血清中葡萄糖濃度

血清中葡萄糖濃度第一頁，共十二頁，2022年，8月28日問題：血清中葡萄糖濃度測定的方法有很多，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，這些方法分別利用了葡萄糖的那些性質(zhì)？如何排除血清內(nèi)其他物質(zhì)的干擾，使所測血清葡萄糖濃度更準(zhǔn)確？葡萄糖氧化酶法測血糖的原理是什么？本實(shí)驗(yàn)為何需要用到兩種酶？與其他方法相比，本實(shí)驗(yàn)有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？第二頁，共十二頁，2022年，8月28日知識窗酶法分析是指用酶作為工具定量測定某種物質(zhì)含量的分析方法。定量分析的目標(biāo)可以是酶的底物，輔酶，也可以是酶的激活劑或抑制劑。第三頁，共十二頁，2022年，8月28日酶法分析的主要方法：

單酶反應(yīng)定量法和偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法單酶反應(yīng)定量法：指用一種酶為工具酶定量測定某種物質(zhì)的方法。偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法：當(dāng)單酶反應(yīng)底物或產(chǎn)物反應(yīng)底物或產(chǎn)物噢物理化學(xué)手段無法區(qū)分時(shí)，還可以借助另一種酶作為指示酶，通過歐聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行定量分析。第四頁，共十二頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆彰阜y定血清葡萄糖濃度的原理。掌握血糖變化的臨床生理意義第五頁，共十二頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理：血清葡萄糖是用以過氧化物酶作指示酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法測定的。葡萄糖氧化酶利用氧將葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同時(shí)釋放出過氧化氫。過氧化物酶催化過氧化氫氧化色素原，并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。葡萄糖+O2+H2O

GOD葡萄糖酸+2H2O22H2O2+4-氨基安替比林+苯酚POD

紅色醌類化合物第六頁，共十二頁，2022年，8月28日操作步驟：

取三只試管按表操作

項(xiàng)目空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管血清（ml）

————0.020葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）——0.020——蒸餾水（ml）0.020————酶-酚混合試劑（ml）3.003.003.00混勻，置于37度水浴中，保溫25min,在波長510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管的吸光度第七頁，共十二頁，2022年，8月28日計(jì)算公式：

A測定血清葡萄糖濃度=×5mmol／L

A標(biāo)準(zhǔn)參考值：空腹血清葡萄糖濃度:3.89～6.11mmol／L

第八頁，共十二頁，2022年，8月28日注意事項(xiàng)：葡萄糖氧化酶對β-D-葡萄糖高度特異，葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應(yīng)。此法可直接測定腦脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于測定尿液葡萄糖含量。因紅細(xì)胞的酵解將導(dǎo)致測定結(jié)果偏低，建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑抑制葡萄糖酵解。嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先之輩無蛋白血濾液，然后再進(jìn)行測定。第九頁，共十二頁，2022年，8月28日臨床意義：生理性高血糖：攝入高糖食物，情緒緊張病理性高血糖：①糖尿?、趦?nèi)分泌腺功能障礙③顱內(nèi)壓增高④脫水引起高血糖生理性低血糖：見于饑餓和劇烈運(yùn)動病理性低血糖：特發(fā)性功能性低血糖，依次是藥源性，肝源性和胰島素瘤等。第十頁，共十二頁，2022年，8月28日思考題：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖儲存液與應(yīng)用液中都含有苯甲酸鈉，苯甲酸鈉起什么作用？列舉幾種血清葡萄糖定量測定的方法和原理。本實(shí)驗(yàn)原理為酶促化學(xué)反應(yīng)，為何未加終止劑終止酶的反應(yīng)？本實(shí)驗(yàn)涉及顯色反應(yīng)，該反應(yīng)與血清堿性磷酸酶活力測定中的顯色