動物源腸球菌的分離鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)及耐藥機(jī)制,微生物論文

動物源腸球菌的分離鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)及耐藥機(jī)制,微生物論文摘要：腸球菌是當(dāng)前主要的人畜共患條件致病菌，具有天然耐藥、獲得性耐藥及多重耐藥等特點(diǎn)。隨著抗生素在畜牧養(yǎng)殖業(yè)上的大量應(yīng)用，動物源腸球菌的耐藥性日趨嚴(yán)重。本文從腸球菌的分離鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)、耐藥機(jī)制幾方面對當(dāng)下的研究進(jìn)展進(jìn)行綜合闡述。本文關(guān)鍵詞語：腸球菌;鑒定;藥敏實(shí)驗(yàn);耐藥機(jī)制;綜述;腸球菌是一類廣泛分布于環(huán)境、人和動物消化道內(nèi)的革蘭氏陽性球菌，在分類學(xué)上屬于腸球菌屬，菌體為圓形或橢圓形，呈單個(gè)或成對或短鏈狀狀排列，無芽孢，無鞭毛，為需氧或兼性厭氧菌[1]。腸球菌是一類人畜共患的條件致病菌，能夠引起人體尿路感染、皮膚軟組織感染，腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。同樣有不少報(bào)道指出，腸球菌可感染雞、鴨、豬、牛、羊等主要食品動物，導(dǎo)致疾病發(fā)生[2,3,4,5]。既往，腸球菌作為腸道的正常菌群不被以為是重要的致病菌，但隨著人源腸球菌感染的發(fā)生率和死亡率明顯升高，美國醫(yī)院感染監(jiān)測系統(tǒng)〔NISS〕已把腸球菌列為醫(yī)院感染的第二大病原菌[6]。據(jù)我們國家2018年全國細(xì)菌耐藥性監(jiān)測報(bào)告，腸球菌是除葡萄球菌外，臨床分離率第二的革蘭氏陽性菌[7]，與美國報(bào)告一致。潘航[8]等根據(jù)美國腸道細(xì)菌耐抗生素監(jiān)測系統(tǒng)〔NARMS〕數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析指出，在畜禽肉樣品中腸球菌檢出率最高〔42%〕。隨著抗生素的發(fā)明使用，十分是養(yǎng)殖環(huán)節(jié)抗生素的大量使用，腸球菌的耐藥性不斷加強(qiáng)，抗生素選擇范圍逐步收窄，有研究指出，腸球菌能夠在人與動物之間水平傳播[9]，這使得腸球菌的耐藥性研究不僅僅在單一領(lǐng)域，而是覆蓋公共衛(wèi)生和農(nóng)業(yè)畜牧養(yǎng)殖所要共同應(yīng)對的問題。1、腸球菌的檢測方式方法的研究1.1、傳統(tǒng)細(xì)菌分離鑒定方式方法研究綜合當(dāng)前現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)，腸球菌的選擇性培養(yǎng)基包括KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基、腸球菌瓊脂培養(yǎng)基和MRS瓊脂：腸球菌屬細(xì)菌在KF瓊脂上構(gòu)成暗紅至粉紅色菌落，在腸球菌培養(yǎng)基上構(gòu)成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落，在MRS培養(yǎng)基上構(gòu)成白色或乳白色菌落，菌落較小，外表光滑，邊緣整潔[10,11]。在現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)中選擇性培養(yǎng)基僅僅僅是一種初篩方式方法，需結(jié)合顯微鏡下的菌體形態(tài)和生化反響鑒定結(jié)果進(jìn)行綜合斷定。除了傳統(tǒng)的培養(yǎng)基外，隨著科技的進(jìn)一步發(fā)展和實(shí)際應(yīng)用，出現(xiàn)愈加直觀的選擇培養(yǎng)基，即顯色培養(yǎng)基。張銀旺等[12]采用血平板加傳統(tǒng)生化鑒定和VTECK全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)與CPS4顯色培養(yǎng)基進(jìn)行比擬，顯色培養(yǎng)基符合率在97%以上，且顯色培養(yǎng)基直接鑒定率在85.3%，相比傳統(tǒng)方式方法更簡便、快速、高效。隨著耐萬古霉素腸球菌的出現(xiàn)，對耐萬古霉素腸球菌的特異性檢測需求日益增加，耐萬古霉素腸球菌顯色培養(yǎng)基隨著出現(xiàn)，谷存國[13]等對血平板和耐萬古霉素顯色培養(yǎng)基〔VREID〕挑選腸球菌進(jìn)行比擬，兩者結(jié)果基本一致，顯色培養(yǎng)基更簡便。1.2、分子生物學(xué)方式方法研究分子生物學(xué)方式方法主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒错憽睵olymeraseChainReaction,PCR〕、多位點(diǎn)基因測序分析〔MLST〕、脈沖場凝膠電泳〔PFGE)Southern雜交技術(shù)、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜〔MALDI-TOF-MS〕等[14]。1.2.1、聚合酶鏈?zhǔn)椒错懠捌溲苌绞椒椒?985年美國MILLER等發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒错懀且环N在體外模擬自然DNA復(fù)制的核算擴(kuò)增技術(shù)。該方式方法能夠檢測特異性基因片段，花費(fèi)的時(shí)間少，簡便高效，自20世紀(jì)80年代出現(xiàn)以來已被廣泛用于檢測，當(dāng)前已成為腸球菌鑒定中常規(guī)的檢測方式方法。在普通PCR方式方法上又衍生出熒光定量PCR方式方法(Real-timeFlurogenicQuantitativePolymeraseChainReaction,FQ-PCR〕和多重PCR診斷方式方法。1996年美國AppliedBiosystems公司推出在普通PCR技術(shù)上通過添加熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，標(biāo)記跟蹤PCR產(chǎn)物，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)定量功能。吳程璐[15]等建立了以引物EF1902為基礎(chǔ)的熒光定量體系，并對腸球菌人工污染的牛奶進(jìn)行檢測，當(dāng)初始接菌量在2.63cfu/ml時(shí)，只需增菌6h即可用該方式方法檢測出腸球菌，52份樣品中檢測準(zhǔn)確率為94.23%。金東[16]等根據(jù)屎腸球菌的保守基因d-丙氨酸聚連接酶基因〔ddl基因〕設(shè)計(jì)引物和探針，建立了屎腸球菌的TaqMan熒光定量PCR方式方法。應(yīng)用該方式方法檢測菌濃度在1.6100～1.6108cfu/ml梯度間的屎腸球菌模擬樣本，其檢測靈敏度在1.6102cfu/ml，檢測靈敏度更高層次。多重PCR技術(shù)能夠使用兩對或多對不同的引物對同一DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，以到達(dá)同時(shí)檢測的目的，其敏感性和特異性可到達(dá)95.5%和98.1%[17,18]。王亞賓[19]等以腸球菌的16SrRNA基因和SodA基因分別設(shè)計(jì)屬和種的特異性引物建立多重PCR方式方法，同時(shí)檢測屎腸球菌和糞腸球菌兩種菌株，經(jīng)過與16SrRNA測序方式方法比擬，對豬的臨床菌株、糞便菌株和鮮豬肉菌株的鑒定符合率為100%。林東昉[20]等建立了基于多重PCR技術(shù)的腸球菌萬古霉素高水平耐藥基因vanA、vanB、vanD和vanM快速檢測分型方式方法。檢測臨床分離的50株VRE，與常規(guī)PCR比擬，敏感度和特異性度均為100.0%。1.2.2、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)〔Loop-mediatedIsothermalAmplification,LAMP〕由日本科學(xué)家Notomi[21]等在2000年發(fā)表于NucleicAcidsResearch雜志上。該技術(shù)一經(jīng)面世便因其對設(shè)備要求低、反響迅速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，得到世衛(wèi)組織WHO和各國學(xué)者的關(guān)注，并在這里基礎(chǔ)上不斷研究優(yōu)化應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和農(nóng)學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域。姜侃[22]等針對腸球菌16SrRNA中高度保守的序列分析設(shè)計(jì)特異性引物建立乳品中腸球菌的LAMP快遞檢測方式方法。結(jié)果表示清楚，該方式方法可在14h內(nèi)完成檢測，靈敏度到達(dá)10fg/L，比常規(guī)PCR高3個(gè)數(shù)量級。對164批次嬰幼兒奶粉進(jìn)行檢測，檢出率為22.6%，與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測方式方法結(jié)果一致。1.2.3、多位點(diǎn)基因序列分析〔MLST)多位點(diǎn)序列分析〔MultilocusSequenceTyping,MLST〕是采用多個(gè)保守基因位點(diǎn)對菌種進(jìn)行鑒定分型的方式方法。通過公共數(shù)據(jù)庫〔〕對全球范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比擬分析。應(yīng)用于腸球菌研究的MSLT主要集中在屎腸球菌和糞腸球菌[14]。該方式方法各針對兩種菌的7個(gè)管家基因設(shè)計(jì)引物，對其進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序，得出各個(gè)基因位點(diǎn)的等位基因數(shù)值，分析序列和等位基因圖譜，在這里基礎(chǔ)進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析。楊晶[23]等對四川省自貢市肉及其制品中糞腸球菌進(jìn)行耐藥性毒力基因和多位點(diǎn)序列分型分析，結(jié)果指出，一樣的ST型別的糞腸球菌有類似的耐藥譜圖和毒力基因攜帶情況。2、腸球菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)方式方法比擬研究腸球菌藥敏試驗(yàn)方式方法在實(shí)際操作中按結(jié)果主要分為測量藥物紙片抑菌圈直徑大小的K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法；檢測最小抑菌濃度〔MIC〕的微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法及自動化藥敏檢測法；以及擴(kuò)散法和稀釋法相結(jié)合的E-test實(shí)驗(yàn)。2.1、K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法是當(dāng)前應(yīng)用較廣的一種藥敏實(shí)驗(yàn)方式方法。該方式方法通過將浸有各類藥物的紙片貼在均勻涂布0.5麥?zhǔn)蠞舛染旱腗-H瓊脂平板上，經(jīng)過24h培養(yǎng)后，測量抑菌圈的大小，對照斷定標(biāo)準(zhǔn)快速判讀結(jié)果。抑菌圈的直徑與MIC值呈負(fù)相關(guān)。當(dāng)前實(shí)際操作中，K-B法采用的是美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會〔CLSI〕推薦的標(biāo)準(zhǔn)。楊龍斌[24]等對江淮地區(qū)40株豬源腸球菌進(jìn)行K-B法藥敏測試發(fā)現(xiàn)，40株腸球菌均耐以上6種藥物，耐以上8種藥物的占95%，提示江淮地區(qū)豬源腸球菌多重耐藥現(xiàn)象很嚴(yán)重。K-B法所要求的試驗(yàn)條件相對較低，可廣泛應(yīng)用于實(shí)際，但最近有報(bào)道[25]指出，在腸球菌檢測萬古霉素時(shí)，K-B法測定結(jié)果與稀釋法和儀器法存在顯著差異，結(jié)果證明，在萬古霉素藥敏測定中K-B法并不可靠。另外K-B法的結(jié)果受限于培養(yǎng)時(shí)間、接種菌量、藥敏紙片的質(zhì)量、瓊脂厚度等因素，并不合適作為藥敏斷定結(jié)果的最終指標(biāo)，更合適未知耐藥菌株的初步篩查。2.2、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法及自動化藥敏檢測方式方法微量肉湯稀釋法能有效測定出菌株的最小抑菌濃度，操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化，商品化的藥敏板也已經(jīng)開場在實(shí)際檢測中應(yīng)用，是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物源耐藥性監(jiān)測工作的指定方式方法。瓊脂稀釋法與微量肉湯稀釋法在實(shí)驗(yàn)原理上均為測試菌株的最小抑菌濃度，不同在于瓊脂稀釋法介質(zhì)為固體瓊脂平板。瓊脂稀釋法通過將菌液點(diǎn)種在含有不同濃度藥物的瓊脂平板上，經(jīng)培養(yǎng)后觀察其生長情況，以細(xì)菌不能生長的藥物濃度為MIC值。瓊脂稀釋法同樣能精到準(zhǔn)確的測定MIC值，重復(fù)性好，能同時(shí)測定大量菌株，還能觀察被測菌株能否染有雜菌[26]，但當(dāng)樣品量小時(shí)，其操作過于繁瑣，耗時(shí)過長，實(shí)驗(yàn)試劑浪費(fèi)太多。除了上述兩種手工操作方式方法外，當(dāng)前市面上自動化的藥敏檢測儀器包括VITEK、MicroScan、ATB等系統(tǒng)。李萌[25]等利用VITEK32細(xì)菌自動分析儀GPS-TB藥敏卡檢測腸球菌對萬古霉素MIC時(shí)，與肉湯稀釋法相比擬，實(shí)驗(yàn)證明兩者沒有顯著差異，對萬古霉素的藥敏結(jié)果可靠。自動化藥敏系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)在于高效、準(zhǔn)確、操作簡便，但缺點(diǎn)在于成本較高，藥物種類受限較多。2.3、E-test實(shí)驗(yàn)E-test實(shí)驗(yàn)是結(jié)合K-B法和瓊脂稀釋法的一種新的藥敏測試方式方法。該方式方法操作同K-B紙片擴(kuò)散法，簡便易操作，又利用預(yù)制的含有一系列藥物濃度的E-test條，得到該藥物的最低抑菌濃度〔MIC〕值，具備稀釋法同樣的效果，且可選擇藥物種類多，在近年實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中越來越普遍。在E-test實(shí)驗(yàn)中，所采用的E-test試紙條是實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度最關(guān)鍵的耗材。劉亞麗[27]等比擬了5種國產(chǎn)試紙條〔青霉素、氯霉素、萬古霉素、兩性霉素B和氟康唑〕和法國梅里埃進(jìn)口試紙條的藥敏斷定結(jié)果，兩者一致性較好，均準(zhǔn)確可靠，國產(chǎn)試紙條在降低檢測成本的同時(shí)，能夠提供準(zhǔn)確的結(jié)果。3、腸球菌耐藥機(jī)制的研究腸球菌對抗生素的耐藥性能夠分為天然性耐藥和獲得性耐藥。腸球菌的天然耐藥性由染色體基因決定的。腸球菌的細(xì)胞壁堅(jiān)厚，對很多現(xiàn)有的抗生素有天然的耐藥性，如頭孢類抗生素、氨基糖苷類抗生素、克林霉素等。腸球菌的獲得性耐藥是腸球菌通過質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子-基因盒系統(tǒng)等方式從其他細(xì)菌得到耐藥基因，進(jìn)而使腸球菌產(chǎn)生耐藥性，如高水平的-內(nèi)酰胺類、萬古霉素、四環(huán)素等。3.1、-內(nèi)酰胺類耐藥-內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)理是通過抑制青霉素結(jié)合蛋白，阻礙細(xì)胞壁的合成，進(jìn)而殺死細(xì)菌。20世紀(jì)80年代早期發(fā)現(xiàn)了-內(nèi)酰胺類耐藥的腸球菌，研究其耐藥原因，主要是由于其能產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶。腸球菌的-內(nèi)酰胺酶由tem基因編碼，其耐藥機(jī)制是低親和力的青霉素結(jié)合蛋白的過度產(chǎn)生及此蛋白對青霉素結(jié)合力的減弱[28]。王蒙蒙[29]等報(bào)道，我們國家新疆北疆地區(qū)的49株豬源糞腸球菌中tem基因的檢出率最高，為93.88%。顧欣[30]等報(bào)道，上海地區(qū)的133株糞腸球菌中tem基因的檢出率為63.2%，在耐藥表型陽性的菌株中的tem基因檢出率為85.7%，基因型陽性的菌株耐藥表型均為陽性，結(jié)果表示清楚，攜帶tem基因是導(dǎo)致糞腸球菌耐藥的主要原因。3.2、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥腸球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥基因主要包括介導(dǎo)藥物靶位改變的紅霉素核糖體甲基化酶基因〔Erm基因〕、介導(dǎo)抗生素主動排外的mefA基因和msr基因等。Erm基因通過對細(xì)菌23sRNA轉(zhuǎn)錄后的修飾作用，影響了23sRNA與藥物結(jié)合的空間構(gòu)造，進(jìn)而減少藥物的結(jié)合，產(chǎn)生耐藥性[31]。已發(fā)現(xiàn)的erm基因有20余種，腸球菌中的Erm基因主要是ErmB。mefA基因和以ATP為動力的msr基因都是抗生素主動排外基因。該類基因通過編碼轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，將抗生素泵出菌體外，使細(xì)胞內(nèi)的抗生素濃度降低，進(jìn)而產(chǎn)生耐藥性。王偉軍[32]等對臨床分離的72株糞腸球菌進(jìn)行耐大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥基因〔ErmB、ErmTR、mefA和mefE〕檢測，發(fā)現(xiàn)57株〔79.1%〕檢出ErmB基因，54株耐紅霉素的菌株中ErmB基因的攜帶率為96.4%，未檢出其他3種耐藥基因。顧欣[30]等檢測上海地區(qū)的133株糞腸球菌，華而不實(shí)132株耐紅霉素，ErmB的檢出率為95.5%，未檢出mefA基因，在耐藥表型陽性的菌株中ErmB基因檢出率為96.2%，基因型陽性的菌株耐藥表型均為陽性，結(jié)果表示清楚，ErmB基因是導(dǎo)致紅霉素耐藥的主要原因，mefA基因的主動排外機(jī)制未發(fā)現(xiàn)。關(guān)于糞腸球菌耐藥的主動排外機(jī)制有待進(jìn)一步研究。3.3、四環(huán)素類耐藥腸球菌獲得四環(huán)素耐藥除了極少出現(xiàn)的本身染色體突變導(dǎo)致的以外，主要是獲得外源耐藥基因?qū)е?。外源基因作用機(jī)制主要分為核糖體保衛(wèi)機(jī)制，如tetM基因和抗生素主動外泵機(jī)制，如tetL基因。已發(fā)現(xiàn)的四環(huán)素耐藥基因有近50種，包括核糖體保衛(wèi)蛋白基因12種、外排泵基因30種等[33]。當(dāng)前腸球菌耐藥基因研究文獻(xiàn)報(bào)道中最多的是核糖體保衛(wèi)蛋白基因tetM，其編碼的核糖體保衛(wèi)蛋白，使得腸球菌對四環(huán)素類藥物產(chǎn)生抗性。王蒙蒙[29]等報(bào)道，我們國家新疆北疆地區(qū)的49株豬源糞腸球菌中tetM基因檢出率僅次于tem基因，到達(dá)85.71%。顧欣[30]等報(bào)道在上海地區(qū)分離的133株糞腸球菌中耐紅霉素的為129株，tetM基因檢出率為91.0%，基因陽性與表型陽性符合率在93.8%。王鈴飛[34]等對14株屎腸球菌進(jìn)行四環(huán)素耐藥基因檢測，分別有13株tetL和9株tetM，華而不實(shí)9株同時(shí)攜帶tetM和tetL，提示豬屎腸球菌的耐藥性主要與這兩種耐藥基因有關(guān)。3.4、氨基糖苷類藥物腸球菌對低濃度的氨基糖苷類藥物具有天然耐藥性。美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會〔NCCLS)建議將腸球菌在氨基糖苷類藥物上的耐藥程度分為中度耐藥和高度耐藥。當(dāng)前已經(jīng)知道的有高水平慶大霉素耐藥、高水平鏈霉素耐藥等[35]。腸球菌高水平氨基糖苷類耐藥主要是其獲得編碼氨基糖苷類修飾酶的基因所導(dǎo)致的。氨基糖苷類修飾酶當(dāng)前已經(jīng)知道有30多種，華而不實(shí)最常見的4種包括由aac(6)/aph(2)基因編碼的能使青霉素或糖肽類藥物與氨基糖苷類藥物協(xié)同作用消失的6位-乙酰轉(zhuǎn)移酶/2位-磷酸轉(zhuǎn)移酶AAC(6)/APH(2)雙功能酶；由aph(3)-Ⅲ編碼的3位-磷酸轉(zhuǎn)移酶APH(3)-Ⅲ；有ant(6)-Ⅰ編碼的6位-核苷轉(zhuǎn)移酶ANT(6)-Ⅰ；由ant(2)-Ⅰ編碼的2位-核苷轉(zhuǎn)移酶ANT(2)-Ⅰ。賈偉[36]等研究表示清楚，在高水平氨基糖苷類耐藥的糞腸和屎腸球菌中aac(6)/aph(2)的陽性率分別為88.5%和52.4%，檢出率占比最高。齊亞銀[37]等在動物源〔牛、羊、豬、雞〕糞腸球菌的耐藥基因檢測中發(fā)現(xiàn)，aac(6)/aph(2)檢出率到達(dá)55%,ant(6)-Ⅰ檢出率大道55%,aph(3)-Ⅲ檢出率到達(dá)25%，與耐慶大霉素表型60%的檢出率基本一致。4、小結(jié)自第一種抗生素發(fā)現(xiàn)以來，人類對抗生素的應(yīng)用在不斷加大、加深，其應(yīng)用范圍不只局限在治療人類疾病，更多地應(yīng)用在養(yǎng)殖業(yè)上。除了用于治療食品動物的疾病外，更多的是添加到飼料中起到預(yù)防疾病和促生長作用。據(jù)報(bào)道，2018年我們國家食品動物中抗生素的使用比例已到全球的23%，位列第一，遠(yuǎn)超第二的美國[8]。在抗生素用量逐年增加，細(xì)菌耐藥性問題已成為不可避免的難題，十分是有研究表示清楚，動物源的耐藥菌和耐藥基因可沿養(yǎng)殖動物-環(huán)境-食品-人群鏈條傳播[38]，使得細(xì)菌耐藥性的研究不僅僅是醫(yī)學(xué)問題。腸球菌作為一種人畜共患的條件致病菌，由于其基因的可塑性強(qiáng)，成為耐藥基因的存儲庫，對其耐藥性發(fā)展的研究成為熱門。汪玲[39]等對人源和動物源性腸球菌ErmB基因進(jìn)行研究，試驗(yàn)表示清楚，ErmB基因在體外條件下可在人源和動物源腸球菌之間傳遞。另外，人源和動物源腸球菌及不同種屬的腸球菌有一樣的ErmB等位基因，提示其耐藥基因在動物源和人源水平傳播存在可能性?；诋?dāng)前的研究成果反映的現(xiàn)在狀況，為了遏制動物源細(xì)菌耐藥性的進(jìn)一步發(fā)展，我們國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺了各項(xiàng)政策，包括(遏制細(xì)菌耐藥國家行動計(jì)劃〔2021-2020年〕〕(全國遏制動物源細(xì)菌耐藥行動計(jì)劃〔2021-2020年〕〕等，采取了限制促生長類抗生素的使用，建立全國范圍動物源細(xì)菌耐藥監(jiān)測體系等措施。將來隨著各種檢測技術(shù)，十分是分子生物學(xué)的發(fā)展，對動物源腸球菌耐藥性的研究，及其人畜之間傳播的可能性研究更為值得關(guān)注。以下為參考文獻(xiàn)[1]布坎南,吉本斯,等.中國科學(xué)院微生物研究所〔譯〕.伯氏細(xì)菌鑒定手冊[M].北京：科學(xué)出版社,1984:694-697.[2]朱娜,夏宇飛,張磊,等.湖南健康豬源與流行性腹瀉病豬腸球菌毒力基因檢測分析[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2021,39(3):196-200.[3]張欣,李博,閆金坤,等.雛雞屎腸球菌感染的病原學(xué)與分子生物學(xué)診斷[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2021,39(5):124-128.[4]莫奉乙,趙克華,楊恩忠,等.淺談龍陵黃山羊羔羊痢疾的發(fā)生與防治措施[J].畜禽業(yè),2021(4):66.[5]蔡金山,闞威,趙興緒,等.利用RFLP分型方式方法鑒定牛源性鏈球菌和腸球菌[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2021,38(6):467-470.[6]MannuaL,PabaaA,DagaaE,etal.ComparisonoftheincidenceofvirulencedeterminantsandantibioticresistancebetweenEnterococcusfaeciumstrainsofdairy,animalandclinicalorigin[J].Int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