新方法能力驗證確認(rèn)報告水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法HJ897-2017

新方法能力驗證確認(rèn)報告（水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法HJ897-2017）XXXX有限公司新項目方法驗證能力確認(rèn)報告水質(zhì)葉綠素a水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法HJ897-2017項目負(fù)責(zé)人:項目審核人:項目批準(zhǔn)人:批準(zhǔn)日期：HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告.方法依據(jù)及適用范圍本方法依據(jù)《水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法》（HJ897-2017）。本方法適用于適用于地表水中葉綠素a的測定。本方法測定丙酮提取液中葉綠素a的檢出限為0.04mg/L。當(dāng)取樣體積為200ml，丙酮提取液體積為10ml時，本方法的檢出限為2pg/L，測定下限為8pg/L。警告：丙酮對人體健康有一定危害，操作時應(yīng)在通風(fēng)櫥中進行，佩戴防護器具，避免接觸皮膚和衣物。.方法原理及干擾將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類，研磨破碎藻類細(xì)胞，用丙酮溶液提取葉綠素，離心分離后分別于750nm、664nm、647nm和630nm波長處測定提取液吸光度，根據(jù)公式計算水中葉綠素a的濃度。.主要儀器、設(shè)備及試劑除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的去離子水或蒸餾水。試劑和材料丙酮（CH3COCH3）。碳酸鎂（MgCO3）。丙酮溶液：9+1。HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告在900ml丙酮中加入100ml實驗用水。碳酸鎂懸濁液。稱取1.0g碳酸鎂，加入100ml實驗用水，攪拌成懸濁液（使用前充分搖勻）。玻璃纖維濾膜：直徑47mm,孔徑為0.45pm?0.7pm。主要儀器和設(shè)備分光光度計，配備10mm比色皿，1臺，型號：XXXX,編號：XXXXXXXX,檢定證書編號：XXXX,檢定有效期限：XXXX年XX月XX日。采樣瓶：500ml具磨口塞的棕色玻璃瓶。玻璃研缽。離心機，型號：XXXX,編號:XXXXXXXXo玻璃刻度離心管：15mlo針式濾器：0.45pm聚四氟乙烯有機相針式濾器。一般實驗室常用器皿和設(shè)備。.樣品的采集與制備樣品采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相關(guān)規(guī)定進行樣品的采集。樣品的采集一般使用有機玻璃采水器或其他適當(dāng)?shù)牟蓸悠鞑杉嫦?.5m樣品，湖泊、水庫根據(jù)需要可進行分層采樣或混合采樣，采樣體積為1L或500ml。如果樣品中含沉降性固體（如泥沙等），應(yīng)將樣品搖勻后倒入2L量筒，避光靜置30min,取水面下5cm樣品，轉(zhuǎn)移至采樣瓶。在每升樣品中加入1ml碳酸鎂懸濁液，以防止酸化引起色素溶解。HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告注：如果水深不足0.5m,在水深1/2處采集樣品，但不得混入水面漂浮物。樣品保存樣品采集后應(yīng)在0。。?4℃避光保存、運輸，24h內(nèi)運送至檢測實驗室過濾（若樣品24h內(nèi)不能送達(dá)檢測實驗室，應(yīng)現(xiàn)場過濾，濾膜避光冷凍運輸），樣品濾膜于-20℃避光保存，14d內(nèi)分析完畢。注：樣品采集后，如條件允許，宜盡快分析完畢。試樣的制備過濾在過濾裝置上裝好玻璃纖維濾膜。根據(jù)水體的營養(yǎng)狀態(tài)確定取樣體積，見表1,用量筒量取一定體積的混勻樣品，進行過濾，最后用少量蒸餾水沖洗濾器壁。過濾時負(fù)壓不超過50kPa,在樣品剛剛完全通過濾膜時結(jié)束抽濾，用鑷子將濾膜取出，將有樣品的一面對折，用濾紙吸干濾膜水分。注：僅當(dāng)富營養(yǎng)化水體的樣品無法通過玻璃纖維濾膜時，可采用離心法濃縮樣品，但轉(zhuǎn)移過程中應(yīng)保證提取效率，避免葉綠素a的損失及水分對丙酮溶液濃度的影響。表1參考過濾樣品體積營養(yǎng)狀態(tài)富營養(yǎng)中營養(yǎng)貧營養(yǎng)過濾體積（mL）100?200500?1000研磨將樣品濾膜放置于研磨裝置中，加入3ml?4ml丙酮溶液，研磨至糊狀。補加3ml?4ml丙酮溶液，繼續(xù)研磨，并重復(fù)1?2次，保證充分研磨5min以上。將完全破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至玻璃刻度離心管中，用丙酮溶液沖洗研缽及研磨杵，一并轉(zhuǎn)入離心管中，定容至10ml。注：葉綠素對光及酸性物質(zhì)敏感，實驗室光線應(yīng)盡量微弱，能進行分析操作即可，HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告所有器皿不能用酸浸泡或洗滌。浸泡提取將離心管中的研磨提取液充分振蕩混勻后，用鋁箔包好，放置于4℃避光浸泡提取2h以上，不超過24h。在浸泡過程中要顛倒搖勻2?3次。離心、將離心管放入離心機，以相對離心力1000Xg（轉(zhuǎn)速3000r/min?4000「何出）離心10min。然后用針式濾器過濾上清液得到葉綠素a的丙酮提取液（試樣）待測。空白試樣的制備用實驗用水按照與試樣的制備相同的步驟進行實驗室空白試樣的制備。.分析步驟試樣測定將試樣移至比色皿中，以丙酮溶液為參比溶液，于波長750nm、664nm、647nm、630nm處測量吸光度。注：750nm波長處的吸光度應(yīng)小于0.005,否則需重新用針式濾器過濾后測定。5.2空白試驗按照與試樣測定（5.1）相同的步驟進行實驗室空白試樣（4.4）的測定。.結(jié)果計算與表示結(jié)果計算試樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度（mg/L）,按照下式進行計算：勺=1"5x（%4—M。）-1.54x（X647-X75o）-0.08x（%。-X750）式中：p——試樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度，mg/L；HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告A664 試樣在664 nm波長下的吸光度值；A647 試樣在647 nm波長下的吸光度值；A630 試樣在630 nm波長下的吸光度值；A750 試樣在750 nm波長下的吸光度值。樣品中葉綠素a的質(zhì)量濃度(pg/L),按照下式進行計算::式中：p——樣品中葉綠素a的質(zhì)量濃度，pg/L；p1——試樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度，mg/L；V1——試樣的定容體積，ml；V——取樣體積，L。結(jié)果表示當(dāng)測定結(jié)果小于100pg/L時，保留至整數(shù)位；當(dāng)測定結(jié)果大于等于100pg/L時，保留三位有效數(shù)字。.方法能力驗證檢出限按照樣品分析的全部步驟，實驗室重復(fù)測定7次空白試樣。在儀器最佳穩(wěn)定狀態(tài)下測定空白值，統(tǒng)計其標(biāo)準(zhǔn)偏差并計算其檢出限，檢出限=t-(n-1,0.99)XS(其中t(n-1,0.99)=3.143),結(jié)果如下表2所示：HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告表1方法檢出限測定數(shù)據(jù)空白試樣 1234567樣品濃度"g/L）平均值X"g/L）標(biāo)準(zhǔn)偏差S"g/L）檢出限MDL"g/L）由表1可知，當(dāng)取樣體積為200ml，丙酮提取液體積為10ml時，實驗室檢出限為x.xx^g/L（測定下限為4倍檢出限）小于方法檢出限2配/L（測定下限8四g/L），符合標(biāo)準(zhǔn)方法要求。注：方法檢出限測定次數(shù)最少7次，可以適當(dāng)增加測定次數(shù)，t值取值見HJ168-2010。精密度和準(zhǔn)確度實驗室分別對葉綠素a質(zhì)量濃度為5pg/L、11pg/L、25pg/L的標(biāo)準(zhǔn)樣品（標(biāo)準(zhǔn)樣品編號：XXXXXXXX、XXXXXXXX、XXXXXXXX，有效日期：XXXXXXXX、XXXXXXXX、XXXXXXXX）進行6次重復(fù)測定，結(jié)果如表2所示：HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告表2方法精密度和準(zhǔn)確度測定數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品 測定結(jié)果TOC\o"1-5"\h\z標(biāo)準(zhǔn)值"g/L） 5 11 2512樣品濃度 3"g/L） 456平均值X"g/L）相對誤差RE（%）標(biāo)準(zhǔn)偏差S"g/L）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）由表2可知，本實驗室空白加標(biāo)樣品6次測試結(jié)果所得的相對誤差RE為x.x%?xx%,準(zhǔn)確度符合要求；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為x.x%?xx%,精密度符合標(biāo)準(zhǔn)方法要求。實驗室實驗室分別對葉綠素a質(zhì)量濃度為11pg/L、25pg/L的標(biāo)準(zhǔn)樣品（標(biāo)準(zhǔn)樣品編號：XXXXXXXX、XXXXXXXX,有效日期：XXXXXXXX、XXXXXXXX、）進行加標(biāo)回收測定，測定結(jié)果如表3所示：HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告表3實驗室加標(biāo)回收測定數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品 測定結(jié)果TOC\o"1-5"\h\z標(biāo)準(zhǔn)值"g/L) 11 25加標(biāo)量"g/L) 9 2812樣品濃度 3"g/L) 456平均值X"g/L)加標(biāo)回收率(％)由表3可知，本實驗室加標(biāo)回收測定結(jié)果為x.x%和x.x%，符合方法標(biāo)準(zhǔn)要求。.監(jiān)測實例本單位實驗室兩組人員分別對某河道地表水進行采樣監(jiān)測，同時進行實際樣品加標(biāo)測定，標(biāo)準(zhǔn)品濃度值為xx±x此/L，標(biāo)準(zhǔn)品編號為：XXXXXXXX，有效期限：XXXX年XX月XX日，加標(biāo)濃度為XXpg/L(濃度接近實際樣品濃度)。測定結(jié)果如下表4和表7所示：HJ897-2017方法驗證能力確認(rèn)報告表4：監(jiān)測實際樣品及加標(biāo)回收測定數(shù)據(jù)實際樣品測定結(jié)果人員1實際 加標(biāo)樣品 樣品人員2實際 加標(biāo)樣品 樣品實驗室空白樣品濃度"g/L）相對誤差（％）/實際加標(biāo)回收率（％