DB23T 3096-2022水稻稻瘟病抗譜鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB16DB23黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)DBT22黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T3096-2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所。本文件主要起草人：張國民、馬軍韜、鄧凌韋、趙文生、宋顯東、彭友良、王春榮、司兆勝、胡亞軍、王永力、張齊鳳、高洪儒、張君、王南博、任洋。1DB23/T3096-2022水稻稻瘟病抗譜鑒定技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了水稻稻瘟病抗譜鑒定技術(shù)的環(huán)境條件、鑒定方法、評價標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)檔案。本文件適用于水稻品種的抗譜鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用性文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語與定義本文件沒有規(guī)定的術(shù)語與定義。4環(huán)境條件具有遮光和加光設(shè)備。5鑒定方法5.1水稻苗的種植與管理5.1.1水稻品種的選擇選擇主栽或高潛力水稻品種10份~15份用于試驗。同時，選擇稻瘟病發(fā)生較重地塊，種植普感品種麗江新團(tuán)黑谷或蒙古稻，用于采集、分離當(dāng)?shù)氐疚敛【辍?.1.2浸種催芽5.1.3播種cmcm3次重復(fù)，播種后將育秧盤置于溫室苗床上，其上覆蓋約1cm厚的干細(xì)土。5.1.4水稻苗管理2DB23/T3096-2022水稻苗全程不施用任何殺菌劑，其他按常規(guī)管理。5.2接種體制備將稻瘟病菌點接于番茄燕麥平板培養(yǎng)基上，26℃~28℃培養(yǎng)至菌落直徑接近培養(yǎng)基邊緣，加入無菌水洗脫菌絲和分生孢子，將其涂布于另一平板培養(yǎng)基上，超凈工作臺內(nèi)吹干后，26℃~28℃光照培養(yǎng)至表面產(chǎn)生一層氣生菌絲。用無菌水將氣生菌絲和分生孢子沖洗干凈，晾干后罩上2層紗布，26℃~28℃光照培養(yǎng)至大量分生孢子產(chǎn)生。用含0.025%Tween20的無菌水洗脫分生孢子，過濾后將其濃度調(diào)至3×105個孢子/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配，從配制到完成接種不得超過2h。5.3人工接種流程5.3.1離體葉片準(zhǔn)備在水稻苗中選取5葉期充分展開的心葉，剪成長約5cm、上下寬度基本一致的葉段，每個品種從不同植株選取3個葉段作為三次重復(fù)。用滅菌昆蟲針在葉片正面、垂直于葉脈方向輕輕劃出微創(chuàng)mmmmcm濕，表面無明水。將滅菌牙簽放入滅菌水浸泡10min~20min，取兩根滅菌牙簽放在浸濕的濾紙片表面，將已劃出微創(chuàng)點的葉段擺放其上。用0.025%Tween20水溶液對葉段均勻噴霧，培養(yǎng)皿蓋內(nèi)側(cè)同時噴霧。5.3.2人工接種用微量移液器吸取分生孢子懸浮液點接于葉段的微創(chuàng)點，每個微創(chuàng)點接分生孢子懸浮液24h~30h，然后在相同條件下轉(zhuǎn)至光照培養(yǎng)，直至發(fā)病。5.4病情調(diào)查5.4.1調(diào)查時間在接種后3d開始調(diào)查，連續(xù)調(diào)查5d，每天上午、下午各調(diào)查一次。5.4.2抗感反應(yīng)型調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)接種點部位無病斑或僅有很小的黑褐色壞死斑，不產(chǎn)生分生孢子，記為抗病反應(yīng)型；接種點部位病斑較大，呈梭形，中心有灰色的崩潰部，可以產(chǎn)生菌絲和分生孢子，崩潰部邊緣可能有褐色壞死，最外層為黃色的中毒部，形狀不規(guī)則，記為感病反應(yīng)型。5.4.3調(diào)查方法每個水稻品種接種后的9個接種點全部調(diào)查，將抗感反應(yīng)結(jié)果記入表A.1。6評價標(biāo)準(zhǔn)6.1接種有效性評價標(biāo)準(zhǔn)每次接種均以普感品種麗江新團(tuán)黑谷為對照，對照表現(xiàn)為典型的感病反應(yīng)型時，視為接種有效。6.2重復(fù)性接種判定標(biāo)準(zhǔn)3DB23/T3096-2022在第一次接種后，供試菌株表現(xiàn)為抗病反應(yīng)型或者不能準(zhǔn)確判定其反應(yīng)型，需要進(jìn)行第二次和第三次接種，只要其中一次表現(xiàn)為感病反應(yīng)型，則記為感病反應(yīng)型，否則記為抗病反應(yīng)型。6.3供試菌株數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)室內(nèi)鑒定水稻品種的抗瘟性，供試菌株必須為單孢菌株，且必須從適宜種植區(qū)內(nèi)種植的普感品種麗江新團(tuán)黑谷或蒙古稻上分離獲得。建議每個縣(市)菌株數(shù)量不少于300株，或者連續(xù)3年、每年不少于100株。6.4抗瘟性評價標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)各縣或縣級市水稻品種室內(nèi)抗譜的高低評價其在當(dāng)?shù)靥镩g抗瘟性的優(yōu)劣，評價標(biāo)準(zhǔn)見表A.2。7技術(shù)檔案建立水稻稻瘟病抗譜鑒定技術(shù)檔案，內(nèi)容包括環(huán)境條件、鑒定方法、評價標(biāo)準(zhǔn)及試驗數(shù)據(jù)等。4DB23/T3096-2022資料性附錄水稻稻瘟病抗譜調(diào)查A.1水稻稻瘟病抗譜調(diào)查見表A.1和A.2。表A.1供試菌株抗感反應(yīng)型調(diào)查記錄表供試菌株編號供試菌株名稱反應(yīng)型123456表A.2水稻品種田間抗瘟性評價標(biāo)準(zhǔn)田間抗瘟性評價抗譜評價標(biāo)準(zhǔn)抗病Resistant(R)抗譜≥70%中抗Moderatelyresistant(MR)＜70%中感ModeratelySusceptible(MS)＜50%感病Susceptible(S)抗譜＜30%5DB23/T3096-2022[1]NY/T3257水稻稻