果膠酶提取銀耳多糖的研究

PAGE目錄 1 1 1 11前言 22儀器、設備和試劑 22.1材料、與設備 22.2試劑及溶液的配制 23.方法及試驗步驟 23.1葡萄糖含量標準曲線的制作 23.2銀耳多糖的提取方法 33.3銀耳多糖含量的測定 44結果與分析 44.1銀耳多糖含量測定結果 44.2酶解法提取銀耳多糖結果分析 55小結與討論 6參考文獻 7PAGE61前言銀耳俗稱白木耳，是一種高等真菌，屬于有隔擔子菌亞綱銀耳科。銀耳作為藥食兩用的食用菌已久負盛名。傳統(tǒng)漢方醫(yī)學認為，它具有潤肺生津、滋陰養(yǎng)胃、益氣和血和補腦強心等功效?，F(xiàn)代生物醫(yī)學研究表明，銀耳中多糖物質(zhì)具有提高機體免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗?jié)?、抗血栓形成，還可增強機體耐缺氧能力，清除自由基，抑制腫瘤等作用。我國銀耳資源豐富，為開發(fā)應用銀耳多糖提供了有利條件。近年來，有關銀耳多糖的研究越來越多，但這些研究多為銀耳多糖的化學特性和藥理作用方面的研究，少有關于銀耳中提取銀耳多糖的研究。目前銀耳多糖的提取方法多為熱水浸提法或酸堿法提取，但熱水浸提法耗時過長，且收率較底，費時費力，因此不適合大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)，而酸堿法提取雖然提取時間較短，卻會破壞銀耳多糖立體旋光活性結構，降低甚至失去銀耳多糖的生物活性，使提取到的銀耳多糖藥用效果大大下降。因此，建立高效、經(jīng)濟的銀耳多糖提取方法是具有積極意義的。本試驗主要研究使用果膠酶酶解銀耳，熱水提取的技術來提取銀耳多糖的方法。且如今生物工程工藝發(fā)展迅速，各種生物制品價格也不斷下降，這為用酶解法提取銀耳多糖提供了方向和可行性。用酶解法提取銀耳多糖不僅能大大縮短單純用熱水法提取的時間，也不會像酸堿法那樣破壞銀耳多糖的生物活性。因此找出最適的酶解銀耳提取銀耳多糖的條件是具有實用和良好的現(xiàn)實意義的。2儀器、設備和試劑2.1材料、與設備101型電熱鼓風干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）YP202N型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）HH系列恒溫水浴鍋（蘇州金壇中大儀器廠）電子萬用爐（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）TDZ5-WS型臺式低俗離心機（長沙湘麓離心機儀器有限公司）722E型可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）2.2試劑及溶液的配制銀耳(市售)葡萄糖(分析純):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;果膠酶：按100ml:1g加入果膠酶苯酚（分析純）：精確量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;濃硫酸(發(fā)煙硫酸)3.方法及試驗步驟3.1葡萄糖含量標準曲線的制作取5支潔凈的試管，分別標記為1、2、3、4、5號管，依次加入標準糖溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和水1.0mL、0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL，再分別加入苯酚試劑1mL，濃硫酸5mL，混勻，室溫放置30min，冷卻后，在490nm波長處測定吸光值，繪制含糖量標準曲線。糖含量測定標準曲線制作管號12345標準糖溶液/mL00.20.40.60.8蒸餾水/mL1.00.80.60.40.2苯酚試劑/mL1.01.01.01.01.0濃硫酸/mL5.05.05.05.05.0糖含量標準曲線A值測定結果管號12345糖含量/mg00.20.40.60.8A值00.2280.4250.6630.980糖含量標準曲線得到糖含量標準曲線為y=1.1975x-0.0198（糖含量為橫坐標，A值為縱坐標）方程的R2為0.992，具有較高擬合度，可以作為糖含量的標準曲線。3.2銀耳多糖的提取方法取市售銀耳適量，洗凈，70℃烘干后，破碎成粉末狀，稱取粉末0.5g（2%），果膠酶0.25g（1%），同時加入蒸餾水25mL，迅速置于45℃水浴鍋中酶解，3個樣品為一組，第一組酶解30min，第二組酶解45min，第三組酶解60min。酶解后迅速升溫至98℃將酶滅活，然后每組樣品分別于98℃水浴中保溫浸提30min,45min,60min，浸提完成后置于冷水中冷卻至室溫，然后于4500rpm離心分離10min，最后取上清液待用。處理條件編號表提取時間（min）酶解時間(min)3045603012345456607893.3銀耳多糖含量的測定銀耳浸提液離心后，分別取上清液1ml,加水19ml,即稀釋20倍，取銀耳浸提稀釋液1mL于一潔凈試管中，再加入苯酚試液1.0mL，濃硫酸5mL，混勻，室溫放置30min，冷卻后，于490nm處測定吸光度。4結果與分析4.1銀耳多糖含量測定結果銀耳多糖含量A490測定結果與提取液實際糖含量結果管號A值稀釋液糖含量/mg提取液實際糖含量/mg10.3500.31154.420.4050.35177.430.4640.40202.040.3770.33165.750.4550.40198.260.5230.45226.670.3850.34169.080.4600.40200.390.5300.46229.6銀耳多糖含量結果變化圖 由上圖可知，固定酶解時間時，提高提取時間可顯著提高提取效果，改變酶解時間時，提取效果有提高，但不大，且從45min增加到60min增加不顯著。但總體提取效果與目前銀耳中提取銀耳多糖的主要工藝相比，提取效果得到了較大的提升，且比熱水直接提取法所用的時間明顯縮短，故用酶解法從銀耳中提取銀耳多糖是一種優(yōu)于傳統(tǒng)提取工藝的提取方法。4.2酶解法提取銀耳多糖結果分析由表可知，用酶解法提取銀耳多糖，不同的酶解時間和熱水浸提時間對銀耳多糖的提取率有明顯的差異。酶解時間從30到45min提取效果有增加，但從45到60min提取效果幾乎不在增加，因此可以判斷在45min左右時銀耳已酶解充分，為節(jié)約時間，增加銀耳多糖總提取效率，將酶解時間定為45min比較合適。與酶解時間相比，增加提取時間對提取效果的增加大于酶解時間的影響，且隨提取時間增加顯著提升，但在提取60min時的提取量已接近銀耳中銀耳多糖的理論含量，因此可以判斷再增加提取時間提取量的增加也不顯著，且會大大增加總提取工藝時間，影響提取工藝效率，對工業(yè)化生產(chǎn)銀耳多糖不利，而且長時間高溫提取，也會對銀耳多糖活性產(chǎn)生影響，因此，綜合考慮，將提取時間定為60min比較合適。綜上所訴，酶解45min，熱水浸提60min的銀耳多糖提取工藝不僅有較理想的提取率，還可以盡可能的縮短提取時間，減少人力和時間的浪費，有利于大規(guī)模生產(chǎn)銀耳多糖工業(yè)的發(fā)展。酶解時間和熱水浸提時間對多糖提取率的影響管號酶解時間/min熱水浸提時間/min多糖提取率/%1303030.92304535.53306040.44453033.15454539.66456045.37603033.88604540.19606045.95小結與討論本試驗采用果膠酶酶解銀耳的方法提取銀耳多糖。試驗討論了不同酶解時間與不同提取時間對提取效果的影響，最終確定最佳提取工藝為：在45℃下，用1%果膠酶酶解，水與銀耳比例為100ml:1g,酶解時間為45min，然后于98℃熱水浴中浸提60min。用此法提取銀耳多糖，提取率可達40%，遠遠高于傳統(tǒng)的銀耳多糖提取工藝。相比傳統(tǒng)工藝，果膠酶提取銀耳多糖不僅有較高的提取率，還可以明顯縮短提取的時間，更有利于銀耳多糖提取大規(guī)模工業(yè)化的發(fā)展。隨著社會的發(fā)展，銀耳多糖的生物功效越來越受到人們的重視，其需求也在日益增加，故酶解法提取銀耳多糖的工藝有著社會和經(jīng)濟的雙重效益。銀耳多糖的生物活性在長時間高溫環(huán)境和酸堿性條件下容易受到破壞，酶解法提取環(huán)境溫和，且提取時間較短，能較好的保留銀耳多糖的生物活性。雖然我國銀耳產(chǎn)量高，但銀耳仍然是有限的，酶解法能很好的保留銀耳多糖的生物活性，且提取效率很高，故該工藝條件對銀耳資源的充分利用有明顯的優(yōu)勢。參考文獻[1]黃文濤，胡學智.酶應用手冊[M].上海.上海科學技術出版社，1989[2]林宇野，楊虹.酶法提取銀耳多糖的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，1999[3]何偉珍，吳麗仙.銀耳多糖的提取分離與純化[J].海峽藥學，2008[4]黃秀錦.銀耳多糖的提取、分離、純化及其功能性質(zhì)研究[J].食品科學，2008[5]魏國志，李國光，金梅紅.銀耳多糖的研究進展[J].香料香精化妝品，2