PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合

第五章細(xì)胞融合與雜交脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞長命不分泌抗體分泌抗體短命分泌抗體長命K?hler和Milstein,19751984年Nobel醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)一、細(xì)胞融合的概念和目的細(xì)胞融合：自然或人為條件下，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞相互接觸，發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合形成融合細(xì)胞的現(xiàn)象。目的：獲得雜種優(yōu)勢凝集膜融合質(zhì)融合核融合二、細(xì)胞融合的一般過程細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)模式圖膜脂的主要運(yùn)動(dòng)方式側(cè)向擴(kuò)散的頻率：106/s

側(cè)向擴(kuò)散伸縮震蕩擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)化運(yùn)動(dòng)

細(xì)胞融合關(guān)鍵是膜的融合，而膜融合的關(guān)鍵是相鄰的膜脂不穩(wěn)定。

中文名稱：聚乙二醇用于細(xì)胞融合的分子量:1000－6000使用濃度:30－60％。PEG的處理時(shí)間:時(shí)間較短PEG分子量和濃度越大，其融合率越高，但它的細(xì)胞毒性和粘度也隨之增大。

三、PEG的性質(zhì)四、PEG促融合作用機(jī)理1、PEG含有大量醚鍵，可吸附溶液中大量的自由水，使細(xì)胞凝集。

2、PEG可使細(xì)胞膜的脂類分子發(fā)生重排，排開膜蛋白，并作用于膜磷脂極性基團(tuán)和細(xì)胞膜表面蛋白，使膜磷脂的表面電位下降，同時(shí)使膜糖蛋白的排阻體積減少，最終使膜出現(xiàn)缺口。1）親本細(xì)胞混合，1000rpm，10min離心，棄上清。2）輕扣管底，混勻細(xì)胞，37℃水浴。3）60s內(nèi)滴加0.6ml50％PEG，邊滴邊搖動(dòng)試管，3）30s內(nèi)將細(xì)胞懸液吸入吸管靜置30s，再在30s內(nèi)緩慢轉(zhuǎn)入離心管。4）5min內(nèi)加入10mlDMEM逐漸終止PEG的作用。五、PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法播放操作視頻PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的特點(diǎn)：1、價(jià)格低廉，操作方便，融合能力強(qiáng)。2、有毒，易損傷細(xì)胞。一、單選題1.目前生產(chǎn)中最常使用的細(xì)胞融合方法是

。

A.滅活病毒誘導(dǎo)B.PEG誘導(dǎo)

C.電融合法D.激光誘導(dǎo)融合法2.PEG是

。

A.溶血卵磷脂B.二甲基亞砜

C.聚乙二醇D.磷脂酰絲氨酸3.PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合時(shí)其

可使細(xì)胞凝集在一起。

A.醚鍵B.醇鍵

C.碳-碳鍵D.碳-氫鍵六、單元測驗(yàn)4.PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用分子量為

。

A.100-400B.1000-4000C.10000-40000D.以上均不對(duì)5.PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的常用濃度為

。

A.5%B.10%C.50%D.100%6.PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的時(shí)間一般為

。

A.1minB.2.5minC.10minD.25min7.PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合一般與

搭配使用。

A.NaClB.K