毒性酶類試驗(yàn)

毒性酶類驗(yàn)（一）血試驗(yàn)1、原理某些細(xì)菌代謝過程中能產(chǎn)生溶血素可使人或動物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解不同的細(xì)菌有不同的溶血反應(yīng)，借此可鑒別細(xì)菌。2試驗(yàn)方法

平板法

試管法（1）平板法將培養(yǎng)物接種于血平培養(yǎng)基上，36±1℃培養(yǎng)24～，觀察結(jié)果。溶血試驗(yàn)溶血類型及象（）α（甲型溶:菌落周圍現(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)。（2）β（乙）溶血:菌周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)。（）γ-型溶血菌周圍無溶血環(huán)。（2）試管法將待檢菌培養(yǎng)液與等的2%羊血球混合，在36±1℃

培養(yǎng)16察果溶血養(yǎng)液可出現(xiàn)透狀。3結(jié)果觀察與記有溶血現(xiàn)象，為陽性，記+；無溶血現(xiàn)象，為陰性，記-(二鏈激酶試驗(yàn)1原理：A群球菌群能產(chǎn)生激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖蛋白酶，而后溶解纖維蛋白，使血凝塊溶解為性反應(yīng)。此試驗(yàn)用于測定鏈球的致病性。陽性反應(yīng)具有致病性。2試驗(yàn)方法：吸取草酸鉀血漿mL(0.01g草酸加5mL血漿混勻經(jīng)離心沉淀吸取清液)加mL生鹽水，混勻后，再加入待檢下培18-24h肉培養(yǎng)物mL0.25％氯化鈣mL勻37℃水浴中，2min觀察次。待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時(shí)間。如2內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置h后觀察。同用肉浸液肉湯做陰性

對照，用已知的鏈激陽性的菌株做陽性對照。3結(jié)果觀察與記；如凝塊全部溶化陽+凝塊h仍不溶化為陰性-（三）卵脂酶試驗(yàn)1原理：些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在離子存在時(shí)，能迅速分解卵磷脂，成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃變混濁，以此鑒別細(xì)菌。2試驗(yàn)方法：（1）卵黃平板法A法：將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或種于卵黃瓊脂平板上，361℃養(yǎng)～6h，觀察結(jié)果。B法：先用卵黃磷脂酶抗血將平板涂一半，置于36℃待干后，將待檢菌接種于未涂血清的一半卵黃瓊脂平板上，再轉(zhuǎn)劃已涂過抗血清的一半361℃氧培養(yǎng)觀察結(jié)

果。在未涂抗血清的一半板上，菌落周圍形成較大的不透明乳白色混濁區(qū)，在涂抗清的一半平板上，菌落周圍無不透明混濁區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，陰性。乳糖卵黃脂平板借以確定菌可否產(chǎn)生磷脂酶。卵磷脂酶抗原性，其性可被相應(yīng)抗清所抑制，（2）卵黃鹽水法：將庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物經(jīng)除菌過濾收集濾液在支滅菌試管內(nèi)，每管加入1%卵黃鹽水0.4mL,在管中加入濾液，一管加入生理鹽水0.2mL作照。在36℃水浴中，經(jīng)2h、4h、24h觀結(jié)果。管底發(fā)生混濁沉淀，對照管無沉淀者，為陽。3結(jié)果觀察與記：菌落周圍形成較大的不透明區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。管底發(fā)生混濁沉淀，對照管無沉淀者，為陽。

兩管無沉淀者，為陰。（四）漿凝固酶試驗(yàn)1原理：病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成維蛋白，附著在細(xì)菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固象為陽性。2試驗(yàn)方法（1）玻片法：清潔干燥載玻片，一滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔（）血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，min內(nèi)血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁則為陽性兩者呈均勻混濁無凝固為陰性。（2）試管法：取滅菌小試管3支各加入血漿①－無菌水(1:1)0.5ml，1支加入檢菌株的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液（或濃菌懸液0.5ml其余2支作對照管支加入金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌液0.5ml作陽性對照;另支入營養(yǎng)肉湯或氯化鈉溶作空白對照3同時(shí)放37℃

溫箱或水浴中培養(yǎng)，0.5觀