促黃體生成素膠體金法

本文格式為Word版，下載可任意編輯——促黃體生成素膠體金法附件1促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原那么本指導(dǎo)原那么的編寫目的是指導(dǎo)和模范促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)過(guò)程中審查人員對(duì)注冊(cè)資料的技術(shù)審評(píng)，同時(shí)也可指導(dǎo)申請(qǐng)人的產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)。

本指導(dǎo)原那么是對(duì)促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的概括特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需概括闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的概括特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容舉行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原那么是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠得志法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)供給細(xì)致的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原那么。

本指導(dǎo)原那么是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)展，本指導(dǎo)原那么相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)舉行調(diào)整。

一、適用范圍本指導(dǎo)原那么適用于采用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)原理對(duì)人體尿液中促黃體生成素舉行定性或半定量體外檢測(cè)的產(chǎn)品。

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理手段》（國(guó)家食品藥品監(jiān)視管理總局令第5號(hào)）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目次的通知》（食藥監(jiān)械管〔2022〕242號(hào)），促黃體生成素檢測(cè)試劑（膠體金免疫層析法）屬于二類醫(yī)療器械，分類代碼為6840。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料促黃體生成素（LuteinizingHormone）是促性腺激素的一種糖蛋白激素，簡(jiǎn)稱促黃體生成素，亦稱促間質(zhì)細(xì)胞激素（ICSH）。是由腦垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種大分子糖蛋白，由α和β兩個(gè)亞基非共軛結(jié)合形成，其中β亞基具有抉擇其分子特異性的構(gòu)型特征，可以識(shí)別適當(dāng)?shù)陌薪M織，并與特定的受體結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮其生理功能，主要作用是刺激卵巢內(nèi)成熟卵子的釋放。正常女性體內(nèi)保持有微量的促黃體生成素，在月經(jīng)中期促黃體生成素激素的分泌量快速增加，形成一個(gè)“促黃體生成素峰”，并在此后24—60小時(shí)內(nèi)刺激卵巢內(nèi)成熟卵的釋放。因此，“促黃體生成素峰”前后1—3天內(nèi)婦女最易受孕。

1.預(yù)期用途：通過(guò)定性或半定量檢測(cè)女性尿液中促黃體生成素的水平，以預(yù)料排卵時(shí)間，用于指導(dǎo)育齡女性選擇最正確受孕時(shí)機(jī)或指導(dǎo)安好期避孕。

2.產(chǎn)品描述2.1產(chǎn)品原理：本試劑運(yùn)用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)定性或半定量檢測(cè)人體尿液中的促黃體生成素。檢測(cè)時(shí)，當(dāng)待測(cè)樣本中的促黃體生成素濃度等于或高于臨界值時(shí)，將與膠體金標(biāo)記的抗β-促黃體生成素單克隆抗體回響形成復(fù)合物，在層析作用下回響復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜向前移動(dòng)，被硝酸纖維素膜上檢測(cè)區(qū)（T）預(yù)先包被的抗α-促黃體生成素單克隆抗體捕獲，最終在檢測(cè)區(qū)（T）有紅色條帶展現(xiàn)即為陽(yáng)性，提示“促黃體生成素峰”展現(xiàn)。當(dāng)待測(cè)樣本中促黃體生成素濃度低于臨界值時(shí)，在檢測(cè)區(qū)（T）形成一條顏色淺于質(zhì)控區(qū)（C）的紅色回響線或無(wú)紅色回響線展現(xiàn)，此時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示非“促黃體生成素峰”。無(wú)論待測(cè)樣本中是否含有促黃體生成素，質(zhì)控區(qū)（C）都會(huì)形成一條肉眼可見(jiàn)的紅色回響線，這是判斷樣本量是否足夠、層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為本試劑的內(nèi)控。

膠體金法半定量試劑的顯示指示系統(tǒng)那么是在此根基上，對(duì)結(jié)果判斷的方法有所不同。半定量試劑主要是通過(guò)樣本檢測(cè)線的實(shí)際色度與試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)線色度卡舉行色度比較，記錄相應(yīng)的色度數(shù)值，繪制促黃體生成素曲線，從而得到使用者自己的“促黃體生成素峰”值。

2.2主要原材料及來(lái)源：應(yīng)明確產(chǎn)品主要原材料（如所用抗體，硝酸纖維素膜）的生產(chǎn)廠家和純度級(jí)別。

2.3工藝流程：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)細(xì)致明確產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝流程，明確工藝流程中的關(guān)鍵工藝、特殊過(guò)程，明確需在清白環(huán)境中生產(chǎn)的工藝以及對(duì)應(yīng)的環(huán)境級(jí)別。

3.有關(guān)生物安好性的說(shuō)明：人源性材料須對(duì)有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV、TP等）病原體檢測(cè)予以說(shuō)明，并供給相關(guān)的證明文件。其他動(dòng)物源及微生物來(lái)源的材料，應(yīng)當(dāng)供給相應(yīng)的說(shuō)明文件，證明其在產(chǎn)品運(yùn)輸、使用過(guò)程中對(duì)使用者和環(huán)境是安好的，并對(duì)上述原材料所采用的滅活等試驗(yàn)方法予以說(shuō)明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)：總結(jié)主要原材料研究、主要生產(chǎn)工藝及回響體系的研究、分析性能的評(píng)估及產(chǎn)品穩(wěn)定性研究等驗(yàn)證的處境。

5.同類產(chǎn)品上市處境介紹。

包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的處境。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用處境，申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。對(duì)于新研制的體外診斷試劑產(chǎn)品，需要供給被測(cè)物與預(yù)期適用的臨床適應(yīng)證之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料。

（二）主要原材料的研究資料（如需供給）1.試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等細(xì)致試驗(yàn)資料。如抗體為申請(qǐng)人自制，其工藝務(wù)必相對(duì)穩(wěn)定，應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來(lái)源，申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；

若添置，其供給商要求相對(duì)固定，不能肆意變更供給商，假設(shè)供給商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求舉行變更申請(qǐng)；

應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來(lái)源，外購(gòu)方名稱，提交外購(gòu)方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

2.其他主要原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如硝酸纖維素膜/醋酸纖維膜、膠體金、回響緩沖液、在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白養(yǎng)護(hù)劑用途的一類生物原料（如：牛血清白蛋白等），申請(qǐng)人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購(gòu)，應(yīng)詳述每一原輔料的外購(gòu)方名稱并提交外購(gòu)方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書。應(yīng)參照《金標(biāo)類檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原那么》（食藥監(jiān)辦械函〔2022〕3號(hào)）原材料質(zhì)量操縱的內(nèi)容舉行相關(guān)研究。

3.企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及回響體系的研究資料（如需供給）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝確實(shí)定依據(jù)。企業(yè)應(yīng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

2.產(chǎn)品根本回響原理介紹。

3.抗體包被工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時(shí)間等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最正確組合。

4.測(cè)驗(yàn)體系回響條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮回響時(shí)間、回響溫度、膜孔徑大?。ɑ蛞菩兴俣龋┑葪l件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述條件的最正確組合。

5.體系中回響時(shí)間確實(shí)定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品加樣端浸入樣本液時(shí)間、樣本加樣后查看時(shí)間對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過(guò)測(cè)驗(yàn)確定最正確的加樣時(shí)間、查看時(shí)間。

6.半定量產(chǎn)品可包括比色卡的相關(guān)生產(chǎn)內(nèi)容。

（四）分析性能評(píng)估資料企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑舉行的全體性能驗(yàn)證的研究資料，包括概括研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等細(xì)致資料。對(duì)于促黃體生成素檢測(cè)試劑，建議著重對(duì)以下性能舉行分析研究。

1.定性產(chǎn)品1.1臨界值確實(shí)定用空白對(duì)照液和含有10mIU/mL、25mIU/mL、50mIU/mL促黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)品的樣品液分別測(cè)定同批號(hào)試紙，每個(gè)濃度測(cè)定3條，結(jié)果顯示臨界值應(yīng)為25mIU/mL。

1.2分析特異性1.2.1交錯(cuò)回響用于促黃體生成素定性檢測(cè)試劑交錯(cuò)回響驗(yàn)證的激素種類及濃度主要考慮為：200mIU/mL的促卵泡激素（FSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液和250μIU/mL的促甲狀腺素（TSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液。

1.2.2干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)主要包括：乳糜尿、血尿、膽紅素陽(yáng)性、渾濁的尿液以及相關(guān)藥物。

1.3陽(yáng)性/陰性參考品企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品應(yīng)可溯源到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4.鉤狀（HOOK）效應(yīng)目前，促黃體生成素檢測(cè)試劑大多采用夾心法的原理檢測(cè)樣本，考慮到方法學(xué)的缺陷，有必要對(duì)鉤狀（HOOK）效應(yīng)舉行考慮，如圖1所示。

圖1免疫復(fù)合物（IC）沉淀量與抗原抗體量的關(guān)系建議采用高濃度的促黃體生成素抗原參考品舉行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開(kāi)頭檢測(cè)，每個(gè)梯度的抗原稀釋液重復(fù)3—5份，將顯色深度隨濃度升高反而變淺時(shí)的濃度作為展現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促黃體生成素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說(shuō)明書上明示展現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促黃體生成素抗原的最低濃度。

1.5重復(fù)性建議選取包括臨界值在內(nèi)的多個(gè)濃度樣品舉行屢屢檢測(cè)，不同濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)一致，顯色度應(yīng)均一。在分析試劑重復(fù)性時(shí)，不應(yīng)使用強(qiáng)陽(yáng)性樣品或明顯陰性的樣品，否那么無(wú)法客觀地評(píng)價(jià)其檢測(cè)效果。

1.6批間差建議選取臨界值鄰近的樣品，用三個(gè)批號(hào)的促黃體生成素檢測(cè)試劑，每個(gè)批號(hào)抽取一致數(shù)量，按照說(shuō)明書步驟操作，對(duì)重復(fù)性舉行檢測(cè)，三個(gè)批號(hào)的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)一致，顯色度均一。

1.7人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)假設(shè)用到的抗體來(lái)源為鼠抗，那么應(yīng)考慮人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)。鼠源性單抗對(duì)人體具有異種蛋白的免疫原性，在人體內(nèi)半衰期較短，屢屢使用可引起人抗鼠抗體（HAMA）的產(chǎn)生，從而使其應(yīng)用受到限制。

注：可參考文件EP7-A2《臨床生化干擾測(cè)試》。

1.8校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)供給細(xì)致的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等。應(yīng)參照GB/T21415—2022《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測(cè)量校準(zhǔn)品和操縱物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，供給企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算記錄，供給質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

1.9其他需要留神的問(wèn)題如注冊(cè)申請(qǐng)中包括不同適用機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上舉行上述工程評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。

如注冊(cè)申請(qǐng)中包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)不同包裝規(guī)格之間的差異舉行分析或驗(yàn)證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品舉行的上述工程評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的細(xì)致說(shuō)明，概括說(shuō)明不同包裝規(guī)格之間的區(qū)別及可能產(chǎn)生的影響。

2.半定量產(chǎn)品建議申報(bào)產(chǎn)品至少具備以下性能指標(biāo)，概括指標(biāo)要求及測(cè)驗(yàn)方法那么由申報(bào)單位根據(jù)自己產(chǎn)品的特性制定及驗(yàn)證。

2.1切實(shí)度。

2.2最低檢出量。

2.3重復(fù)性。

2.4批間差。

2.5特異性（應(yīng)包括尿液的本底影響）。

2.6校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)供給細(xì)致的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等。半定量產(chǎn)品所用到的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，應(yīng)供給相應(yīng)的溯源性資料。

2.7其他需要留神的問(wèn)題（五）陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間確定資料應(yīng)當(dāng)細(xì)致說(shuō)明陽(yáng)性判斷值確定的方法或依據(jù)，說(shuō)明確定陽(yáng)性判斷值所采用的樣本來(lái)源，并供給陽(yáng)性判斷值確定的細(xì)致試驗(yàn)資料及總結(jié)。半定量產(chǎn)品那么應(yīng)根據(jù)醫(yī)學(xué)上促黃體生成素的不同分泌期分別舉行參考區(qū)間的研究。

應(yīng)明確研究采用的樣本來(lái)源、細(xì)致的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等。參考值范圍可參考公認(rèn)的權(quán)威資料/臨床比對(duì)試劑，但應(yīng)當(dāng)舉行驗(yàn)證。驗(yàn)證樣本數(shù)量應(yīng)不低于120例。不同樣本類型（隨機(jī)尿、晨尿等）應(yīng)分別舉行研究。

研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩片面內(nèi)容：考核試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及開(kāi)封穩(wěn)定性（如涉及）等研究，樣本穩(wěn)定性那么應(yīng)考慮尿液標(biāo)本的受影響因素，如收集尿液的時(shí)間、方法、類型（隨機(jī)尿、晨尿等）、不同促黃體生成素的分泌期、飲水等諸多影響因素。申請(qǐng)人可