分子生物學(xué)轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加工

分子生物學(xué)轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加工第1頁/共155頁主要內(nèi)容轉(zhuǎn)錄概述原核生物RNA聚合酶原核生物轉(zhuǎn)錄過程真核生物轉(zhuǎn)錄特點真核生物基因的啟動子及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的組裝第2頁/共155頁轉(zhuǎn)錄后加工rRNA前體的加工tRNA前體的加工mRNA前體的加工RNA的自我剪接真核mRNA前體的剪接真核mRNA前體的選擇性剪接RNA的編輯主要內(nèi)容第3頁/共155頁transcription第4頁/共155頁（一）概述以DNA為模板合成RNA的過程。第5頁/共155頁轉(zhuǎn)錄和DNA復(fù)制的區(qū)別第6頁/共155頁Template(模板)模板鏈(templatestrand)：反義鏈(anti-sensestrand)非模板鏈(non-templatestrand):編碼鏈(codingstrand),有意義鏈(sensestrand)

第7頁/共155頁differentgenesmayusedifferentstrandsastemplate第8頁/共155頁（二）原核生物RNA聚合酶E.coliRNA聚合酶全酶(holoenzyme)：

α2ββ’σ核心酶(coreenzyme)：

α2ββ’DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶DNAdependentRNApolymerase(DDRP)β’ααβσcoreenzyme細菌中單一類型的RNA聚合酶負責合成所有的RNA。第9頁/共155頁利用SDS從E.coliRNA聚合酶中分離各個亞基第10頁/共155頁亞基基因分子量(kD)數(shù)目功能αrpoA402酶的裝配，與啟動子上游元件及活化因子結(jié)合βrpoB1501結(jié)合底物，催化磷酸二脂鍵形成β’rpoC1601結(jié)合DNA模板σrpoD32-901識別啟動子，促進轉(zhuǎn)錄起始ω9未知第11頁/共155頁第12頁/共155頁第13頁/共155頁σ因子的結(jié)構(gòu)σ70因子的一級結(jié)構(gòu)第14頁/共155頁第15頁/共155頁σ因子與啟動子的特異性相互作用第16頁/共155頁E.coli與枯草桿菌各的σ因子同源區(qū)第17頁/共155頁第18頁/共155頁結(jié)合核心酶后第19頁/共155頁第20頁/共155頁（三）轉(zhuǎn)錄過程promoterterminatorStartpoint+10+20downstream+1upstream-35-10–1transcribedregion第21頁/共155頁1.templaterecognition（模板的識別）2.Initiation(起始)3.elongation(延伸)4.termination（終止）第22頁/共155頁原核生物轉(zhuǎn)錄過程第23頁/共155頁啟動子（promoter）：RNA聚合酶識別，結(jié)合并開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。模板的識別第24頁/共155頁轉(zhuǎn)錄起始位點-35序列-10序列TTGACATATAAT五種不同啟動子的共同順序箭頭表示突變，向上表示增加轉(zhuǎn)錄水平，向下表示降低轉(zhuǎn)錄水平第25頁/共155頁提供RNA聚合酶識別信號有助于DNA局部雙鏈解開第26頁/共155頁σ因子對RNA聚合酶與DNA結(jié)合的影響σ因子使RNApol特異性的識別啟動子第27頁/共155頁σ因子的更替可控制轉(zhuǎn)錄起始第28頁/共155頁第29頁/共155頁轉(zhuǎn)錄的起始第30頁/共155頁RNA鏈的合成方向5′→3′轉(zhuǎn)錄的延伸第31頁/共155頁σ循環(huán):RNA聚合酶與啟動子結(jié)合,使DNA局部熔解,當轉(zhuǎn)錄延伸時,σ因子與核心酶分離,與其它新的核心酶結(jié)合,起始新的轉(zhuǎn)錄事件.第32頁/共155頁轉(zhuǎn)錄的終止終止子（terminator）：提供終止信號的DNA序列。第33頁/共155頁E.coli有兩類不依賴ρ因子的終止子:

依賴于ρ因子的終止子第34頁/共155頁不依賴ρ因子的終止子:簡單終止子，又稱內(nèi)在終止子（Intrinsicterminator）轉(zhuǎn)錄終止不依賴任何輔助因子。而依靠轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成特殊的莖環(huán)二級結(jié)構(gòu)具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)第35頁/共155頁有莖環(huán)結(jié)構(gòu)，富含GC莖環(huán)結(jié)構(gòu)后有寡聚尿苷第36頁/共155頁第37頁/共155頁依賴ρ因子的終止子（rho-dependentterminators）第38頁/共155頁窮追(Hotpursuit)模型第39頁/共155頁通讀(read-through)：某些因子可使酶越過終止子繼續(xù)轉(zhuǎn)錄。抗終止因子(anti-terminationfactor)：引起抗終止作用的蛋白質(zhì)。常見于某些噬菌體的時序控制通讀第40頁/共155頁典型的真核細胞轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是單順反子mRNA（四）真核生物轉(zhuǎn)錄特點真核DNAPAPBPC轉(zhuǎn)錄mRNAABC原核DNAABCP轉(zhuǎn)錄mRNAABC第41頁/共155頁真核細胞轉(zhuǎn)錄和翻譯在時間上和空間上都是分開的，轉(zhuǎn)錄在細胞核，翻譯在細胞質(zhì)。

第42頁/共155頁真核細胞RNApol高度分工啟動子更復(fù)雜和更多樣性，不同的RNA聚合酶有不同的啟動子真核生物轉(zhuǎn)錄需要許多轉(zhuǎn)錄因子(transcriptionfactor,TF）的參與。真核基因DNA的順式作用元件比原核復(fù)雜得多真核生物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控以正調(diào)控為主。第43頁/共155頁轉(zhuǎn)錄因子（transcriptionfactors）Definition:

轉(zhuǎn)錄起始所需要的，而非RNA聚合酶本身組分的任何蛋白質(zhì)第44頁/共155頁Functions:BindingtoDNARecognizinganotherfactorRecognizingRNAPolIncorporatingintoinitiationcomplex轉(zhuǎn)錄因子（transcriptionfactors）第45頁/共155頁轉(zhuǎn)錄因子（transcriptionfactors）Classification：普遍性轉(zhuǎn)錄因子：使RNA聚合酶結(jié)合到啟動子上，形成前起始復(fù)合物。其作用相對較弱，僅在本底水平上支持轉(zhuǎn)錄并實施最小程度的調(diào)控。又稱通用因子轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子：通過與啟動子及增強子等調(diào)控元件結(jié)合而調(diào)控轉(zhuǎn)錄活性的蛋白因子包括上游因子和可誘導(dǎo)因子第46頁/共155頁是在所有啟動子的RNA合成中都是必需的。是能夠識別并結(jié)合轉(zhuǎn)錄起始位點上游的特異性短序列的DNA結(jié)合蛋白。普遍存在，且活性不被調(diào)控。在特定的時間或特定的組織被激活或合成，能控制轉(zhuǎn)錄在特定的時間和地點進行的一類因子。通用因子(Generalfactor)上游因子(Upstreamfactor)可誘導(dǎo)因子(Induciblefactor)轉(zhuǎn)錄因子（transcriptionfactors）第47頁/共155頁順式作用元件（Cis-actingelements）Definition:

指與基因表達調(diào)控相關(guān)、能夠被調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合的特異DNA序列。包括啟動子、增強子，負調(diào)控元件等第48頁/共155頁反式作用因子(Trans-actingfactors)Definition:

指真核細胞內(nèi)通過與順式作用元件相互作用而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。

第49頁/共155頁S1核酸酶圖譜技術(shù)引物延伸法測定轉(zhuǎn)錄起點的方法（五）真核生物基因轉(zhuǎn)錄起始的幾種研究方法第50頁/共155頁1.S1核酸酶圖譜技術(shù)5’mRNA3’3’5’S1探針5’3’3’5’S1核酸內(nèi)切酶水解變性電泳第51頁/共155頁5’mRNA3’3’5’S1探針5’mRNA3’3’5’逆轉(zhuǎn)錄延伸引物變性電泳2.引物延伸法第52頁/共155頁1.5’端缺失系列分析法:常用于測定哺乳動物基因調(diào)控區(qū)的上游邊界研究順式作用元件結(jié)構(gòu)的方法第53頁/共155頁5’端缺失系列分析法AB切割位點AB核酸外切酶CAB連接接頭ABCAB切割位點B和C報告基因連接報告基因載體轉(zhuǎn)化E.coli分離質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細胞通過報告基因產(chǎn)物的活性，以檢測基因活化與上游調(diào)控區(qū)片段的關(guān)系第54頁/共155頁2.接頭掃描突變法可以找出存在于基因轉(zhuǎn)錄起始位點和5’端邊界之間的所有調(diào)控元件方法的基礎(chǔ)是構(gòu)建一系列序列重疊的調(diào)控區(qū)突變體，每個突變體內(nèi)各有一個短序列的核苷酸序列被打亂，然后分別轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細胞，或微量注入爪蟾卵母細胞，并分析它們對報告基因的影響第55頁/共155頁接頭掃描突變法機制第56頁/共155頁皰疹病毒胸苷激酶基因啟動子的連接掃描突變第57頁/共155頁（六）真核生物RNA聚合酶對α-鵝膏蕈堿的敏感性

酶的種類

中等敏感

RNA聚合酶III

敏感

RNA聚合酶II

不敏感

RNA聚合酶I

1.真核細胞的三類RNA聚合酶第58頁/共155頁α-鵝膏蕈堿的結(jié)構(gòu)鬼筆鵝膏菌是一種能產(chǎn)生α-鵝膏蕈堿的毒磨第59頁/共155頁RNA聚合酶對α-鵝膏蕈堿的敏感性第60頁/共155頁（核仁）（核質(zhì)）U6snRNA,7SLRNA,7SKRNA第61頁/共155頁老鼠肝臟細胞三類RNA聚合酶在離子交換層析中的分離RNA聚合酶I定位于核仁RNA聚合酶II和III定位于核質(zhì)

第62頁/共155頁EukaryoticRNApolIIhas>10subunits2.RNA聚合酶II第63頁/共155頁酵母RNA聚合酶II有12個亞基核心亞基：Rpb1、Rpb2和Rpb3共同亞基：

Rpb5、6、8、12存在于所有三類RNA聚合酶中非必要亞基：Rpb4、7第64頁/共155頁RNA聚合酶II最大亞基的異質(zhì)性CTD:

carboxylterminaldomain（C末端結(jié)構(gòu)域）Aminoacidsequence:

—Tyr—Ser—Pro—Thr—Ser—Pro—Ser—TargetforkinaseFunction:triggerinitiation第65頁/共155頁老鼠漿細胞RNApolII部分亞基結(jié)構(gòu)o、a、b是最大亞基的三種形式與酵母的RNApolII的Rpb1相對應(yīng)c是與酵母的Rpb2相對應(yīng)第66頁/共155頁RNApolII最大亞基不同形式間的相互關(guān)系IIa是CTD未被磷酸化的形式，主要負責轉(zhuǎn)錄的起始IIo是CTD被磷酸化的形式，主要負責轉(zhuǎn)錄的延伸IIb是被蛋白酶消化而失去CTD的形式第67頁/共155頁thecrystalstructureofRNApolymeraseIIfromyeast第68頁/共155頁（七）真核生物基因的啟動子及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的組裝類型I啟動子類型II啟動子類型III啟動子第69頁/共155頁類型II啟動子基本啟動子(basalpromotor)轉(zhuǎn)錄起始位點(initiationsite,Inr)上游元件(upstreamelements)下游元件(downstreamelements)核心啟動子(corepromotor)啟動子近側(cè)序列元件上游元件下游元件第70頁/共155頁序列名稱位置序列反式作用因子TATA-box

-25~–30TATAAAA

TBP作用是確定精確的轉(zhuǎn)錄起始位點，而不起調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄效率的功能基本啟動子(basalpromotor)第71頁/共155頁序列名稱位置序列反式作用因子CCAAT-box

-75~-80GGCCAATCT

CTF、C/EBPGC-box

-90GGGCGG

sp1上游元件(upstreamelements)常表現(xiàn)出細胞類型特異性，功能主要是提高轉(zhuǎn)錄的效率和特異性第72頁/共155頁第73頁/共155頁類型II啟動子在轉(zhuǎn)錄起始位點周圍有保守的序列，是最適表達所需要的。共同序列為PyPyANT（Py為嘧啶，N為任意堿基）轉(zhuǎn)錄起始位點(initiationsite,Inr)第74頁/共155頁Howdoesapre-initiationcomplexform?第75頁/共155頁TBP：特異性地結(jié)合TATAboxTAFⅡ：多亞基，是各種轉(zhuǎn)錄因子的靶位點FunctionsofTFⅡXTFⅡDTBP(TATA-bindingprotein)（TATA框結(jié)合蛋白）TAFⅡ(TBP-associatedfactors)(TBP偶聯(lián)因子)(8-10)X=A,B,D,E,F,H…第76頁/共155頁formationofplatform第77頁/共155頁第78頁/共155頁TFⅡA:

激活TBP，促進TFⅡD結(jié)合于TATAboxTFⅡB:結(jié)合于TFⅡD-DNA上，確定轉(zhuǎn)錄起始位點，在TFⅡF協(xié)同下募集RNApolⅡTFⅡF:與RNApolⅡ結(jié)合，抑制RNApolⅡ與DNA的非特異性結(jié)合TFⅡH：ATPase,helicase，kinaseTFⅡE：促進TFⅡH的激酶活性FunctionsofTFⅡX第79頁/共155頁Assemblyofpre-initiationcomplex(PIC)轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物第80頁/共155頁DABPolF復(fù)合物形成的模型聚合酶是結(jié)合在TFⅡD，A和B結(jié)合位點（TATAbox）下游的DNA上第81頁/共155頁RNAPolⅡisactivatedbyCTDphosphorylationCTD磷酸化后，使CTD中羥基電荷和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，影響它與TBP結(jié)合的穩(wěn)定性，使聚合酶從啟動子上脫離第82頁/共155頁TFⅡDTFⅡFRNAPolⅡTFⅡHPiDNARNATFⅡBTFⅡA第83頁/共155頁通用轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄起始、啟動子清除、延伸的模型a.TBP或TFⅡD，同B、F及聚合酶II形成最基本的起始復(fù)合物添加TFⅡE和H，水解ATP使DNA在起始區(qū)解鏈，CTD部分磷酸化，產(chǎn)生流產(chǎn)轉(zhuǎn)錄物，很快停止。b.隨著ATP提供能量，TFⅡH使DNA進一步解螺旋并使啟動子清空c.CTD進一步磷酸化,NTP不斷添加,延伸復(fù)合物不斷進行RNA的延伸TBP和TFⅡDB仍留在啟動子上，延伸不需要TFⅡE和H，從延伸復(fù)合物解離下來第84頁/共155頁TFIID中包括至少8種TBP偶聯(lián)因子,分子量為30—250kD,分別命名為TAFⅡ-30～250TAFⅡ150

識別起始子(1nr)序列TAF是基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的輔助因子，為各種調(diào)控因子提供作用的靶位點它的作用是將上游調(diào)控區(qū)和遠端調(diào)控區(qū)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與PIC聯(lián)系在一起，而介導(dǎo)各種反式作用因子對基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。FunctionsofTAF第85頁/共155頁來自克隆基因的產(chǎn)物的果蠅TFIID在體外整合的結(jié)構(gòu)圖第86頁/共155頁果蠅、人和酵母TAFs之間的關(guān)系第87頁/共155頁缺乏TATA框的啟動子含有其他元件包括Inr和下游元件。TAFII250和TAFII150能結(jié)合與這些元件，因而保證了TFIID結(jié)合與啟動子?；蛘咛禺愋哉{(diào)控因子結(jié)合與上游啟動子元件（UPE），這些特異性調(diào)控因子又同一個或數(shù)個TAFII相互作用，把TFIID錨定于啟動子上。對缺乏TATA框啟動子的起始第88頁/共155頁TBP與含有TATA框或不含TATA框的啟動子的相互作用模型第89頁/共155頁許多激活因子通過與TAFII相互作用激活起始裝置NTF-1能結(jié)合于TAFII-150Sp1與TAFII-110結(jié)合TAFII介導(dǎo)各種激活因子的作用第90頁/共155頁真核生物基因轉(zhuǎn)錄受激活因子增強的模型a.最小的TBP/TAF復(fù)合物不能支持激活b.兩種不同的三聚體復(fù)合物支持Gal4-NTF1的激活作用，但不能支持Sp1的激活c.包含有TAFII-100的四聚體復(fù)合物能介導(dǎo)Sp1的激活作用d.完整的TFIID能支持各種激活因子的作用TAFII介導(dǎo)各種激活因子的作用第91頁/共155頁類型I啟動子上游控制元件(Upstreamcontrolelement，UCE)核心啟動子CorepromoterPromoter第92頁/共155頁transcribedregion+1-45+20CorepromoterUCE-180-107第93頁/共155頁CorepromoterUCErRNA的兩個元件Tjian及其同事用接頭分區(qū)突變法研究人類rRNA基因，結(jié)果顯示UCE是最佳轉(zhuǎn)錄所必需的，但本底水平的轉(zhuǎn)錄不一定需要UCE的參與，而核心元件是轉(zhuǎn)錄所必需的第94頁/共155頁Tjian及其同事用接頭分區(qū)突變法研究人類rRNA基因的UCE和核心元件間插入或缺失不同長度的DNA序列，證實兩個元件間的距離對轉(zhuǎn)錄起始也是非常重要的。兩者之間插入或缺失堿基對，啟動子強度將減弱，而且缺失比插入更敏感。rRNA的兩個元件間的距離對啟動子強度的影響第95頁/共155頁UBFSL-1(Selectivityfactor1)Trans-factors(Upstreambindingfactor)UBF：能結(jié)合于UCE和CorepromoterSL-1:由TBP(TATA-bindingprotein)和3種TAFI組成SL-1本身不能結(jié)合于啟動子，但能同RNApol結(jié)合SL-1：使RNApolI正確的定位在起始位點第96頁/共155頁RNA聚合酶I的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物第97頁/共155頁第98頁/共155頁UCECorepromoterUBFUBFRNAPOLTAFITAFITAFITBPRNA聚合酶I的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的裝配第99頁/共155頁類型III啟動子基因內(nèi)啟動子：基因外啟動子:基因內(nèi)I型啟動子：由被中間元件分開的A盒和C盒組成5SrRNA基因基因內(nèi)II型啟動子：由被中間元件分開的A盒和B盒組成tRNA基因U6snRNA基因，7SKRNA基因類似類型II啟動子，有TATA框，能與含TBP的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合混合啟動子：海膽硒代半胱氨酸t(yī)RNA(ser)sec基因第100頁/共155頁ThreetypesofpromotersforRNApolymeraseIII第101頁/共155頁BydeletionInternalpromoterof5srRNAgene:+55~+80第102頁/共155頁3’端序列缺失對5SrRNA基因轉(zhuǎn)錄的影響a.Brown及同事對爪蟾5SrRNA基因3’端序列進行缺失，于體外進行轉(zhuǎn)錄。3’端序列缺失但沒越過啟動子序列，仍能轉(zhuǎn)錄，只是產(chǎn)物比全長rRNA短，轉(zhuǎn)錄事件的發(fā)生表明啟動子是完整的，3’端序列缺失到啟動子序列，轉(zhuǎn)錄終止b.只有當3’端序列缺失延伸到＋80位時，才無轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的合成第103頁/共155頁transcriptionfactorsforRNAPolⅢInitiationfactorsAssemblyfactorsTFⅢBTFⅢATFⅢCTBP

2pr第104頁/共155頁RNApolⅢ的轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的裝配tRNA基因內(nèi)啟動子第105頁/共155頁BetweenSL1、TFⅢBandTFⅡDFactorComponentsFunctionsRNAPolSL1TBP&3pr本身不結(jié)合DNA，使RNApol正確定位于起始位點ⅠTFⅢBTBP&2prⅢTFⅡDTBP&10-12pr特異性地結(jié)合TATAboxⅡ第106頁/共155頁1.轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物的裝配都是由能識別啟動子內(nèi)特異性位點的裝配因子開始的。在DNA序列上，它吸納、招募PIC的其他組分。轉(zhuǎn)錄起始的一般規(guī)律第107頁/共155頁3種聚合酶對不含TATAbox的啟動子起始前復(fù)合物的識別模型在I,II,III類啟動子上，最先結(jié)合的組裝因子分別是UBF，SP1，TFIIIC，隨后結(jié)合含TBP的另一因子分別是SL1，TFIID和TFIIIB。對I,III類啟動子而言足以結(jié)合聚合酶起始轉(zhuǎn)錄，但II類啟動子還需要更多的通用因子參與轉(zhuǎn)錄。第108頁/共155頁2.TBP在所有各種已知類型的真核啟動子中起組織作用3.TBP的特異性由與它偶聯(lián)的TAFs控制。TBP攜帶有某一套TAF，它就會在形形色色啟動子中結(jié)合于某一個啟動子位點第109頁/共155頁post-transcriptionalprocessing第110頁/共155頁主要內(nèi)容rRNA前體的加工(自學(xué))tRNA前體的加工(自學(xué))mRNA前體的加工RNA的自我剪接真核mRNA前體的剪接真核mRNA前體的選擇性剪接RNA的編輯第111頁/共155頁（一）rRNA前體的加工原核細胞有3種rRNA：16S、23S和5SrRNA真核細胞有4種rRNA：28S、18S、5.8S和5SrRNA第112頁/共155頁三種rRNA是一個轉(zhuǎn)錄單位，一起轉(zhuǎn)錄的原核生物RNaseⅢⅢⅢⅢEE三種rRNA是一個轉(zhuǎn)錄單位，一起轉(zhuǎn)錄的第113頁/共155頁真核生物4種rRNA，是兩個轉(zhuǎn)錄單位，18S、5.8S和28SrRNA的前體是45S，是一個轉(zhuǎn)錄單位，5SrRNA是單獨的一個轉(zhuǎn)錄單位。核仁是其轉(zhuǎn)錄、加工和裝配成核糖體的場所第114頁/共155頁第115頁/共155頁40S亞基60S亞基第116頁/共155頁核酸內(nèi)切酶在兩端切斷，E.coliRNAaseP是5’成熟酶核酸外切酶:RNAaseD從3’端逐個切去附加的順序3’端加上-CCA-OH核苷酸的修飾（二）tRNA前體的加工原核生物第117頁/共155頁tRNA核苷酰轉(zhuǎn)移酶CTP、ATP3’端加上-CCA-OH第118頁/共155頁（1）甲基化如：AAm核苷酸的修飾（1）（1）（3）（2）（4）（2）還原反應(yīng)如：UDHU（3）核苷內(nèi)的轉(zhuǎn)位反應(yīng)如：Uψ（4）脫氨反應(yīng)如：AI第119頁/共155頁第一步:核酸內(nèi)切酶切除插入序列，不需ATP；第二步:RNA連接酶連接，需要ATP。核tRNA的酶促拼接第120頁/共155頁第121頁/共155頁由RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，加工與原核相似，但3’端的CCA都是后加的，還有2’-O-甲基核糖。真核生物第122頁/共155頁（三）mRNA前體的加工細菌多數(shù)不用加工，轉(zhuǎn)錄與翻譯是偶聯(lián)的。也有少數(shù)多順反子信使RNA必須由內(nèi)切酶切成較小的單位，然后翻譯。原核生物第123頁/共155頁初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：hnRNAs（heterogeneousnuclearRNAs，核內(nèi)不均一RNA），是mRNA的前體（pre-mRNA）hnRNA的物理結(jié)構(gòu)是核糖核蛋白

(hnRNP

heterogeneousnuclearribonucleoproteins)真核生物第124頁/共155頁mRNA前體的剪接信號內(nèi)含子相同的開頭和結(jié)尾5’GU…..AG3’內(nèi)部有個保守的A參與形成分支剪接中間物3’剪接位點AG前有一個嘧啶復(fù)含區(qū)（PPT）第125頁/共155頁雞卵清蛋白基因及其轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工雞卵清蛋白基因5’端加帽子3’端加尾剪接（splicing）成熟的mRNA第126頁/共155頁（四）RNA的自我剪接(Self-splicing)Ⅰ型內(nèi)含子（groupⅠ

intron）的自我剪接Ⅱ型內(nèi)含子（groupⅡ

intron）的自我剪接第127頁/共155頁Ⅰ型內(nèi)含子的自我剪接第128頁/共155頁GroupⅠThestructureofgroupⅠintrons第129頁/共155頁Ⅱ型內(nèi)含子的自我剪接OP5’POH3’OPHOA2’外顯子I外顯子IIPOAOHOH5’POH3’OPPOAO5’POH3’P第130頁/共155頁活性中心Ⅱ型內(nèi)含子的二級結(jié)構(gòu)及活性中心第131頁/共155頁SplicingreleasesmitochondrialgroupIIintronsintheformoflariats(套索結(jié)構(gòu)).第132頁/共155頁Definition:

泛指具有催化功能的RNA的分子核酶（ribozyme）第133頁/共155頁（五）真核mRNA前體的剪接第134頁/共155頁Splicingmechanism:similartogroupⅡintronStructureofsnRNAs:similartogroupⅡintron第135頁/共155頁Splicesome（剪接體）snRNAsproteinssnRNA:smallnuclearRNA(核內(nèi)小分子RNA)snRNP:

smallnuclearribonucleoprotein(小分子核內(nèi)核糖核蛋白):U1、U2、U4、U5、U6snRNAsnRNPshnRNAsOtherproteins第136頁/共155頁Spliceosomesareellipsoidal(橢圓形)

particleswithseveraldiscreteregions.第137頁/共155頁Pre-mRNAGroupⅡ第138頁/共155頁Mechanismofsplicing第139頁/共155頁第140頁/共155頁第141頁