特性。CEACAM在血小板活化后易位至細(xì)胞外表，并介入否認(rèn)整合素由內(nèi)向外的信號(hào)通路調(diào)節(jié)，在CEACAM-2基因敲除小鼠中，血栓構(gòu)成愈加穩(wěn)定，血小板對(duì)膠原誘導(dǎo)血小板的活化更靈敏[16]。6、G6b-BG6b-B是I型跨膜糖蛋白，由單個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白樣可變型構(gòu)造域、跨膜區(qū)和細(xì)胞質(zhì)尾組成。細(xì)胞質(zhì)尾部含有富含脯氨酸的脯氨酸區(qū)域、ITIM和C末端ITSM。G6b-B抑制膠原相關(guān)肽(collagenrelatedpeptide,CRP)和二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集。G6b屬于免疫球蛋白超家族，有G6b-A和G6b-B兩種亞型，是血小板穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。G6b對(duì)血小板穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)依靠于蛋白酪氨酸磷酸酶對(duì)SHP-1和SHP-2的募集作用，通過阻斷底物結(jié)合蛋白酪氨酸磷酸酶，進(jìn)而抑制蛋白酪氨酸磷酸酶對(duì)血小板的活化作用。在G6b-B基因敲除小鼠中，巨核細(xì)胞的金屬蛋白酶濃度升高，促進(jìn)血小板外表受體GPVI和GPIb的水解，抑制整合素由內(nèi)向外的信號(hào)傳導(dǎo)，阻斷血小板活化信號(hào)途徑[17]。7、內(nèi)皮細(xì)胞選擇性黏附分子內(nèi)皮細(xì)胞選擇性黏附分子(endothelialcellselectiveadhesionmolecule,ESAM)是一種相對(duì)分子質(zhì)量約55000的I型膜糖蛋白，具有兩個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白構(gòu)造域(V型和C2型)。ESAM在巨核細(xì)胞和血小板中特異性表示出，儲(chǔ)存在顆粒中。在ESAM基因敲除小鼠中，血小板的最大聚集率和血栓栓塊明顯增大，在尾部橫斷后能實(shí)現(xiàn)更穩(wěn)定的止血。盡管聚集增加，但ESAM基因敲除小鼠中血小板在細(xì)胞溶質(zhì)鈣發(fā)動(dòng)和IIb3活化方面沒有明顯變化，可能ESAM依靠相鄰細(xì)胞分子的同源性發(fā)揮其作用[18]。8、蛋白酪氨酸磷酸酶途徑T細(xì)胞泛素配體-2(T-cellubiquitinligand-2,TULA-2)又稱為p70、STS-1和UBASH3B，是一種蛋白酪氨酸磷酸酶，在T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、破骨細(xì)胞以及血小板中發(fā)揮抑制受體信號(hào)傳遞的作用。TULA-2與Syk的Tyr(P)346位點(diǎn)結(jié)合，使其去磷酸化，減弱Syk激酶的活性，抑制GPVI的信號(hào)傳導(dǎo)，繼而下調(diào)PLC途徑介導(dǎo)的血小板活化途徑，抑制Ca2+的釋放，降低血小板內(nèi)鈣離子的濃度，減少顆粒釋放，抑制血小板的活化[19]。研究發(fā)現(xiàn)，在TULTA-2基因敲除小鼠中，小鼠的尾出血時(shí)間明顯縮短，血栓構(gòu)成愈加穩(wěn)定[20]。9、整合素整合素(integrin)是亞基和亞基以非共價(jià)鍵形式連接組成的異二聚體，是一種跨膜糖蛋白受體，其家族成員在構(gòu)造上的共同點(diǎn)是由胞外區(qū)、跨膜區(qū)及胞內(nèi)區(qū)三部分組成[21]。血小板誘導(dǎo)劑作用于血小板外表的非整合素受體后，引起PI3K/AKT的磷酸化，進(jìn)而使Talin和Kindlins蛋白結(jié)合到整合素亞基的尾部，經(jīng)Inside-out信號(hào)通路活化整合素受體，使得膜外表本來處于靜息狀態(tài)的整合素發(fā)生構(gòu)象改變而被激活?；罨腎Ib3與血漿中的纖維蛋白原和vWF結(jié)合，導(dǎo)致血小板互相聚集成團(tuán)，構(gòu)成血小板血栓[22]。隨著血小板的活化，整合素IIb3介導(dǎo)的Outside-in的信號(hào)導(dǎo)致Talin和Kindlin-3從整合素3上脫落，促使已經(jīng)激活的整合素失活。同時(shí)整合素Outside-in的信號(hào)激活SHIP-1,SHIP-1介導(dǎo)AKT去磷酸化，導(dǎo)致PI3K/AKT信號(hào)通路失活。同時(shí)，SHIP-1還抑制血小板ATP的釋放，由于已經(jīng)激活的整合素發(fā)生失活，又沒有新的釋放物刺激整合素再次激活，所以已經(jīng)聚集的血小板發(fā)生解聚。當(dāng)?shù)蛣┝康娜跽T導(dǎo)劑ADP誘導(dǎo)時(shí)，整合素IIb3的outside-in信號(hào)通路能夠產(chǎn)生負(fù)調(diào)控信號(hào)抑制血小扳聚集，而這種負(fù)調(diào)控信號(hào)在大劑量誘導(dǎo)劑或強(qiáng)誘導(dǎo)劑的作用下會(huì)被正調(diào)控信號(hào)所掩蓋[23]。10、核受體核受體(nuclearreceptor,NR)是細(xì)胞核內(nèi)的配體依靠性的轉(zhuǎn)錄因子，諸多生理學(xué)經(jīng)過需要內(nèi)分泌信號(hào)與人體內(nèi)的受體進(jìn)行協(xié)同調(diào)節(jié)，如：雄激素受體(androgenreceptor,AR)、孕激素受體(progesteronereceptor,PR)和雌激素受體(estrogenreceptor,ER)在生殖中起重要作用；糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoidreceptor,GR)在葡萄糖代謝和炎癥中起作用；甲狀腺激素受體(thyroidhormonereceptor,TR)在有氧代謝方面起作用；過氧化物酶體增殖物活化受體(peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR)調(diào)節(jié)脂質(zhì)和能量代謝等。核受體通過基因組和非基因組兩種方式發(fā)揮作用，而血小板中的核受體通過非基因組的方式發(fā)揮作用。盡管血小板是無核細(xì)胞，但含有mRNA、rRNA、tRNA、miRNA、核受體及核因子NFB，這些與基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)的因子和RNA都來源于血小板脫落時(shí)的巨核細(xì)胞[24]。血小板中的核受體主要通過升高cAMP和cGMP的濃度和負(fù)性調(diào)控GPVI信號(hào)途徑抑制血小板活化。肝X受體(liverXreceptor,LXR)與配體結(jié)合后，一方面促進(jìn)血小板變形、顆粒釋放以及磷脂酰絲氨酸暴露，使血小板處于促凝狀態(tài)；另一方面使整合素頭部彎曲、處于靜息狀態(tài)，并去磷酸化酪氨酸激酶LAT和Syk，減弱PLC對(duì)PIP2的水解作用，降低第二信使DAG和IP3的濃度，促進(jìn)Ca2+外流，抑制PKC對(duì)血小板的活化作用，最終使血小板處于抑制狀態(tài)。法尼酯X受體(farnesoidXreceptor,FXR)升高cGMP的濃度，激活PKG，而PPAR升高cAMP的濃度，激活PKA，抑制血小板活化。FXR配體與受體結(jié)合，作用于核因子NFB，通過PKA抑制血小板活化。維甲酸受體家族是華而不實(shí)的重要組成部分。維甲酸核受體又可分為視黃酸受體(retinoidacidreceptor,RAR)和視黃醇X受體(retinoidXreceptor,RXR)，均包括、、三種亞型。已有文獻(xiàn)報(bào)道[25],RXR與相應(yīng)配體(如貝沙羅汀、9-順式視黃酸、二十二碳六烯酸和甲戊二酸等)結(jié)合后，作用于核因子NFB，激活PKA。PKA是蛋白激酶A，其活性遭到細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度水平的調(diào)節(jié)，并且可通過底物GPIbSer166的磷酸化程度來表示PKA的活化程度。PKA還能夠抑制PLC的磷酸化和改變整合素的構(gòu)型，促進(jìn)血小板解聚，使血小板恢復(fù)到靜息水平[26]。核因子NFB是一種調(diào)節(jié)因子，在炎癥和血管損傷時(shí)發(fā)揮重要作用。核因子NFB不僅能通過PKA抑制血小板活化和血栓構(gòu)成，還能夠促進(jìn)血小板膜糖蛋白(plateletglycoproteinIb,GPIb)的脫落，阻斷血小板活化信號(hào)的傳遞[27]。核受體包括PPAR、LXR和FXR等配體，具有抗血小板活化和動(dòng)脈粥樣硬化的作用。這些配體提供了一種潛在的新型治療形式，能夠靶向抗血栓和改善其他一系列病理生理?xiàng)l件[28]。11、LIM-Domain家族LIM構(gòu)造域(LIM-Domain)蛋白家族一共有7個(gè)成員，具有類似的構(gòu)造和生物學(xué)功能。LIM構(gòu)造域家族成員包括CLP36、Paxillin、Hic-5和leupaxin，都與血小板激活有關(guān)。Hic-5主要表示出于人血小板；CLP36、Paxillin和leupaxin在人和鼠血小板均有表示出。CLP相對(duì)分子質(zhì)量為38000,N端由一個(gè)PDZ構(gòu)造域組成，C端由3個(gè)LIM構(gòu)造域組成。CLP36基因敲除小鼠的血小板可由CRP、膠原蛋白和convulxin誘導(dǎo)，而ADP和凝血酶并不能誘導(dǎo)血小板活化。CLP36負(fù)性調(diào)節(jié)血小板活化主要與抑制GPVI-ITAM-PLC2信號(hào)通路有關(guān)。在CLP36基因敲除小鼠中，GPVI介導(dǎo)的血小板活化途徑中PLC的活性加強(qiáng)，增加Ca2+的釋放和Ca2+流入，進(jìn)而誘導(dǎo)更快的-顆粒和致密顆粒的釋放以及整合素的激活[29]。Paxillin是一種LIM構(gòu)造域蛋白，最初被鑒定為癌基因v-src的底物[27]。Paxillin敲除小鼠中血小板略微增大，且其血小板黏附能力加強(qiáng)、體內(nèi)血栓構(gòu)成增加、TXA2的合成和致密顆粒的釋放也得到了加強(qiáng)。Paxillin還能夠通過抑制整合素IIb3的活化發(fā)揮抑制血小板聚集的作用[30]。12、其它血小板負(fù)性調(diào)節(jié)因子磷脂酶D(phospholipaseD,PLD)催化磷脂酰膽堿水解成磷脂酸(phosphatidicacid,PA)和膽堿，PLD介入廣泛的細(xì)胞生物學(xué)經(jīng)過，包括脫顆粒、內(nèi)吞作用、細(xì)胞侵襲和細(xì)胞骨架重組[31]。除此之外，PLD還能夠調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生、癌細(xì)胞的存活和侵襲。PLD具有兩種亞型PLD1和PLD2，都含有N端氨基酸和C端氨基酸，C端氨基酸對(duì)PLD的正確折疊影響較大，N端氨基酸對(duì)其催化反響的作用較為明顯[32]。PLD1可被PKC和小GTP酶激活。血小板中缺乏PLD1會(huì)抑制整合素IIb3的活化和血栓的構(gòu)成，但脫顆粒和聚集作用不受影響。PLD2是血小板敏感型的潛在負(fù)調(diào)節(jié)因子，PLD2被多種沖動(dòng)劑激活，如膠原蛋白、凝血酶和TXA2。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，包括三個(gè)主要亞組：ERK、p38MAPK和JNK。ERK、p38MAPK和JNK1存在于血小板中，由各種沖動(dòng)劑激活，并介入血小板顆粒的釋放、聚集、黏附和血栓構(gòu)成。研究表示清楚，PLD通過MAPK和AKT途徑抑制血小板活化、顆粒釋放和隨后的血小板聚集[33]。PrxII(peroxiredoxinII)是一種細(xì)胞過氧化物酶，可分解血小板內(nèi)的過氧化氫(H2O2)。H2O2具有促進(jìn)GPVI信號(hào)激活的作用。PrxII/SHP-2介導(dǎo)的抑制血小板活化發(fā)生在脂筏中。PrxII主要通過下調(diào)GPVI的信號(hào)傳導(dǎo)抑制血小板的活化[34]。PrxII缺陷型血小板在體外顯示出黏附和聚集活性功能的加強(qiáng)。適配器蛋白2(adapterproteindisabled2,DAB2)包含三個(gè)構(gòu)造域：N末端磷酸酪氨酸結(jié)合(PTB)構(gòu)造域、天冬氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸(DPF)基序和C末端富含脯氨酸的區(qū)域。人的DAB2基因位于染色體5p13位，DAB2來源于血小板活化后的致密顆粒中，DAB2能夠觸發(fā)多種生物學(xué)反響，介入胞吞作用和抑制血小板的聚集反響。DAB2的RGD構(gòu)造域通過磷酸化作用與整合素IIb3的胞外區(qū)結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)整合素與纖維蛋白原的結(jié)合，進(jìn)而抑制血小板的聚集。DAB2基因敲除小鼠中，凝血酶誘導(dǎo)血小板聚集，栓塊收縮，并在纖維蛋白原上擴(kuò)散，伸出偽足，構(gòu)成血小板聚集體[35]。硫氧還蛋白相關(guān)跨膜蛋白1(thioredoxin-relatedtransmembraneprotein1,TMX1)是一種蛋白二硫異構(gòu)酶，屬于胞外血小板抑制劑，也是第一個(gè)負(fù)性調(diào)控血小板功能的二硫異構(gòu)酶。TMX1主要通過二硫鍵的作用使整合素處于靜息狀態(tài)，進(jìn)而抑制血小板聚集和ATP的釋放，發(fā)揮抗血小板活化的作用[36]。當(dāng)前臨床上常用的抗血小板藥物如氯吡格雷、阿西單抗、阿司匹林等，具有強(qiáng)大的抗血小板聚集作用，但同時(shí)也易產(chǎn)生出血等副作用。一方面抗血小板藥物影響了血小板的正常生理止血作用；另一方面，在血栓栓塞性疾病中，由血小板負(fù)性調(diào)控機(jī)制介導(dǎo)的解聚功能下降，不能使血小板恢復(fù)至靜息狀態(tài)，進(jìn)一步增加了出血的風(fēng)險(xiǎn)。健康血管脈絡(luò)系統(tǒng)釋放出NO和PGI2，使血小板處于抑制狀態(tài)；當(dāng)血小板活化后，內(nèi)源性負(fù)性調(diào)控機(jī)制能夠控制血小板的過度活化，使血小板處于靜息狀態(tài)。因而，我們能夠通過研究血小板的負(fù)性調(diào)控機(jī)制，討論其潛在的治療意義，從血小板解聚的角度出發(fā)，研發(fā)出新型防治血栓、同時(shí)又能降低出血風(fēng)險(xiǎn)的藥物[37]。以下為參考文獻(xiàn)[1]NguyenTH,PalankarR,BuiVC,etal.Ruptureforcesamonghumanbloodplateletsatdifferentdegreesofactivation.SciRep,2021,5(6):25402-25414[2]BarrettTJ,SchlegelM,ZhouF,etal.Plateletregulationofmyeloidsuppressorofcytokinesignaling3acceleratesatherosclerosis.SciTranslMed,2022,11(517):481-492[3]StalkerTJ,NewmanDK,MaP,etal.Plateletsignaling.HandbExpPharmacol,2020,3(210):59-85[4]GligorijevicN,RobajacD,NedicO.EnhancedplateletsensitivitytoIGF-1inpatientswithtype2diabetesmellitus.Biochemistry,2022,84(10):1213-1219[5]ByeAP,UnsworthAJ,GibbinsJM.Plateletsignaling:acomplexinterplaybetweeninhibitoryandactivatorynetworks.JThrombHaemost,2021,14(5):918-930[6]RadomskiMW,PalmerRM,MoncadaS.AnL-arginine/nitricoxidepathwaypresentinhumanplateletsregulatesaggregation.JNatlAcad,1990,87(13):5193-5197[7]SmolenskiA.NovelroleofcAMP/cGMP-dependentsignalinginplatelets.JThrombHaemost,2020,10(2):167-176[8]DangelO,MergiaE,KarlischK,etal.Nitricoxide-sensitiveguanylylcyclaseistheonlynitricoxidereceptormediatingplateletinhibition.JThrombHaemost,2018,8(6):1343-1352[9]LvL,JiangSS,XuJ,etal.Protectiveeffectofligustrazineagainstmyocardialischaemiareperfusioninrats:theroleofendothelialnitricoxidesynthase.ClinExpPharmacolPhysiol,2020,39(1):20-27[10]WalshMT,KinsellaBT.RegulationofthehumanprostanoidTPandTPreceptorisoformsmediatedthroughactivationoftheEP1andIPreceptors.BrJPharmacol,2000,131(3):601-609[11]CoxonCH,GeerMJ,SenisYA.ITIMreceptors:morethanjustinhibitorsofplateletactivation.Blood,2021,129(26):3407-3418[12]TourdotBE,BrennerMK,KeoughKC,etal.Immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif(ITIM)-mediatedinhibitorysignalingisregulatedbysequentialphosphorylationmediatedbydistinctnonreceptortyrosinekinases:acasestudyinvolvingPECAM-1.Biochemistry,2020,52(15):2597-2608[13]NewmanPJ,NewmanDK.SignaltransductionpathwaysmediatedbyPECAM-1:newrolesforanoldmoleculeinplateletandvascularcellbiology.ArteriosclerThrombVascBiol,2003,23(6):953-964[14]MoraesLA,BarrettNE,JonesCI,etal.Plateletendothelialcelladhesionmolecule-1regulatescollagen-stimulatedplateletfunctionbymodulatingtheassociationofphosphatidylinositol3-kinasewithGrb-2-associatedbindingprotein-1andlinkerforactivationofTcells.JThrombHaemost,2018,8(11):2530-2541[15]HuM,liuP,LiuY,etal.PlateletShp2negativelyregulatesthrombusstabilityunderhighshearstress.JThrombHaemost,2022,17(1):220-231[16]WongC,LiuY,YipJ,etal.CEACAM1negativelyregulatesplatelet-collageninteractionsandthrombusgrowthinvitroandinvivo.Blood,2018,113(8):1818-1828[17]StalkerTJ,WuJ,MorgansA,etal.Endothelialcellspecificadhesionmolecule(ESAM)localizestoplatelet-plateletcontactsandregulatesthrombusformationinvivo.JThrombHaemost,2018,7(11):1886-1896[18]CoxonCH,SadlerAJ,HuoJ,etal.Aninvestigationofhierachicalproteinrecruitmenttotheinhibitoryplateletreceptor,G6B-b.PLoSOne,2020,7(11):49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