有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座

主要內(nèi)容1課題背景介紹1.1研究目標(biāo)和意義1.2技術(shù)路線(xiàn)2工作進(jìn)度匯報(bào)2.1有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響2.2重金屬對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響2.3有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子存活率影響2.4重金屬對(duì)泥鰍精子存活率影響2.5有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子細(xì)胞SOD酶系統(tǒng)影響2.6重金屬對(duì)泥鰍精子細(xì)胞SOD酶系統(tǒng)影響2.7有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化作用2.8重金屬對(duì)泥鰍精子細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化作用2.9泥鰍精子在水環(huán)境檢測(cè)中應(yīng)用及相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)篩選和優(yōu)化2.10階段性結(jié)果展示3出現(xiàn)問(wèn)題及辦法4下階段工作計(jì)劃有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第1頁(yè)1.1研究目標(biāo)和意義

當(dāng)前，生態(tài)問(wèn)題日趨突出。包含有機(jī)磷農(nóng)藥和重金屬在內(nèi)外源性污染物大量排入水體，對(duì)水生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生重大影響。同時(shí)，各種污染物經(jīng)過(guò)食物鏈及生物富集、擴(kuò)大作用，危脅著人類(lèi)健康。1背景介紹水體污染富營(yíng)養(yǎng)化水生物死亡疾病有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第2頁(yè)1.1研究目標(biāo)和意義大部分淡水魚(yú)營(yíng)體外受精，生殖細(xì)胞直接暴露在污染物中，易受污染物傷害。精子細(xì)胞表面缺乏類(lèi)似卵膜保護(hù)層，對(duì)毒物更敏感。

魚(yú)類(lèi)終生生活在水中，水體一旦受到污染，魚(yú)類(lèi)受到長(zhǎng)久迫害。魚(yú)類(lèi)生殖研究目標(biāo)：了解銅、鐵等重金屬對(duì)泥鰍精子細(xì)胞毒性了解敵敵畏、馬拉硫磷、辛硫磷和甲拌磷等有機(jī)磷對(duì)泥鰍細(xì)胞毒性探討泥鰍精子在水環(huán)境檢測(cè)中應(yīng)用研究意義：為銅、鐵離子在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用提供理論依據(jù)。為有機(jī)磷和重金屬毒性評(píng)價(jià)補(bǔ)充基礎(chǔ)資料。為魚(yú)精子毒理學(xué)在環(huán)境檢測(cè)中應(yīng)用補(bǔ)充基礎(chǔ)資料，以完善相關(guān)指標(biāo)體系。1背景介紹有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第3頁(yè)1.2技術(shù)路線(xiàn)1背景介紹喂養(yǎng)魚(yú)取精巢精子懸液暴露酶系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)能力活性脂質(zhì)過(guò)氧化運(yùn)動(dòng)率運(yùn)動(dòng)時(shí)間相對(duì)速度運(yùn)動(dòng)軌跡SOD活性MDA積累量重金屬有機(jī)磷農(nóng)藥存活率細(xì)胞損傷檢測(cè)指標(biāo)藥品處理取材細(xì)胞計(jì)數(shù)法精子運(yùn)動(dòng)計(jì)算機(jī)輔助分析（CASA）羥胺法TBA法檢測(cè)方法污染物生物檢測(cè)體系指標(biāo)篩選和優(yōu)化精子懸液暴露有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第4頁(yè)2.2重金屬對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響2進(jìn)度匯報(bào)Fe3+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)百分?jǐn)?shù)影響/%濃度/mM0h1h2h4h對(duì)照95±2.8394±4.0894±5.4890±5.480.0193±2.6793±4.1889±4.9290±3.760.0383±6.07＊,＃83±9.35＊,＃80±11.40＊,＃71±7.48＊,＃0.0674±7.36＊,＃73±6.32＊,＃75±10.00＊,＃71±12.42＊,＃0.173±10.61＊,＃50±4.47＊,＃48±4.47＊,＃48±5.24＊,＃0.30±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃Fe3+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)時(shí)間影響/s濃度/mM0h1h2h4h對(duì)照330±25.19315±31.46305±39.87285±31.46＃0.01328±30.47295±35.07＃290±30.98＃280±30.98＃0.03249±27.19＊,＃245±39.87＊,＃240±30.98＊,＃223±29.28＊,＃0.06228±38.44＊,＃230±24.50＊,＃222±26.84＊,＃215±29.50＊,＃0.1203±26.41＊,＃160±30.99＊,＃150±18.98＊,＃155±29.50＊,＃0.30±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃0±0＊,＃精子被激活后，伴隨Fe3+濃度增加和時(shí)間延長(zhǎng)，精子運(yùn)動(dòng)百分?jǐn)?shù)顯著降低有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第5頁(yè)

Fe2+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)百分?jǐn)?shù)影響/%濃度/mM0h1h2h4h對(duì)照95±1.0094±4.8695±1.0090±5.48＃0.0393±1.0094±2.4493±2.7489±5.85＃0.0692±6.5292±4.0890±2.89＊,＃86±3.76＊,＃0.391±4.9286±4.43＊,＃84±4.76＊,＃65±10.00＊,＃1.566±18.98＊50±11.94＊,＃33±5.16＊,＃23±17.29＊,＃7.510±1.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃Fe2+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)時(shí)間影響/Sec.濃度/mM0h1h2h4h對(duì)照330±15.00325±29.50318±32.06295±20.49﹟0.03306±39.11285±22.45＊,＃280±36.33＊,＃270±18.97＊,＃0.06270±21.21＊265±35.07＊,＃240±37.75＊,＃258±27.52＊,＃0.3255±40.25＊233±34.02＊,＃238±37.18＊,＃185±30.98＊,＃1.5165±31.22＊159±23.75＊,＃88±17.54＊,＃63±25.84＊,＃7.511±1.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃0±0.00＊,＃有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第6頁(yè)Cu2+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第7頁(yè)敵敵畏對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第8頁(yè)2.1有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響2進(jìn)度匯報(bào)馬拉硫磷對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第9頁(yè)辛硫磷對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第10頁(yè)2.3有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子存活率影響2進(jìn)度匯報(bào)敵敵畏2h在有機(jī)磷農(nóng)藥暴露中，泥鰍精子運(yùn)動(dòng)能力與死亡率之間關(guān)系馬拉硫磷辛硫磷甲拌磷泥鰍精子細(xì)胞生理情況又會(huì)出現(xiàn)怎樣改變？有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第11頁(yè)2.4重金屬對(duì)泥鰍精子存活率影響2進(jìn)度匯報(bào)氯化鐵2h硫酸亞鐵硫酸銅氯化銅在重金屬暴露中，泥鰍精子運(yùn)動(dòng)能力與死亡率之間關(guān)系泥鰍精子細(xì)胞生理情況又會(huì)出現(xiàn)怎樣改變？有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第12頁(yè)2.5有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子細(xì)胞SOD

酶系統(tǒng)影響2進(jìn)度匯報(bào)敵敵畏目標(biāo)：檢測(cè)不一樣濃度有機(jī)磷暴露泥鰍精子1h對(duì)SOD活力影響馬拉硫磷辛硫磷意義：超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)機(jī)體氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)主要作用。此酶能去除超氧陰離子自由基（O2-）,保護(hù)細(xì)胞免受損傷原理：經(jīng)過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑作用下呈顯紫紅色，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)其吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含有SOD時(shí)，則對(duì)超氧陰離子自由基有專(zhuān)一性抑制作用，使形成亞硝酸鹽降低，比色時(shí)測(cè)定管吸光值低于對(duì)照管吸光度值。甲拌磷機(jī)體經(jīng)過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中不飽和脂肪酸（Polyunsaturatedfallyacid,PUFA）,引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不但把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，即非自由基性脂質(zhì)分解產(chǎn)物，而且經(jīng)過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)放大活性氧作用。所以，初始一個(gè)活性氧能造成很大脂類(lèi)分解產(chǎn)物形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無(wú)害，另一些則能引發(fā)細(xì)胞代謝及功效障礙，甚至死亡。有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第13頁(yè)2.6重金屬對(duì)泥鰍精子細(xì)胞SOD

酶系統(tǒng)影響2進(jìn)度匯報(bào)氯化鐵目標(biāo)：檢測(cè)不一樣濃度重金屬暴露泥鰍精子1h對(duì)SOD活力影響硫酸銅氯化銅意義：超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)機(jī)體氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)主要作用。此酶能去除超氧陰離子自由基（O2-）,保護(hù)細(xì)胞免受損傷原理：經(jīng)過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑作用下呈顯紫紅色，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)其吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含有SOD時(shí)，則對(duì)超氧陰離子自由基有專(zhuān)一性抑制作用，使形成亞硝酸鹽降低，比色時(shí)測(cè)定管吸光值低于對(duì)照管吸光度值。機(jī)體經(jīng)過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中不飽和脂肪酸（Polyunsaturatedfallyacid,PUFA）,引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不但把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，即非自由基性脂質(zhì)分解產(chǎn)物，而且經(jīng)過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)放大活性氧作用。所以，初始一個(gè)活性氧能造成很大脂類(lèi)分解產(chǎn)物形成，這些分解產(chǎn)物中，一些是無(wú)害，另一些則能引發(fā)細(xì)胞代謝及功效障礙，甚至死亡。有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第14頁(yè)2.7有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子細(xì)胞

脂質(zhì)過(guò)氧化作用2進(jìn)度匯報(bào)敵敵畏目標(biāo)：檢測(cè)不一樣濃度有機(jī)磷暴露泥鰍精子1h正確脂質(zhì)過(guò)氧化程度。馬拉硫磷辛硫磷意義：脂質(zhì)過(guò)氧化作用形成脂質(zhì)過(guò)氧化物，如醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基或內(nèi)過(guò)氧基等，以及新氧自由基等。測(cè)試MDA量經(jīng)常反應(yīng)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度，間接反應(yīng)出細(xì)胞損傷程度。原理：過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中丙二醛可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。甲拌磷有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第15頁(yè)2.8重金屬對(duì)泥鰍精子細(xì)胞

脂質(zhì)過(guò)氧化作用2進(jìn)度匯報(bào)氯化鐵目標(biāo)：檢測(cè)不一樣濃度有機(jī)磷暴露泥鰍精子1h正確脂質(zhì)過(guò)氧化程度。硫酸銅氯化銅意義：脂質(zhì)過(guò)氧化作用形成脂質(zhì)過(guò)氧化物，如醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基或內(nèi)過(guò)氧基等，以及新氧自由基等。測(cè)試MDA量經(jīng)常反應(yīng)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度，間接反應(yīng)出細(xì)胞損傷程度。原理：過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中丙二醛可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收峰。有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第16頁(yè)2.9泥鰍精子在水環(huán)境檢測(cè)中應(yīng)用和相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)篩選和優(yōu)化2進(jìn)度匯報(bào)標(biāo)準(zhǔn)：可反應(yīng)污染物生物毒性操作簡(jiǎn)單、易于取得范圍：以上七個(gè)指標(biāo)方法：生物統(tǒng)計(jì)分析工具：SPSS16.0軟件結(jié)果：理想指標(biāo)體系有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第17頁(yè)2.9階段性結(jié)果展示2進(jìn)度匯報(bào)已接受需返修已發(fā)表：2篇

胡家會(huì)，張玉博，陳玉明，周蓉蓉.環(huán)境滲透壓影響硬骨魚(yú)精子運(yùn)動(dòng)開(kāi)啟研究進(jìn)展[J]，聊城大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），陳玉明，胡家會(huì)，盧少勇.利用泥鰍（MisgurnusAuguillicaudatus）精子快速檢測(cè)重金屬污染方法[].中國(guó)水環(huán)境污染控制與生態(tài)修復(fù)技術(shù)高級(jí)研討會(huì)，中國(guó)南昌，.11已接收：3篇陳玉明，陳杰，王曰文，胡家會(huì)*.Fe2+和Fe3+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)陳玉明，陳杰，王曰文，陳鳳梅，胡家會(huì)*.硫酸銅對(duì)雄性泥鰍生殖毒性研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展陳玉明，陳杰，王曰文，胡家會(huì)*,陳鳳梅.Fe2+對(duì)雄性泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)生殖毒性研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)

需返修：1篇陳玉明，胡家會(huì)*，陳杰，王曰文.Cu2+對(duì)泥鰍精子運(yùn)動(dòng)影響[J].四川動(dòng)物有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第18頁(yè)3出現(xiàn)問(wèn)題及辦法問(wèn)題CASA軟件測(cè)算速度與實(shí)際速度不統(tǒng)一采取重復(fù)凍融法細(xì)胞破碎效果不理想有機(jī)磷農(nóng)藥不輕易買(mǎi)到玫瑰無(wú)須鲃核型未取得理想中期分裂相辦法

采取相對(duì)速度

重復(fù)凍融結(jié)合超聲波處理

部分內(nèi)容由重金屬代替

擬不放入論文中3問(wèn)題辦法有機(jī)磷和重金屬對(duì)泥鰍子的細(xì)胞毒性專(zhuān)家講座第19頁(yè)4下階段工作計(jì)劃4工作計(jì)劃預(yù)期結(jié)果及其可行性分析完善和豐富學(xué)位論文中相關(guān)重金屬和有機(jī)磷對(duì)泥鰍精子細(xì)胞SOD酶系統(tǒng)和脂質(zhì)過(guò)氧化以及存活率方面內(nèi)容。

擬畢業(yè)前投稿一級(jí)核刊1-2篇