宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移

宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移第一頁，共三十三頁，2022年，8月28日早期宮頸鱗癌盆腔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的探討第二頁，共三十三頁，2022年，8月28日前言

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。早期宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后最重要的因素。研究表明患者若無盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其5年生存率可達85%～90%，而一旦有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其5年生存率則降為30%～60%。第三頁，共三十三頁，2022年，8月28日微轉(zhuǎn)移的概念:微轉(zhuǎn)移一般指非血液系統(tǒng)的惡性腫瘤在發(fā)展過程中,播散并存活于淋巴系統(tǒng)、血循環(huán)、骨髓、肝、肺等組織器官中的直徑<2mm的微小腫瘤細胞灶。第四頁，共三十三頁，2022年，8月28日

目前檢測微轉(zhuǎn)移的方法主要有連續(xù)切片法、免疫組化法、PCR、RT-PCR等。經(jīng)國內(nèi)外的大量實驗研究表明，免疫組化法檢測淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移有較高的敏感性和特異性，具有診斷意義。第五頁，共三十三頁，2022年，8月28日

在免疫組化法檢測微轉(zhuǎn)移的研究中，多以細胞角蛋白(cytokeratin,CK)作為檢測標記物。而AE1/AE3是針對多種細胞角蛋白亞型的單克隆抗體，用于標記上皮及上皮源性的腫瘤，特別在鑒別和判斷轉(zhuǎn)移性腫瘤上具有一定的意義。第六頁，共三十三頁，2022年，8月28日

本文通過AE1/AE3免疫組化標記，檢測細胞角蛋白在早期宮頸鱗癌術(shù)后患者淋巴結(jié)中的表達，來探討淋巴結(jié)內(nèi)微轉(zhuǎn)移發(fā)生率及其臨床意義。從而為準確地指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后提供依據(jù)。第七頁，共三十三頁，2022年，8月28日方法

1.標本的采集回顧性分析2006年1～6月14名FIGO分期為ⅠA～ⅡA期宮頸鱗癌患者的臨床資料，所有患者均在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行子宮廣泛切除術(shù)和盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。第八頁，共三十三頁，2022年，8月28日

所有病例術(shù)前未行放、化療。年齡33～50歲（平均41.4歲）。FIGO分期：ⅠA期1例；ⅠB期11例；ⅡA期2例。術(shù)中將切除的淋巴結(jié)標本分為四組，即髂總淋巴結(jié)組、髂外淋巴結(jié)組、閉孔淋巴結(jié)組和腹股溝深淋巴結(jié)組。第九頁，共三十三頁，2022年，8月28日術(shù)中共取246枚淋巴結(jié)。常規(guī)HE染色發(fā)現(xiàn)228枚淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移。所有228枚陰性淋巴結(jié)石蠟標本做5μm厚的連續(xù)切片2張，一張HE染色復(fù)查診斷，一張免疫組化染色。第十頁，共三十三頁，2022年，8月28日

2.實驗方法免疫組化法（S-P法）（1）石蠟標本制成5μm切片常規(guī)脫蠟，脫水。（2）熱修復(fù)抗原。（3）滴加過氧化物酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。

第十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日（4）滴加適量的一抗（鼠抗人細胞角蛋白單克隆抗體)。（5）滴加適量生物素標記的二抗。

（6）滴加鏈霉素-過氧化物酶溶液。

（7）滴加適量DAB溶液顯色。

（8）蘇木素復(fù)染脫水，封片。顯微鏡下觀察結(jié)果。

第十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日

3.結(jié)果判定宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為單個散在和2～3個及數(shù)個聚集成小團狀的癌細胞位于淋巴竇內(nèi)，呈較強的胞漿著色。細胞質(zhì)中表達AE1/AE3則判定為微轉(zhuǎn)移陽性。

第十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日

4.統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)陽性率的比較采用χ2檢驗,條件不滿足者用Fisher確切概率法檢驗。采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行卡方檢驗及相關(guān)處理。（檢驗水準α=0.05）

第十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日結(jié)果

1.14例患者的228枚陰性淋巴結(jié)中，經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，3例患者的3枚淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移病灶，病例總陽性率21.4%(3/14)，淋巴結(jié)總陽性率1.3%(3/228)。3枚淋巴結(jié)的分布見表1。第十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日表1：各組淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移分布情況

髂總髂外閉孔腹股溝深總計0/423.8(2/53)1.1(1/87)0/463/228第十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日圖1

ⅠB期宮頸癌患者的髂外淋巴結(jié)中微轉(zhuǎn)移灶（SP法，×200）

第十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日圖2ⅡA期宮頸癌患者的閉孔淋巴結(jié)中聚集成團狀的微轉(zhuǎn)移灶（SP法,×200）第十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日圖3，同一枚淋巴結(jié)HE染色和免疫組化法染色的對比第十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日

2.我們又將所有陰性淋巴結(jié)分為兩組，一組為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組，另一組為無轉(zhuǎn)移組。通過比較發(fā)現(xiàn)，前一組的微轉(zhuǎn)移檢出率要高于后一組，但統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差異（P>0.05）。具體分布情況見表2。第二十頁，共三十三頁，2022年，8月28日表2：兩組間微轉(zhuǎn)移分布情況

微轉(zhuǎn)移髂總髂外閉孔腹股溝深微轉(zhuǎn)移率A組（73枚）

0/111/161/29

0/172.7%(2/73)

B組（155枚）0/311/370/58

0/290.6%(1/155)

注：A組：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組

B組：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組第二十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日

3.在對幾種臨床特征的分析中，我們發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移發(fā)生率與臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的增加，微轉(zhuǎn)移的檢出率逐漸增大（X2=8.601,P<0.05）而在其它的臨床特征中，如原發(fā)灶大小、肌層浸潤深度、分化程度等方面，微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率卻沒有顯著性差異。第二十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日表3：微轉(zhuǎn)移與各臨床特征關(guān)系

病理特征總例數(shù)微轉(zhuǎn)移陽性臨床分期

ⅠA

10（0）

ⅠB

111（9.09）ⅡA22（100）原發(fā)灶

<2cm

41（25）

≥2cm

102（20）浸潤深度

<5mm

91（11.1）

≥5mm

52（40）分化程度高分化60（0）中低分化83（37.5）第二十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日討論

研究表明，90%以上的宮頸癌發(fā)生與HPV感染有關(guān)，因此多年來人們對宮頸癌微轉(zhuǎn)移的研究主要將焦點放在對盆腔淋巴結(jié)及外周血中HPV基因的檢測上，但由于并非所有的宮頸癌患者均有HPV感染，而且其他腫瘤如鼻咽癌、乳腺癌也發(fā)現(xiàn)與HPV感染有關(guān)，因此將HPV作為微轉(zhuǎn)移的檢測標志物尚有一定的局限性。

第二十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日

上皮來源的癌細胞如宮頸癌細胞，一般都保留了上皮細胞的部分特征。細胞角蛋白是一種僅存在于上皮細胞中的少見蛋白質(zhì)。分為Ⅰ型角蛋白和Ⅱ型角蛋白。如果在淋巴組織中檢測出細胞角蛋白的表達，則表明有上皮源性腫瘤細胞播散到淋巴組織中。

第二十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日

抗細胞角蛋白抗體AE1/AE3是AE1克隆與AE3克隆的混合?？寺E1識別Ⅰ型細胞角蛋白，如CK19、CK20，而克隆AE3識別Ⅱ型細胞角蛋白，如CK1、CK2。因此AE1/AE3是廣譜抗細胞角蛋白抗體，適用于上皮性和非上皮性腫瘤的鑒別。第二十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日

Juretzka等人采用免疫組化法AE1和CAM5.2標記，檢測了49例ⅠA2～ⅠB2期宮頸癌患者的976枚陰性淋巴結(jié)標本，結(jié)果顯示8.1%（4/49）的患者發(fā)現(xiàn)有微轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)陽性率為0.41%（4/976）。隨訪結(jié)果顯示微轉(zhuǎn)移中50%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，而無微轉(zhuǎn)移的患者中復(fù)發(fā)率為6.7%。

第二十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日

Lentz等人用AE1/CAM5.2標記免疫組化法檢測132名ⅠA~ⅠB2期宮頸癌患者的3106枚淋巴結(jié)，結(jié)果有19名患者的29枚淋巴結(jié)有微轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)陽性率為0.9%（29/3106）。他還通過分析得出結(jié)論，微轉(zhuǎn)移患者所占的比率大致和術(shù)后復(fù)發(fā)率相等。第二十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日

本實驗結(jié)果表明,在228枚陰性淋巴結(jié)中，通過AE1/AE3標記，3例患者的3枚淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移，病例總陽性率21.4%(3/14),淋巴結(jié)總陽性率1.3%(3/228)。這與Juretzka和Lentz等人報道的相接近。第二十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日

另外,我們還首次對淋巴結(jié)進行了分組，在陰性淋巴結(jié)中，3枚淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移，其中2枚分布于髂外淋巴結(jié)組，1枚分布于閉孔淋巴結(jié)組中

，這也同樣支持了子宮頸癌淋巴結(jié)回流的復(fù)雜性。本研究也表明早期宮頸癌的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與臨床分期密切相關(guān)。這在之前的國內(nèi)外研究中尚未報道過。當(dāng)然，本研究中病例不多，有關(guān)研究還需進一步開展。第三十頁，共三十三頁，2022年，8月28日結(jié)論1.宮頸鱗癌患者陰性盆腔淋巴結(jié)中存在微轉(zhuǎn)移灶，可以通過免疫組化的方法檢測到。2．宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途徑可能是先轉(zhuǎn)移到髂外淋巴結(jié)，閉孔淋巴結(jié)等一級淋巴結(jié)，再向下一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。微轉(zhuǎn)移發(fā)生率可能與臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的增加，微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率逐漸增大。

3.對于經(jīng)證實存在微轉(zhuǎn)移的患者，術(shù)后應(yīng)對其進行嚴密地隨訪，必要時還需要補充放化療。第三十一頁