免疫組化結(jié)果判斷及常見問題的分析

當(dāng)前1頁，總共46頁。肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細(xì)胞強(qiáng)陽性，肝細(xì)胞呈不同層次陽性。當(dāng)前2頁，總共46頁。

panCK（AE1/AE3）在肝臟理想的染色，采用了熱修復(fù)。肝細(xì)胞膜、膽管強(qiáng)而清晰的著色。背景干凈。當(dāng)前3頁，總共46頁。一、特異性染色的判斷1.特定的定位

細(xì)胞陽性——根據(jù)靶抗原不同而呈現(xiàn)胞膜型、胞漿型或胞核型間質(zhì)陽性——表現(xiàn)為細(xì)胞外著色，局限性或彌散性2.染色的不均一性陽性細(xì)胞的染色分布不均，片狀或點(diǎn)狀散在分布染色強(qiáng)弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少3.排除人為造成的非特異性染色

切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細(xì)胞壞死。4.顆粒性顯色

DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均勻著色。當(dāng)前4頁，總共46頁。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化照片CK10CD44v6ER當(dāng)前5頁，總共46頁。當(dāng)前6頁，總共46頁。當(dāng)前7頁，總共46頁。當(dāng)前8頁，總共46頁。當(dāng)前9頁，總共46頁。當(dāng)前10頁，總共46頁。合格的免疫組化染色切片

是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提

不合格的免疫組化染色切片

容易導(dǎo)致誤判當(dāng)前11頁，總共46頁。C-erbB-2優(yōu)良中差當(dāng)前12頁，總共46頁。4321ER當(dāng)前13頁，總共46頁。子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)不足子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)良好

PR當(dāng)前14頁，總共46頁。編號陽性片待檢片陰性對照結(jié)論12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失誤，抗體失效非特異性著色陽性片不含靶抗原待檢片不含定位抗原待檢片含定位抗原二、染色結(jié)果的判斷當(dāng)前15頁，總共46頁。PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM陽性強(qiáng)度20×10視野下，隨機(jī)選取5個視野，測100個陽性細(xì)胞的平均光密度即為此片的陽性強(qiáng)度。三、結(jié)果分析當(dāng)前16頁，總共46頁。P53陽性細(xì)胞百分比計(jì)數(shù)100個瘤細(xì)胞，其中陽性細(xì)胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）當(dāng)前17頁，總共46頁。PCNABarnes法A：瘤細(xì)胞顯色有無及深淺0（不著色）1（淺黃色）2（棕黃色）3（棕褐色）B：顯色細(xì)胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）評分=A×B0分：陰性1~4分：弱陽性＞4分：強(qiáng)陽性當(dāng)前18頁，總共46頁。膠原染色陽性面積百分比40×10視野，選取5個視野，計(jì)算陽性區(qū)域面積占整個參考面積的百分率。當(dāng)前19頁，總共46頁。CD34Weidner法（MVD計(jì)數(shù)）孤立的棕黃色細(xì)胞族代表一條微血管。低倍鏡下找到組織內(nèi)密度最高區(qū)域。40×10視野下計(jì)數(shù)微血管數(shù)目。當(dāng)前20頁，總共46頁。K-rasVEGF當(dāng)前21頁，總共46頁。附：定量分析——圖象處理系統(tǒng)

1、圖象處理：利用儀器按照不同的目的進(jìn)行圖象的修正、變換、特征提取和測量。1）“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。2）“廣義”包括對圖象的結(jié)構(gòu)分析，提取特征進(jìn)行測量。

當(dāng)前22頁，總共46頁。2、圖象處理系統(tǒng)組成圖象輸入（顯微鏡、掃描儀）圖象處理運(yùn)算（病理圖文分析軟件）圖象、數(shù)據(jù)輸出

當(dāng)前23頁，總共46頁。

3、圖象處理系統(tǒng)功能

幾何形態(tài)學(xué)定量分析細(xì)胞核、漿的大小、面積、核漿比；細(xì)胞分布密度、個數(shù)；血管、腺體的面積、密度；間質(zhì)的面積

免疫組織化學(xué)分析按著色灰度分類，計(jì)算陽性、陰性細(xì)胞的面積含量DNA倍體分析計(jì)算正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞DNA含量，給出倍體參數(shù)、DNA參數(shù)分布直方圖

AgNOR分析顆粒分析：數(shù)目、大小、面積、比例

當(dāng)前24頁，總共46頁。當(dāng)前25頁，總共46頁。四、免疫組化異常著色及對策1.非特異性著色及其對策非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥當(dāng)前26頁，總共46頁。內(nèi)源性生物素—腎小管當(dāng)前27頁，總共46頁。內(nèi)源性生物素—淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺腺癌當(dāng)前28頁，總共46頁。蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內(nèi)紅細(xì)胞過氧化物酶顯色當(dāng)前29頁，總共46頁。嗜酸性粒細(xì)胞中細(xì)胞色素顯色當(dāng)前30頁，總共46頁。吞噬細(xì)胞內(nèi)

含鐵血黃素

當(dāng)前31頁，總共46頁。壞死組織著色：AE1/AE3當(dāng)前32頁，總共46頁。壞死組織著色當(dāng)前33頁，總共46頁。交叉反應(yīng)：乳腺ki-67組織細(xì)胞胞漿著色當(dāng)前34頁，總共46頁。黑色素瘤，細(xì)胞內(nèi)含黑色素，呈紫黑色，HE染色當(dāng)前35頁，總共46頁。灶狀著色：機(jī)械原因著色當(dāng)前36頁，總共46頁。CyclinD1套細(xì)胞淋巴瘤全片著色當(dāng)前37頁，總共46頁。全片著色當(dāng)前38頁，總共46頁。邊緣著色當(dāng)前39頁，總共46頁?！瓣庩柲槨敝?dāng)前40頁，總共46頁。氣泡當(dāng)前41頁，總共46頁。非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥非特異性著色及其對策當(dāng)前42頁，總共46頁。無信號片CD30當(dāng)前43頁，總共46頁。2.染色的假陰性及其對策染色假陰性原因?qū)Σ呓M織處理不當(dāng)（固定、浸蠟）改善條件，重取材一抗與二抗種屬連接錯誤確定抗體種屬無誤抗體失效不得使用過期的試劑盒顯色系統(tǒng)不相適配更換適配的顯色系統(tǒng)操作不當(dāng)，遺漏重要步驟嚴(yán)格遵守操作規(guī)程當(dāng)前44頁，總共46頁。無色或淺色片MCL理想的CD5著色。所有的瘤細(xì)胞都著色很強(qiáng)。散在的T細(xì)胞著色比瘤細(xì)胞深。MCL的CD5染色不足(一抗?jié)舛忍?。MCL瘤細(xì)胞幾乎都沒有著色。當(dāng)前4