病毒感染的預(yù)防診斷和治療概要

第四章病毒感染的預(yù)防、診斷和治療第一節(jié)

病毒性疾病的預(yù)防病毒感染的預(yù)防、診斷和治療Preventionisbetterthan

cure!良好的公眾健康

預(yù)防接種Vaccinationisakeytoolagainstviraldiseases.有效的公共措施適當(dāng)?shù)酿B(yǎng)分良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣病毒疫苗人類(lèi)運(yùn)用病毒疫苗的歷史：1796年EdwardJenner用牛痘預(yù)防天花感染；1884年LouisPasteur制備狂犬疫苗；20世紀(jì)30年頭抗黃熱病、流感病毒疫苗出現(xiàn)；此后，大量病毒疫苗問(wèn)世，實(shí)施大規(guī)模預(yù)防接種。免疫是20世紀(jì)在公共衛(wèi)生上的最宏大的成功。

支配免疫（第一類(lèi)疫苗）自費(fèi)免疫（其次類(lèi)疫苗）支配免疫的主要內(nèi)容是“接種五苗防七病”，即：依據(jù)免疫程序，對(duì)7周歲以下兒童有支配地進(jìn)行卡介苗、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗、百白破三聯(lián)混合制劑、麻疹疫苗和乙肝疫苗的基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫接種。另一部分國(guó)家沒(méi)有納入支配免疫范疇。例如，預(yù)防水痘、甲肝等疾病的疫苗。我國(guó)的疫苗接種1980年WHO宣布已在全世界范圍內(nèi)殲滅天花。脊髓灰質(zhì)炎病毒、麻疹病毒也將隨后滅亡.導(dǎo)致某種病毒滅亡的必要因素是什么？該病毒必需沒(méi)有可替代的宿主；感染或接種必需能產(chǎn)生維持一生的長(zhǎng)久免疫力。Attributesofagoodvaccine

1.Abilitytoelicittheappropriateimmuneresponsefortheparticularpathogen2.Longtermprotection

ideallylife-long

3.Safety

vaccineitselfshouldnotcausedisease

4.Stable

5.Inexpensive病毒疫苗依據(jù)其存在狀態(tài)和化學(xué)組成可分為：活疫苗(減毒活疫苗、重組活病毒載體疫苗）滅活疫苗亞單位疫苗（基因工程疫苗）DNA疫苗多肽疫苗……減毒活疫苗(liveattenuatedvaccine)指通過(guò)不同的方法手段使病毒的毒力即致病性減弱或丟失。疫苗由完整的活病毒組成。如麻疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗（Sabin苗）如何獲得減毒株？野毒株在非自然宿主中反復(fù)傳代3型減毒脊髓灰質(zhì)炎病毒P3/Leon/37(分別自嚴(yán)峻癱瘓病人）invivo繁殖21代（猴腦內(nèi)）invitro培育8代（猴睪丸培育物）invitro培育39代（猴腎培育物）病斑純化3次（猴腎培育物）invitro培育3代(制備，猴腎培育物）Sabin疫苗株P(guān)3/Leon12a1bKP3/563型減毒脊髓灰質(zhì)炎病毒活疫苗Sabin的由來(lái)如何獲得減毒株？野毒株在非正常宿主中反復(fù)傳代冷適應(yīng)病毒株（ts株）如流感疫苗

重組病毒株如輪狀病毒疫苗反向遺傳學(xué)方法Attributesofliveattenuatedvaccines

Immuneresponse

BothCellMediatedImmunityandantibodyresponses.ImmunityislonglivedSingledose

Safety

Dangerofreversiontovirulence,orSeverediseaseinimmunocompromised

Stability

OrganismsinthevaccinemustremainviableinordertoinfectandreplicateinthehostVaccinepreparationsarethereforeverysensitivetoadversestorageconditionsMaintenanceofthecoldchainisveryimportant.

Expense

CheaptoprepareAttributesofliveattenuatedvaccines

(continued)重組活病毒載體疫苗將編碼某一蛋白抗原的基因轉(zhuǎn)入減毒的病毒的基因組而制成的疫苗.滅活病毒疫苗(inactivatedvirusvaccines)指用滅活劑處理活的病毒，使其失去感染性，但仍舊保留病毒的全部或部分免疫原性。是由完整病毒組成。如流感滅活疫苗、狂犬疫苗

Mostwidelyusedmethodsofinactivation:

Formaldehyde甲醛

Propiolactone?-丙酸內(nèi)酯Ethyleneoxide環(huán)氧乙烷T(mén)hesesubstancesproducecrossedlinkinginthenucleicacidchains,inactivatingthevirionbutnotitsproteins.Attributesofinactivatedvaccines

Immuneresponse

poor;

onlyantibody-nocellmediatedimmuneresponse.responseisshort-livedandmultipledosesareneeded.maybeenhancedbytheincorporationof

adjuvants

intothevaccinepreparation.Safety

Inactivated,thereforecannotreplicateinthehostandcausedisease.Localreactionsatthesiteofinjectionmayoccur.

Attributesofinactivatedvaccines(continued)Stability

Efficacyofthevaccinedoesnotrelyontheviabilityoftheorganisms.Thesevaccinestendtobeabletowithstandmoreadversestorageconditions.

Expense

Expensivetoprepare.亞單位疫苗(subunitvaccine)：用純化的病毒抗原性組分而不是全病毒作疫苗。如乙肝疫苗:Canbepurifiedfromorganism(血源疫苗)Canberecombinantprotein(基因工程疫苗)Attributesofsubunitvaccine:

Similartoinactivatedvaccine:stable,poorimmunogenicity,expensive……Safeandfewerlocalreactionsoccurattheinjectionsite.核酸疫苗（nucleicacidvaccines)：將能引起機(jī)體愛(ài)護(hù)性免疫反應(yīng)的病原體抗原的編碼基因克隆入表達(dá)載體，將其干脆導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞后，通過(guò)宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達(dá)蛋白抗原，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。Onlyexperimental.

AttributesofDNAvaccines

EffectiveatbothCellularandhumoralimmuneresponses;Long-livedprotection;Easyandinexpensivetomanufacture;Stable;Safe.多肽疫苗(peptidevaccines)：

Generalizedmembrane-boundproteinwithexternalepitopes依據(jù)抗原蛋白的抗原表位合成的疫苗。免疫愛(ài)護(hù)機(jī)制明確病毒易于培育傳統(tǒng)疫苗免疫愛(ài)護(hù)機(jī)制不清晰可能誘導(dǎo)免疫病理反應(yīng)有潛在致腫瘤作用病毒不易進(jìn)行培育新型疫苗其次節(jié)病毒感染的試驗(yàn)室診斷舉例:常見(jiàn)臨床癥狀與相關(guān)病毒上呼吸道感染:鼻病毒、合胞病毒、腺病毒、冠狀病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、副流感病毒、腸道病毒、呼腸病毒…病毒性腹瀉:輪狀病毒、諾瓦克病毒、腺病毒、冠狀病毒…肝炎:肝炎病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、柯薩奇病毒A4,9，B5型、?？刹《?,9型…皮疹：麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、人類(lèi)皰疹病毒6型、柯薩奇病毒A4-6,9,16型、埃可病毒2,4,6,9,11,16,18型…病毒感染的試驗(yàn)室檢查病毒的分別與鑒定病毒核酸的干脆檢出病毒抗原的干脆檢出特異性抗體的檢測(cè)一、標(biāo)本的采集與送檢供病毒分別、核酸和抗原檢出的標(biāo)本早：在發(fā)病初期（急性期）采集近：在病變部位取樣快：采得的簇新標(biāo)本應(yīng)盡快冷藏送檢多:標(biāo)本的量不能太少,一次取多種標(biāo)本凈:加入抗生素,避開(kāi)標(biāo)本污染…鼻咽洗漱液或咯痰糞便腦脊液病灶組織血液……呼吸道感染腸道感染腦內(nèi)感染皮膚感染有病毒血癥……

供特異性抗體檢測(cè)的標(biāo)本實(shí)行急性期和復(fù)原期雙份血清(IgG)血清標(biāo)本放4℃保存.長(zhǎng)期-20℃檢測(cè)前血清標(biāo)本56℃30分鐘處理采取標(biāo)本的時(shí)期檢查病毒及其成分

測(cè)定抗體潛伏期及前驅(qū)期剛發(fā)病或急性期恢復(fù)期及康復(fù)期較難查見(jiàn)最多查見(jiàn)很難查見(jiàn)未增多未增多或增多不明顯明顯增多（常超過(guò)4倍）病毒檢材采集與檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系二、病毒的分別與鑒定意義：從病變部位或血液中分別到病毒是病毒性疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。However耗時(shí)長(zhǎng)，一般只能做回顧性診斷成本和技術(shù)要求高敏感性不高有些病毒無(wú)法或極難培育，不同的病毒須要不同的分別方法病毒分離鑒定的一般程序待檢標(biāo)本→殺滅雜菌→接種易感的動(dòng)物→出現(xiàn)病狀雞胚→病變或死亡細(xì)胞培育→細(xì)胞病變→鑒定病毒病毒分別培育的方法動(dòng)物接種:最早最原始的病毒培育方法.雞胚接種:用受精孵化的活雞胚細(xì)胞培育:用分散的活細(xì)胞,適于絕大多數(shù)病毒的培育.

依據(jù)細(xì)胞的來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)將培育細(xì)胞分為三類(lèi)：1）原代細(xì)胞：干脆從動(dòng)物或人的組織中分別獲得的細(xì)胞。2）二倍體細(xì)胞：細(xì)胞染色體維持正常的二倍體數(shù)目，經(jīng)有限次數(shù)的傳代后漸漸蒼老死亡的細(xì)胞。3）傳代細(xì)胞：具有無(wú)限繁殖實(shí)力，能反復(fù)進(jìn)行傳代的細(xì)胞。分別病毒的鑒定1.

病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE):

指某些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)引起的特有的細(xì)胞病變。包括……fibroblasticcells-herpessimplexvirusuninfectedearlyinfectionlate

infectionslidesfromCDCepithelialcells-respiratorysyncytialvirusuninfectedrespiratorysyncytialvirusslidesfromCDC分別病毒的鑒定1.

病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE):

紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象(hemadsorption):

流感病毒和某些副粘病毒感染細(xì)胞后24-48小時(shí)，細(xì)胞膜上出現(xiàn)病毒的血凝素，能吸附豚鼠、雞等動(dòng)物及人的紅細(xì)胞，發(fā)生紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。分別病毒的鑒定1.

病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE):

紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象(hemadsorption):干擾現(xiàn)象（interference):細(xì)胞代謝的變更：……2.病毒形態(tài)和結(jié)構(gòu)的視察3.血清學(xué)鑒定4.病毒感染性的定量測(cè)定

蝕斑形成單位測(cè)定半數(shù)感染量測(cè)定Virustiter

病毒效價(jià)滴度蝕斑：病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制后形成的肉眼可見(jiàn)的局限性病灶。蝕斑形成單位(plaqueformingunit,pfu)：

由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制而形成的蝕斑。PFU/ml蝕斑形成單位測(cè)定半數(shù)感染量(ID50,50%infectivedose):

病毒感染動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小病毒劑量。用來(lái)估算病毒感染性的強(qiáng)弱或含量。LD50=50%lethaldoseEID50=50%egginfectivedoseTCID50=50%tissuecultureinfectivedose)三、病毒核酸的干脆檢出核酸雜交多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)優(yōu)、缺點(diǎn)意義：病毒核酸陽(yáng)性一般可作為診斷病毒感染的依據(jù).四、病毒抗原的干脆檢出基本原理：標(biāo)記的抗病毒抗體與相應(yīng)的病毒抗原結(jié)合或反應(yīng)，通過(guò)某種指示系統(tǒng)顯示病毒抗原的存在。意義:：對(duì)大多數(shù)病毒而言，病毒抗原陽(yáng)性一般可作為診斷急性病毒感染的依據(jù)。該方法能用于早期快速診斷病毒感染，特殊適用于臨床.Moleculesusedtolabelantibodiesandtechniquesusedtodetectthem五、特異性抗體的檢測(cè)基本原理:已知的病毒抗原和相應(yīng)的抗體特異性地結(jié)合或反應(yīng)，通過(guò)某種指示系統(tǒng)顯示病毒抗體的存在。意義：復(fù)原期血清中抗病毒抗體滴度≥4倍上升有診斷意義；血清抗病毒IgM抗體陽(yáng)性可作為診斷該病毒近期感染的依據(jù).不能用于早期診斷用于流行病學(xué)調(diào)查中和試驗(yàn)(neutralizingtest,NTtest)病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培育中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗(yàn)..補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（complementfixationtest,CFtest)血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest,HItest)IgM捕獲ELISA六、病毒感染的快速檢測(cè)指干脆從標(biāo)本中檢測(cè)病毒或其成分、IgM等，快速得出結(jié)果。形態(tài)學(xué)檢查病毒抗原檢查檢測(cè)病毒核酸特異性IgM檢測(cè)第三節(jié)抗病毒治療

*抗病毒化學(xué)制劑----抑制病毒復(fù)制

*

抗病毒生物制劑----抗病毒、提高機(jī)體的免疫應(yīng)答

一、抗病毒化學(xué)制劑

核苷類(lèi)似物（Nucleotideanalogues）皰疹凈病毒唑疊氮胸苷雙脫氧肌苷如：碘尿苷(IDU,皰疹凈)與脫氧胸苷競(jìng)爭(zhēng)，摻入病毒DNA分子對(duì)選擇性不強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞有確定毒性。（皮膚皰疹、痘病毒感染）

核苷類(lèi)似物如：無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(acyclovir,ACV,阿昔洛韋)

對(duì)病毒選擇性高，對(duì)細(xì)胞毒性小。（HSV,VZV)如：疊氮胸苷(Azidothymidine,AZT)

脫氧胸苷類(lèi)似物與逆轉(zhuǎn)錄酶有強(qiáng)親和力，但也抑制細(xì)胞DNA合成。如：拉米夫定(Lamivudine,3TC)

脫氧胞苷類(lèi)似物

抑制逆轉(zhuǎn)錄酶（HIV,HBV）如：雙脫氧肌苷，雙脫氧胞苷