大腸桿菌培養(yǎng)基優(yōu)化

大腸桿菌培養(yǎng)基優(yōu)化第一頁，共十四頁，2022年，8月28日實驗?zāi)康?.掌握發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法2.熟悉用正交試驗優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基的方法3.學(xué)習(xí)比濁法測定發(fā)酵液菌濃的方法第二頁，共十四頁，2022年，8月28日實驗原理一、培養(yǎng)基的配制1.確定培養(yǎng)基的基本組成2.確定所用原材料的種類3.確定所用原材料的濃度配比關(guān)系第三頁，共十四頁，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基優(yōu)化1.單因素法2.正交試驗法3.均勻試驗設(shè)計第四頁，共十四頁，2022年，8月28日三、正交試驗法1.概念利用已經(jīng)設(shè)計好的表格--正交表--來安排試驗并進行數(shù)據(jù)分析的一種方法。它是從全面試驗中挑選出部分有代表性的點進行試驗，這些有代表性的點具備了“均勻分散，齊整可比”的特點，是一種高效率、快速、經(jīng)濟的實驗設(shè)計方法。第五頁，共十四頁，2022年，8月28日2.基本工具——正交表記號：Ln（tm）L：正交表的符號n：表的行數(shù)（可安排試驗的次數(shù)）t：表中的字碼數(shù)（水平數(shù)）m：表的列數(shù)（最多可安排因素個數(shù)）L8(27)L9(34)L16(45)第六頁，共十四頁，2022年，8月28日3.正交表的特點試驗點分布均勻、整齊可比任何一列中各字碼（水平）都出現(xiàn)，且出現(xiàn)的次數(shù)相等任何兩列中各橫行組成的數(shù)字對，包含著所有可能的數(shù)字對，且各種數(shù)字對出現(xiàn)的次數(shù)相等第七頁，共十四頁，2022年，8月28日試驗的基本步驟:1明確任務(wù)確定指標2制定因素水平表（1）確定因素（A、B、C……）（2）選擇因素的變化范圍（3）確定因素水平數(shù)（4）制定因素水平表第八頁，共十四頁，2022年，8月28日3設(shè)計試驗方案（1）選擇正交表（2）表頭設(shè)計（不混雜）（3）列出試驗方案（4）進行實驗第九頁，共十四頁，2022年，8月28日4析試驗結(jié)果(1）方法一：直接比較(2)方法二:直觀分析直觀分析法是通過對每一因素的平均極差來分析問題。所謂極差就是平均效果中最大值和最小值的差。有了極差，就可以找到影響指標的主要因素，并可以幫助我們找到最佳因素水平組合。極差的大小反應(yīng)在所選擇的因素水平范圍內(nèi)該因素對測定結(jié)果影響的程度。極差大的因素在所選擇的因素水平范圍內(nèi)對測定結(jié)果的影響最大，在測試過程中必須嚴格控制。第十頁，共十四頁，2022年，8月28日四、比濁法測定發(fā)酵液菌濃細菌培養(yǎng)物在生長過程中，由于原生質(zhì)含量的增加，會引起培養(yǎng)物混濁度的增高。細菌懸液的混濁度和透光度成反比、與光密度成正比，透光度或光密度可借助光電比濁計精確測出，因此可用光電比濁計測定細胞懸液的光密度（OD值），表示該菌在特定實驗條件下的細菌相對數(shù)目，進而反映出其相對生長量。第十一頁，共十四頁，2022年，8月28日操作步驟一、培養(yǎng)基的配制1.將酵母浸膏、蛋白胨、氯化鈉作為培養(yǎng)基的主要影響因素，每一因素設(shè)定3個水平，進行三因素三水平的正交試驗。2.按表2配制9組培養(yǎng)基入100ml錐形瓶中，每瓶25ml。二、滅菌錐形瓶培養(yǎng)基：標記，加棉塞、報紙包扎。1ml移液管2支121℃，滅菌20min第十二頁，共十四頁，2022年，8月28日三、接種將菌種（教師預(yù)先培養(yǎng)好）搖勻后用無菌移液管吸取0.5ml懸液，接到每一組培養(yǎng)基中（接種量要完全一樣）四、發(fā)酵將三角瓶置于恒溫搖床中，37℃，120rpm培養(yǎng)12h第十三頁，共十四頁，2022年，8月28日五、比濁法測定各發(fā)酵液OD值取下?lián)u瓶，以空白培養(yǎng)