促黃體生成素膠體金法

本文格式為Word版，下載可任意編輯——促黃體生成素膠體金法附件1促黃體生成素檢測試劑（膠體金免疫層析法）注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原那么本指導(dǎo)原那么的編寫目的是指導(dǎo)和模范促黃體生成素檢測試劑（膠體金免疫層析法）產(chǎn)品注冊申報過程中審查人員對注冊資料的技術(shù)審評，同時也可指導(dǎo)申請人的產(chǎn)品注冊申報。

本指導(dǎo)原那么是對促黃體生成素檢測試劑（膠體金免疫層析法）的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的概括特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需概括闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的概括特性對注冊申報資料的內(nèi)容舉行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原那么是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠得志法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)供給細(xì)致的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原那么。

本指導(dǎo)原那么是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)展，本指導(dǎo)原那么相關(guān)內(nèi)容也將適時舉行調(diào)整。

一、適用范圍本指導(dǎo)原那么適用于采用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)原理對人體尿液中促黃體生成素舉行定性或半定量體外檢測的產(chǎn)品。

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理手段》（國家食品藥品監(jiān)視管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目次的通知》（食藥監(jiān)械管〔2022〕242號），促黃體生成素檢測試劑（膠體金免疫層析法）屬于二類醫(yī)療器械，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求（一）綜述資料促黃體生成素（LuteinizingHormone）是促性腺激素的一種糖蛋白激素，簡稱促黃體生成素，亦稱促間質(zhì)細(xì)胞激素（ICSH）。是由腦垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種大分子糖蛋白，由α和β兩個亞基非共軛結(jié)合形成，其中β亞基具有抉擇其分子特異性的構(gòu)型特征，可以識別適當(dāng)?shù)陌薪M織，并與特定的受體結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮其生理功能，主要作用是刺激卵巢內(nèi)成熟卵子的釋放。正常女性體內(nèi)保持有微量的促黃體生成素，在月經(jīng)中期促黃體生成素激素的分泌量快速增加，形成一個“促黃體生成素峰”，并在此后24—60小時內(nèi)刺激卵巢內(nèi)成熟卵的釋放。因此，“促黃體生成素峰”前后1—3天內(nèi)婦女最易受孕。

1.預(yù)期用途：通過定性或半定量檢測女性尿液中促黃體生成素的水平，以預(yù)料排卵時間，用于指導(dǎo)育齡女性選擇最正確受孕時機(jī)或指導(dǎo)安好期避孕。

2.產(chǎn)品描述2.1產(chǎn)品原理：本試劑運用雙抗體夾心膠體金免疫層析技術(shù)定性或半定量檢測人體尿液中的促黃體生成素。檢測時，當(dāng)待測樣本中的促黃體生成素濃度等于或高于臨界值時，將與膠體金標(biāo)記的抗β-促黃體生成素單克隆抗體回響形成復(fù)合物，在層析作用下回響復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜向前移動，被硝酸纖維素膜上檢測區(qū)（T）預(yù)先包被的抗α-促黃體生成素單克隆抗體捕獲，最終在檢測區(qū)（T）有紅色條帶展現(xiàn)即為陽性，提示“促黃體生成素峰”展現(xiàn)。當(dāng)待測樣本中促黃體生成素濃度低于臨界值時，在檢測區(qū)（T）形成一條顏色淺于質(zhì)控區(qū)（C）的紅色回響線或無紅色回響線展現(xiàn)，此時檢測結(jié)果為陰性，表示非“促黃體生成素峰”。無論待測樣本中是否含有促黃體生成素，質(zhì)控區(qū)（C）都會形成一條肉眼可見的紅色回響線，這是判斷樣本量是否足夠、層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為本試劑的內(nèi)控。

膠體金法半定量試劑的顯示指示系統(tǒng)那么是在此根基上，對結(jié)果判斷的方法有所不同。半定量試劑主要是通過樣本檢測線的實際色度與試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)檢測線色度卡舉行色度比較，記錄相應(yīng)的色度數(shù)值，繪制促黃體生成素曲線，從而得到使用者自己的“促黃體生成素峰”值。

2.2主要原材料及來源：應(yīng)明確產(chǎn)品主要原材料（如所用抗體，硝酸纖維素膜）的生產(chǎn)廠家和純度級別。

2.3工藝流程：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)細(xì)致明確產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝流程，明確工藝流程中的關(guān)鍵工藝、特殊過程，明確需在清白環(huán)境中生產(chǎn)的工藝以及對應(yīng)的環(huán)境級別。

3.有關(guān)生物安好性的說明：人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV、TP等）病原體檢測予以說明，并供給相關(guān)的證明文件。其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)供給相應(yīng)的說明文件，證明其在產(chǎn)品運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安好的，并對上述原材料所采用的滅活等試驗方法予以說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價：總結(jié)主要原材料研究、主要生產(chǎn)工藝及回響體系的研究、分析性能的評估及產(chǎn)品穩(wěn)定性研究等驗證的處境。

5.同類產(chǎn)品上市處境介紹。

包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的處境。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用處境，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。對于新研制的體外診斷試劑產(chǎn)品，需要供給被測物與預(yù)期適用的臨床適應(yīng)證之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料。

（二）主要原材料的研究資料（如需供給）1.試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等細(xì)致試驗資料。如抗體為申請人自制，其工藝務(wù)必相對穩(wěn)定，應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；

若添置，其供給商要求相對固定，不能肆意變更供給商，假設(shè)供給商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求舉行變更申請；

應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

2.其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如硝酸纖維素膜/醋酸纖維膜、膠體金、回響緩沖液、在生產(chǎn)過程中作為蛋白養(yǎng)護(hù)劑用途的一類生物原料（如：牛血清白蛋白等），申請人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應(yīng)詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗證書。應(yīng)參照《金標(biāo)類檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原那么》（食藥監(jiān)辦械函〔2022〕3號）原材料質(zhì)量操縱的內(nèi)容舉行相關(guān)研究。

3.企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及回響體系的研究資料（如需供給）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝確實定依據(jù)。企業(yè)應(yīng)采用經(jīng)過驗證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

2.產(chǎn)品根本回響原理介紹。

3.抗體包被工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時間等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最正確組合。

4.測驗體系回響條件確定：申請人應(yīng)考慮回響時間、回響溫度、膜孔徑大?。ɑ蛞菩兴俣龋┑葪l件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最正確組合。

5.體系中回響時間確實定：申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品加樣端浸入樣本液時間、樣本加樣后查看時間對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過測驗確定最正確的加樣時間、查看時間。

6.半定量產(chǎn)品可包括比色卡的相關(guān)生產(chǎn)內(nèi)容。

（四）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對試劑舉行的全體性能驗證的研究資料，包括概括研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等細(xì)致資料。對于促黃體生成素檢測試劑，建議著重對以下性能舉行分析研究。

1.定性產(chǎn)品1.1臨界值確實定用空白對照液和含有10mIU/mL、25mIU/mL、50mIU/mL促黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)品的樣品液分別測定同批號試紙，每個濃度測定3條，結(jié)果顯示臨界值應(yīng)為25mIU/mL。

1.2分析特異性1.2.1交錯回響用于促黃體生成素定性檢測試劑交錯回響驗證的激素種類及濃度主要考慮為：200mIU/mL的促卵泡激素（FSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液和250μIU/mL的促甲狀腺素（TSH）標(biāo)準(zhǔn)品樣品液。

1.2.2干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)主要包括：乳糜尿、血尿、膽紅素陽性、渾濁的尿液以及相關(guān)藥物。

1.3陽性/陰性參考品企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品應(yīng)可溯源到國家標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4.鉤狀（HOOK）效應(yīng)目前，促黃體生成素檢測試劑大多采用夾心法的原理檢測樣本，考慮到方法學(xué)的缺陷，有必要對鉤狀（HOOK）效應(yīng)舉行考慮，如圖1所示。

圖1免疫復(fù)合物（IC）沉淀量與抗原抗體量的關(guān)系建議采用高濃度的促黃體生成素抗原參考品舉行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開頭檢測，每個梯度的抗原稀釋液重復(fù)3—5份，將顯色深度隨濃度升高反而變淺時的濃度作為展現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時促黃體生成素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說明書上明示展現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時促黃體生成素抗原的最低濃度。

1.5重復(fù)性建議選取包括臨界值在內(nèi)的多個濃度樣品舉行屢屢檢測，不同濃度樣本的檢測結(jié)果應(yīng)一致，顯色度應(yīng)均一。在分析試劑重復(fù)性時，不應(yīng)使用強陽性樣品或明顯陰性的樣品，否那么無法客觀地評價其檢測效果。

1.6批間差建議選取臨界值鄰近的樣品，用三個批號的促黃體生成素檢測試劑，每個批號抽取一致數(shù)量，按照說明書步驟操作，對重復(fù)性舉行檢測，三個批號的檢測結(jié)果應(yīng)一致，顯色度均一。

1.7人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)假設(shè)用到的抗體來源為鼠抗，那么應(yīng)考慮人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)。鼠源性單抗對人體具有異種蛋白的免疫原性，在人體內(nèi)半衰期較短，屢屢使用可引起人抗鼠抗體（HAMA）的產(chǎn)生，從而使其應(yīng)用受到限制。

注：可參考文件EP7-A2《臨床生化干擾測試》。

1.8校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)供給細(xì)致的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等。應(yīng)參照GB/T21415—2022《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和操縱物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，供給企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算記錄，供給質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

1.9其他需要留神的問題如注冊申請中包括不同適用機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上舉行上述工程評估的試驗資料及總結(jié)。

如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異舉行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品舉行的上述工程評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的細(xì)致說明，概括說明不同包裝規(guī)格之間的區(qū)別及可能產(chǎn)生的影響。

2.半定量產(chǎn)品建議申報產(chǎn)品至少具備以下性能指標(biāo)，概括指標(biāo)要求及測驗方法那么由申報單位根據(jù)自己產(chǎn)品的特性制定及驗證。

2.1切實度。

2.2最低檢出量。

2.3重復(fù)性。

2.4批間差。

2.5特異性（應(yīng)包括尿液的本底影響）。

2.6校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如涉及）。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)供給細(xì)致的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等。半定量產(chǎn)品所用到的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，應(yīng)供給相應(yīng)的溯源性資料。

2.7其他需要留神的問題（五）陽性判斷值或參考區(qū)間確定資料應(yīng)當(dāng)細(xì)致說明陽性判斷值確定的方法或依據(jù)，說明確定陽性判斷值所采用的樣本來源，并供給陽性判斷值確定的細(xì)致試驗資料及總結(jié)。半定量產(chǎn)品那么應(yīng)根據(jù)醫(yī)學(xué)上促黃體生成素的不同分泌期分別舉行參考區(qū)間的研究。

應(yīng)明確研究采用的樣本來源、細(xì)致的試驗資料、統(tǒng)計方法等。參考值范圍可參考公認(rèn)的權(quán)威資料/臨床比對試劑，但應(yīng)當(dāng)舉行驗證。驗證樣本數(shù)量應(yīng)不低于120例。不同樣本類型（隨機(jī)尿、晨尿等）應(yīng)分別舉行研究。

研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩片面內(nèi)容：考核試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及開封穩(wěn)定性（如涉及）等研究，樣本穩(wěn)定性那么應(yīng)考慮尿液標(biāo)本的受影響因素，如收集尿液的時間、方法、類型（隨機(jī)尿、晨尿等）、不同促黃體生成素的分泌期、飲水等諸多影響因素。申請人可