人類基因的課件資料

人類基因的課件資料第1頁(yè)/共75頁(yè)第二章人類基因基因的概念基因的化學(xué)本質(zhì)人類基因和基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)基因的生物學(xué)特性人類基因組計(jì)劃第2頁(yè)/共75頁(yè)基因的概念1865年基因是一些特殊因子1871年發(fā)現(xiàn)核酸1903年染色體是遺傳單位1910年基因位于染色體上1913年染色體包含線性排列的基因1927年突變是基因內(nèi)的物理變化1931年交換引起重組1944年DNA是遺傳物質(zhì)1945年基因編碼蛋白質(zhì)1951年首次蛋白質(zhì)測(cè)序1953年DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)1958年DNA半保留復(fù)制1961年三聯(lián)體密碼發(fā)現(xiàn)1977年真核基因不連續(xù)性1977年DNA可以測(cè)序1995年首次基因組測(cè)序第3頁(yè)/共75頁(yè)基因的概念基因（gene）是決定一定功能產(chǎn)物的DNA序列。這種功能產(chǎn)物主要是蛋白質(zhì)和RNA。一個(gè)基因的結(jié)構(gòu)除了編碼特定功能產(chǎn)物的DNA序列外，還包括對(duì)這個(gè)特定產(chǎn)物表達(dá)所需的鄰接DNA序列。

第4頁(yè)/共75頁(yè)基因的化學(xué)本質(zhì)

在整個(gè)生物界中，絕大部分生物（包括人類）基因的化學(xué)本質(zhì)是DNA；在某些僅含有RNA和蛋白質(zhì)的病毒中，基因的化學(xué)本質(zhì)是RNA。

第5頁(yè)/共75頁(yè)一、DNA分子組成DNA分子的基本單位是脫氧核苷酸，依各自所攜堿基的不同，可以分成A、G、C、T4種。將它們按一定順序排列連接后即構(gòu)成DNA單鏈。它們的排列順序是DNA遺傳的核心。二、DNA分子結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型基因的化學(xué)本質(zhì)第6頁(yè)/共75頁(yè)第7頁(yè)/共75頁(yè)第8頁(yè)/共75頁(yè)第9頁(yè)/共75頁(yè)第10頁(yè)/共75頁(yè)第11頁(yè)/共75頁(yè)第12頁(yè)/共75頁(yè)第13頁(yè)/共75頁(yè)第14頁(yè)/共75頁(yè)人類基因組人類基因組（genome）是人的所有遺傳信息的總和。它包括兩個(gè)相對(duì)獨(dú)立而相互關(guān)聯(lián)的基因組：核基因組與線粒體基因組。通常人類基因組指的是核基因組。第15頁(yè)/共75頁(yè)人類基因組的組織結(jié)構(gòu)

第16頁(yè)/共75頁(yè)第17頁(yè)/共75頁(yè)人類的基因或人類基因組中的功能序列可分為4大類，即單一基因、基因家族、擬基因和串聯(lián)重復(fù)基因?；蚣易濉赣梢粋€(gè)祖先基因經(jīng)過(guò)重復(fù)和變異所形成的一組基因。有兩類：（1）一個(gè)基因簇：由一個(gè)基因產(chǎn)生多次拷貝（幾乎相同序列），成簇排列于同一染色體上。（2）多基因簇（圖3-5）：成簇地分布于幾條不同的染色體上。如編碼珠蛋白的基因：5個(gè)相關(guān)基因排列于16p染色體上。擬基因或假基因—指在多基因家族中某些成員不產(chǎn)生有功能的基因產(chǎn)物?；虻姆诸惖?8頁(yè)/共75頁(yè)第19頁(yè)/共75頁(yè)第20頁(yè)/共75頁(yè)第21頁(yè)/共75頁(yè)基因的結(jié)構(gòu)真核生物基因的編碼序列往往被非編碼序列所分割，呈現(xiàn)斷裂狀的結(jié)構(gòu)，故而也稱斷裂基因（splitgene）。一、外顯子和內(nèi)含子外顯子（exon）:編碼序列內(nèi)含子（intron）:非編碼序列第22頁(yè)/共75頁(yè)外顯子-內(nèi)含子的接頭區(qū)是一高度保守的一致順序，稱為外顯子-內(nèi)含子接頭。每一個(gè)內(nèi)含子的5′端起始的兩個(gè)堿基是GT，3′端最后的兩個(gè)堿基是AG，通常把這種接頭形式叫做GT-AG法則（GT-AGrule）。這兩個(gè)序列是高度保守的，在各種真核基因的內(nèi)含子中均相同。每個(gè)斷裂基因中第一個(gè)外顯子的上游和最末一個(gè)外顯子的下游，都有一段不被轉(zhuǎn)錄的非編碼區(qū)，稱為側(cè)翼順序?；虻慕Y(jié)構(gòu)第23頁(yè)/共75頁(yè)第二節(jié)遺傳的分子基礎(chǔ)二、真核基因的分子結(jié)構(gòu)特征第24頁(yè)/共75頁(yè)基因組的組成人類基因組按DNA序列分類既有單拷貝序列，也有重復(fù)頻率不等的多拷貝序列。單拷貝序列：在基因組中僅有單一拷貝或少數(shù)幾個(gè)拷貝，長(zhǎng)度在800～1000bp之間，其中有些是編碼細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)基因，占到人類基因組的大多數(shù)。重復(fù)多拷貝序列：分散地穿插于整個(gè)基因組中，根據(jù)復(fù)性的速度不同，又可分為簡(jiǎn)單序列DNA和中度重復(fù)DNA。第25頁(yè)/共75頁(yè)簡(jiǎn)單序列DNA（simple-sequenceDNA）或衛(wèi)星DNA：以小于200bp的小片段為單位串聯(lián)重復(fù)很多次，約占整個(gè)基因組的10％～15％，大多數(shù)長(zhǎng)度可達(dá)105bp，多位于染色體的異染色質(zhì)區(qū)。在蔗糖或氯化銫密度梯度超速離心圖譜上觀察到的位于染色體DNA主帶旁邊的小帶DNA重復(fù)多拷貝序列第26頁(yè)/共75頁(yè)第27頁(yè)/共75頁(yè)重復(fù)多拷貝序列小衛(wèi)星DNA（minisatelliteDNA)：有15-100bp組成的重復(fù)單位，重復(fù)20-50次形成的1-5kb的短DNA微衛(wèi)星DNA（microsatelliteDNA）：某些存在于基因組的間隔序列和內(nèi)含子等非編碼區(qū)內(nèi)的簡(jiǎn)單序列DNA，重復(fù)序列為1-6bp，被稱為~。第28頁(yè)/共75頁(yè)中度重復(fù)DNA（intermediaterepeatDNA）：約占整個(gè)基因組的25％～40％，以不同的量分布于整個(gè)基因組的不同部位。短分散元件（shortinterspersedelement）：DNA的長(zhǎng)度可短至100bp～500bp，拷貝數(shù)105以上。如Alu家族長(zhǎng)分散元件（longinterspersedelement）：可長(zhǎng)達(dá)6000bp～7000bp，拷貝數(shù)為102~10４

。如KpnI家族重復(fù)多拷貝序列第29頁(yè)/共75頁(yè)第30頁(yè)/共75頁(yè)

基因的生物學(xué)特性

DNA分子中堿基對(duì)的排列順序蘊(yùn)藏著遺傳信息，決定了基因的基本功能和特性。基因復(fù)制與表達(dá)構(gòu)成了基因的主要功能。

第31頁(yè)/共75頁(yè)遺傳密碼：在DNA的脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈上，每三個(gè)相鄰的堿基序列構(gòu)成一個(gè)三聯(lián)體，每個(gè)三聯(lián)體密碼能編碼某種氨基酸，所以三聯(lián)體（triplet）是遺傳信息的具體表現(xiàn)形式。因而三聯(lián)體又稱三聯(lián)體密碼（tripletcode）、遺傳密碼（geneticcode）或密碼子（codon）。遺傳信息的儲(chǔ)存單位第32頁(yè)/共75頁(yè)編碼鏈：5'-ATGAAACGAGTCTTATGA-3'反編碼鏈：mRNA：3'-TACTTTGCTCAGAATACT-5'5'-AUGAAACGAGUCUUAUGA

-3'第33頁(yè)/共75頁(yè)遺傳密碼的特性通用性在絕大多數(shù)情況下，遺傳密碼在整個(gè)生物界中都是通用的。但也有一些例外存在，如線粒體DNA中有3個(gè)遺傳密碼與通用密碼不同。簡(jiǎn)并性除少數(shù)氨基酸僅有一種密碼子外，其余氨基酸都各被2～6個(gè)密碼子編碼，這種現(xiàn)象稱為遺傳密碼的簡(jiǎn)并性（degeneracy）。起始密碼和終止密碼密碼子AUG若位于mRNA的5′端起始處，則是蛋白質(zhì)合成的起始信號(hào)，叫起始密碼子（initiationcodon），同時(shí)編碼甲酰甲硫氨酸和甲硫氨酸；若不是位于mRNA的起始端，則只具有編碼甲硫氨酸的作用。密碼子UAA、UAG和UGA不編碼任何氨基酸，而是作為肽鏈合成的終止信號(hào)，稱為終止密碼子。第34頁(yè)/共75頁(yè)基因通過(guò)自我復(fù)制保持遺傳的連續(xù)性基因具有自我復(fù)制（self-replication）的重要特性。復(fù)制發(fā)生在細(xì)胞分裂周期的S期，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解旋為兩條單股的多核苷酸鏈，以DNA分子自身的每一股單鏈為模板進(jìn)行自我復(fù)制合成新的DNA分子。復(fù)制的起點(diǎn)由特定的堿基序列組成。真核生物的復(fù)制從多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)開(kāi)始進(jìn)行。

第35頁(yè)/共75頁(yè)新鏈的復(fù)制過(guò)程具有一定的特點(diǎn)互補(bǔ)性：半保留性：反向平行性：不對(duì)稱性：不連續(xù)性：基因通過(guò)自我復(fù)制保持遺傳的連續(xù)性第36頁(yè)/共75頁(yè)第37頁(yè)/共75頁(yè)第38頁(yè)/共75頁(yè)第39頁(yè)/共75頁(yè)基因表達(dá)（geneexpression）：是把基因所儲(chǔ)存的遺傳信息轉(zhuǎn)變?yōu)橛商囟ǖ陌被岱N類和序列構(gòu)成的多肽鏈，再由多肽鏈構(gòu)成蛋白質(zhì)或酶分子，從而決定生物各種性狀（表型）的過(guò)程。基因表達(dá)包括兩個(gè)步驟：①以DNA為模板轉(zhuǎn)錄合成mRNA；②將遺傳信息翻譯成多肽鏈中相應(yīng)的氨基酸種類和序列基因表達(dá)第40頁(yè)/共75頁(yè)轉(zhuǎn)錄（transcription）：是在RNA聚合酶的催化下，以DNA的3′→5′單鏈（反編碼鏈）為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（但RNA以U和DNA的A配對(duì)，其余配對(duì)形式與復(fù)制時(shí)一致），以三磷酸核苷酸（NTP）為原料合成RNA的過(guò)程。轉(zhuǎn)錄的最終產(chǎn)物是mRNA、tRNA和rRNA等?；虮磉_(dá)第41頁(yè)/共75頁(yè)轉(zhuǎn)錄過(guò)程：一般將mRNA的合成分為起始、延伸和終止3個(gè)連續(xù)的步驟。①在起始階段，RNA聚合酶Ⅱ與啟動(dòng)子結(jié)合，即可啟動(dòng)RNA的轉(zhuǎn)錄合成。②延伸過(guò)程是RNA聚合酶Ⅱ由全酶構(gòu)型變?yōu)橹髅笜?gòu)型，并沿著模板鏈的3′→5′方向移動(dòng)，并精確地按照堿基互補(bǔ)原則，以三磷酸核苷酸（UTP、CTP、GTP和ATP）為底物，在3′端逐個(gè)添加核苷酸，使mRNA不斷延伸；③終止是RNA聚合酶Ⅱ在DNA模板上移動(dòng)到達(dá)終止信號(hào)時(shí)，RNA合成的停止。

第42頁(yè)/共75頁(yè)第43頁(yè)/共75頁(yè)第44頁(yè)/共75頁(yè)已發(fā)現(xiàn)的一些啟動(dòng)子包括TATA框（TATAbox）、CAAT框（CAATbox）、GC框（GCbox）以及增強(qiáng)子（enhancer）等，它們構(gòu)成了結(jié)構(gòu)基因的側(cè)翼序列（flankingsequence），是人類基因組的一些特殊序列，稱為調(diào)控序列，對(duì)基因的有效表達(dá)是必不可缺少的。第45頁(yè)/共75頁(yè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工和修飾：由RNA聚合酶Ⅱ催化所形成的初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，僅僅是mRNA的前體，必須經(jīng)過(guò)加工和修飾，才能形成有功能的mRNA。主要包括“加帽”（capping）－－5′端加“7-甲基鳥(niǎo)嘌吟核苷酸”；

“加尾”（tailing）－－3′端加“多聚腺苷酸”（polyA）和剪接－－按GT-AG法則將內(nèi)含子切除，再將外顯子由連接酶逐段連接起來(lái)，形成成熟的mRNA分子。第46頁(yè)/共75頁(yè)第47頁(yè)/共75頁(yè)第48頁(yè)/共75頁(yè)翻譯（translation）：是以mRNA為模板指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的過(guò)程。蛋白質(zhì)合成是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體上進(jìn)行的。蛋白質(zhì)翻譯時(shí)mRNA攜帶遺傳信息，作為合成蛋白質(zhì)的模板；tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)活化的氨基酸和識(shí)別mRNA分子上的遺傳密碼；核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所，把各種特定的氨基酸分子連接成多肽鏈。蛋白質(zhì)分子最終的空間結(jié)構(gòu)是由翻譯后修飾所決定的。第49頁(yè)/共75頁(yè)第50頁(yè)/共75頁(yè)第51頁(yè)/共75頁(yè)第52頁(yè)/共75頁(yè)RNA編輯（RNAediting）是導(dǎo)致形成的mRNA分子在編碼區(qū)的核苷酸序列不同于它的DNA模板相應(yīng)序列的過(guò)程，屬遺傳信息加工。1.尿嘧啶核苷酸的加入或刪除2.C→U、A→G或G→A的RNA堿基轉(zhuǎn)換3.C→G、G→C或U→A的RNA堿基顛換生物學(xué)意義主要表現(xiàn)在：①通過(guò)編輯的mRNA具有翻譯活性；②使該mRNA能被通讀；③在一些轉(zhuǎn)錄物5′末端可創(chuàng)造生成起始密碼子AUG，以調(diào)節(jié)翻譯活性；④RNA編輯可能與生物進(jìn)化有關(guān)；⑤RNA編輯不偏離中心法則，因?yàn)樘峁┚庉嫷男畔⒃慈匀粊?lái)源于DNA貯藏的遺傳信息。

第53頁(yè)/共75頁(yè)基因表達(dá)的控制基因表達(dá)控制的特點(diǎn)是能在特定時(shí)間和特定細(xì)胞中激活特定的基因，從而實(shí)現(xiàn)“預(yù)訂”的有序的分化發(fā)育過(guò)程。真核生物基因表達(dá)調(diào)控是通過(guò)多階段水平實(shí)現(xiàn)的，即轉(zhuǎn)錄前、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后、翻譯和翻譯后等五個(gè)水平。第54頁(yè)/共75頁(yè)人類基因組（genome）通常是指核基因組，是人的所有遺傳信息的總和。人類基因組第55頁(yè)/共75頁(yè)人類基因組計(jì)劃“人類基因組計(jì)劃（humangenomeproject，HGP）”是20世紀(jì)90年代初開(kāi)始的全球范圍的全面研究人類基因組的重大科學(xué)項(xiàng)目。HGP是美國(guó)科學(xué)家在1985年率先提出的，旨在闡明人類基因組DNA3.2×109核苷酸的序列，發(fā)現(xiàn)所有人類基因并闡明其在染色體上的位置，破譯人類全部遺傳信息，使得人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識(shí)自我。第56頁(yè)/共75頁(yè)HGP的整體目標(biāo)是闡明人類遺傳信息的組成和表達(dá)，為人類遺傳多樣性的研究提供基本數(shù)據(jù)，揭示人類單基因異常和嚴(yán)重危害人類健康的多基因病的致病基因或者疾病易感基因，建立對(duì)各種基因病新的診治方法，從而推動(dòng)整個(gè)生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展。其基本任務(wù)是建立人類基因組的結(jié)構(gòu)圖譜，即遺傳圖、物理圖、轉(zhuǎn)錄圖與序列圖，并在“制圖-測(cè)序”的基礎(chǔ)上鑒定人類的基因，繪出人類的基因圖。第57頁(yè)/共75頁(yè)一、人類結(jié)構(gòu)基因組學(xué)（humanstructuralgenomics)集中建立遺傳圖、物理圖、轉(zhuǎn)錄圖、序列圖基因圖（一）遺傳圖（geneticmap)—連鎖圖（linkagemap)——是以具有遺傳多態(tài)性的遺傳標(biāo)記作為“位標(biāo)”，以遺傳學(xué)距離作為“圖距”的基因組圖。遺傳多態(tài)性—指在一個(gè)遺傳座位上具有一個(gè)以上的等位基因（群體頻率>1%),該座位稱為多態(tài)性座位，可作為遺傳圖的“位標(biāo)”。遺傳學(xué)距離是經(jīng)典遺傳學(xué)中特有的重要概念。第58頁(yè)/共75頁(yè)具有遺傳多態(tài)性的標(biāo)記是建立遺傳圖的要素：第一代DNA遺傳標(biāo)記—RFLPBotstein于1980年最早應(yīng)用的標(biāo)記；RFLP局限性：1、提供的“多態(tài)性”的信息有限；2、現(xiàn)有的限制酶不可能檢出所有的核苷酸改變；3、需要用同位素標(biāo)記與Southern雜交技術(shù)，不安全又不宜自動(dòng)化。第二代DNA遺傳標(biāo)記—STR：1、小衛(wèi)星DNA-重復(fù)單位6-12個(gè)bp的VNTR2、微衛(wèi)星或短串聯(lián)重復(fù)（STR）—重復(fù)單位2-6個(gè)bp的VNTR第59頁(yè)/共75頁(yè)STR有兩個(gè)最突出優(yōu)點(diǎn)：1、作為遺傳標(biāo)記的“多態(tài)性”與“高頻率”。2、采用重復(fù)序列兩側(cè)的特異性單拷貝序列作為其在基因組中定“點(diǎn)”標(biāo)記，以PCR技術(shù)操作，可以實(shí)現(xiàn)機(jī)器化、自動(dòng)化、電腦化以至完全機(jī)器人化。已建立6000多個(gè)STR為主體的遺傳標(biāo)記組成的“連鎖圖”，平均分辨率已達(dá)0.7cM。第60頁(yè)/共75頁(yè)第三代DNA遺傳標(biāo)記—SNP：1996年美國(guó)MIT的Lander所提出。1、與RFLP和STR等主要不同：不再以“長(zhǎng)度”的差異作為檢測(cè)手段，而直接以序列的變異作為標(biāo)記。2、SNP在核苷酸水平上把“序列圖”、“物理圖”和“遺傳圖”有機(jī)統(tǒng)一起來(lái)。3、可能摒棄遺傳標(biāo)記分析技術(shù)“瓶頸”—凝膠電泳，用DNA測(cè)序技術(shù)構(gòu)建基因組圖。第61頁(yè)/共75頁(yè)（二）物理圖：第一技術(shù)重要內(nèi)容：是以一段已知核苷酸序列的DNA片段—稱為序列標(biāo)記部位（STS）為“位標(biāo)”，以Mb或kb作為圖距的基因組圖。STS的要求：1：在基因組中有明確的位置，位于重復(fù)序列兩側(cè)的單拷貝特異性序列，而忽略其重復(fù)序列。2、一段已知的序列。至1996年10月已建立22000個(gè)STS的物理圖，X染色體物理圖平均分辨率已達(dá)75kb。第62頁(yè)/共75頁(yè)第二重要內(nèi)容：是建立以DNA克隆片段相互重疊的“鄰接克隆群—conting”?！班徑涌寺∪骸钡膶?shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：用PCR證明這些片段含有STS的序列—呈現(xiàn)陽(yáng)性，并確定這些片段在基因組中的位置。借助于酵母人工YAC片段巨大（0.5~2Mb）的優(yōu)點(diǎn)，構(gòu)建總體覆蓋率幾乎100%的“YAC鄰接克隆群”；細(xì)菌人工染色體（BAC）構(gòu)建總體覆蓋率為100%的、精度更高的“鄰接克隆群”。第63頁(yè)/共75頁(yè)第64頁(yè)/共75頁(yè)“物理圖”的建立應(yīng)該歸功于DNA克隆技術(shù)70年代重大突破—DNA克隆技術(shù)（遺傳工程技術(shù)之一）：1、質(zhì)?！b載能力，即插入片段<10kb2、噬菌體—裝載能力達(dá)20kb。3、兼有病毒與質(zhì)粒優(yōu)點(diǎn)的粘?！b載能力可達(dá)30~40kb。4、YAC—是人類認(rèn)識(shí)真核生物染色體的重大飛躍。其獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)是裝載能力可達(dá)0.5~2Mb，是大片段DNA載體；其次其“人工染色體”性質(zhì)具有準(zhǔn)確復(fù)制并隨著宿主細(xì)胞分裂而分離。第65頁(yè)/共75頁(yè)總結(jié)：1、以STS為位標(biāo)的“序列標(biāo)記”將遺傳圖、細(xì)胞遺傳學(xué)圖以及分子水平的物理圖—序列圖統(tǒng)一成整體的人類基因組圖。2、真核生物的染色體是遺傳物質(zhì)最客觀、最可靠、最方便的“物理標(biāo)記”，細(xì)胞遺傳圖可以說(shuō)是人類基因組的最基本層次的基因組圖。3、人類擁有的完整的、多層次的、全方位的“基因組全圖”包括細(xì)胞遺傳學(xué)圖—以區(qū)、帶為標(biāo)記或以人為的等分圖即染色體長(zhǎng)度的百分率為標(biāo)記、大規(guī)模的限制圖—以稀有酶切點(diǎn)為標(biāo)記與精細(xì)限制圖—以常規(guī)限制性內(nèi)切酶的位點(diǎn)為標(biāo)記、基因組特異序列—如CpG序列、Alu序列等圖，DNA克隆圖以及分子水平的核苷酸序列圖，自發(fā)的染色體斷裂點(diǎn)圖與重組部位圖。第66頁(yè)/共75頁(yè)（三）轉(zhuǎn)錄圖：以“表達(dá)序列標(biāo)記”（EST）繪制轉(zhuǎn)錄圖（也稱cDNA圖或表達(dá)圖——人類“基因圖”的雛形。1990年提出“cDNA策略”，并作為“基因組全圖策略的補(bǔ)充”。1996年，至少已來(lái)自300個(gè)組織的60多萬(wàn)個(gè)EST，總長(zhǎng)度至少在200Mb以上。現(xiàn)已有53000個(gè)各不相同的轉(zhuǎn)錄本片段，可能代表30%~50%的基因的大部分信息。第67頁(yè)/共75頁(yè)轉(zhuǎn)錄圖與EST的現(xiàn)實(shí)意義：1、為估計(jì)人類基因的數(shù)目提供較為可靠的依據(jù)。2、提供不同組織、不同發(fā)育階段的基因表達(dá)的數(shù)目、種類及結(jié)構(gòu)，特別是序列的信息。3、提供了鑒定基因的探針，以EST可從“全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)”篩到全長(zhǎng)cDNA。4、本身就有直接的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。作為“基因組”的一種物理標(biāo)記，EST尚缺少定位的信息?，F(xiàn)在可用FISH及比較基因組雜交（CGH）來(lái)基因定位。第68頁(yè)/共75頁(yè)（四）序列圖以DNA測(cè)序繪制序列圖，是分子水平的最高層次的、最詳盡的物理圖。測(cè)序總長(zhǎng)度約為1m，由30億核苷酸組成的序列圖是人類基因組計(jì)劃中最為明確、最為艱巨的定量、定質(zhì)、定時(shí)的任務(wù)。目前，測(cè)定技術(shù)的限制：由于一次測(cè)序反應(yīng)尚不能超過(guò)1Kb，效率低而不被大規(guī)模采用。目前測(cè)序中心的主要策略：以大片段克隆建立插入片段約10Kb左右的質(zhì)粒亞文庫(kù)，再隨機(jī)挑選質(zhì)粒單克隆分別測(cè)序，再以電腦程序進(jìn)行裝配。第69頁(yè)/共75頁(yè)使用Sequation自動(dòng)化測(cè)序儀：一天能進(jìn)行2萬(wàn)個(gè)測(cè)序反應(yīng)。技術(shù)核心主要為Sanger等“酶促末端終止法”+聚丙烯酰胺電泳+掃描隧道電鏡。最有前途：DNA芯片（DNA距陣）——思路類似于“寡核苷酸反向雜交法”；目前在晶體上以“光刻法”直接合成高密度的可控制