實(shí)驗(yàn)一雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

關(guān)于實(shí)驗(yàn)一雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)第1頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第2頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第3頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三γμδαε第4頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第5頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私怆p向瓊脂擴(kuò)散的原理和用途。掌握抗體效價(jià)的測(cè)定方法。觀察抗原、抗體在瓊脂板中形成的沉淀線。第6頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來(lái)源的蛋白質(zhì)、多糖質(zhì)、類脂體等）與其相應(yīng)的抗體相遇后，在電解質(zhì)參與下，抗原抗體結(jié)合形成白色絮狀沉淀，出現(xiàn)白色沉淀線，此種現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發(fā)生反應(yīng)的抗體稱為沉淀素（precipitin）。沉淀反應(yīng)主要包括有環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)原理第7頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第8頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

將可溶性抗原和抗體置于瓊脂凝膠板的對(duì)應(yīng)孔中，兩者各自在凝膠中向四周自由擴(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時(shí)形成可見(jiàn)的白色沉淀線。沉淀線的特征與抗原抗體的濃度、純度和擴(kuò)散速率等有關(guān)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)第9頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一種抗原抗體系統(tǒng)只出現(xiàn)一條沉淀帶根據(jù)沉淀帶出現(xiàn)的數(shù)目、位置以及相鄰二條沉淀帶之間的融合、交叉、分枝等情況，就可了解該復(fù)合抗原的組成。

第10頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)

A：Ag、Ab濃度及擴(kuò)散率近似；B：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＜Ab；D：擴(kuò)散率近似，濃度Ag＞Ab；E：濃度Ag＞Ab，擴(kuò)散率Ag＞Ab；F：濃度Ag＜Ab，擴(kuò)散率Ag＜Ab沉淀線形狀、位置與抗原抗體擴(kuò)散率及濃度的關(guān)系第11頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)

(1)沉淀線吻合：待檢抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原完全相同。(2)沉淀線相切：待檢抗原中含有與標(biāo)準(zhǔn)抗原相同的抗原，還含有另外的抗原與抗血清相對(duì)應(yīng)。(3)沉淀線相交：待檢抗原有與抗血清對(duì)應(yīng)的抗原，但和標(biāo)準(zhǔn)抗原不同。(4)沉淀線部分吻合：待測(cè)抗原和標(biāo)準(zhǔn)抗原性質(zhì)相同，但含量較低。A1：待檢抗原；A2：標(biāo)準(zhǔn)抗原第12頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三抗體效價(jià)滴定

用梅花型孔，中間放抗原，周圍孔放下不同稀釋度的相應(yīng)抗體，以出現(xiàn)沉淀線的最高稀釋倍數(shù)為該抗體的效價(jià)。

免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)第13頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三材料與試劑1．瓊脂粉2．平皿3．打孔器4．生理鹽水或其他緩沖液5.抗原、抗體第14頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第15頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三操作方法1．稱取一定量的瓊脂粉，按1.5%的比例加入生理鹽水或緩沖液，煮沸融化。2．將融化的瓊脂倒入平皿內(nèi)，使厚度2mm～3mm。自然冷卻。3．根據(jù)要求（孔徑即孔的直徑，孔距即兩孔圓心之間的距離，包括兩孔的半徑3－5mm）打成梅花形孔圖。第16頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第17頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4．挑出孔內(nèi)瓊脂，注意不要挑破孔緣。5．在火焰上緩緩加熱，使孔底邊緣的瓊脂少許熔化，以封底，以免加樣后液體從孔底滲漏。6．吸取樣品加入孔內(nèi)(約15ul)，，以加滿為度。7．加畢后，蓋上平皿蓋，將平皿翻過(guò)來(lái)，置濕盤中，37℃自由擴(kuò)散24h～48h。第18頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第19頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第20頁(yè)，共23頁(yè)，2023年，2月20日，星期三結(jié)果判定．用以檢測(cè)抗原或比較抗原差異時(shí)，將抗血清置中心孔，將待測(cè)抗原或需比較的抗原置于周圍相鄰孔。若出現(xiàn)沉淀帶完全融合，證明為同種抗原；若二者有部分相連，表明二者有共同抗原決定簇；若二條沉淀線相互交叉，說(shuō)明二者抗原完全不同。第21頁(yè)，共