巴比妥類藥物的質(zhì)量分析

巴比妥類藥物含量測定主講教師：王佩瑾內(nèi)容溴量法酸堿滴定法紫外分光光度法

銀量法

一、銀量法優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，專屬性較強(qiáng)。缺點(diǎn)：受溫度影響較大；滴定終點(diǎn)以溶液出現(xiàn)渾濁為終點(diǎn)指示難以觀察。基于巴比妥類藥物在合適的堿性溶液中，可與銀離子定量成鹽，可采用銀量法測定本類藥物及其制劑的含量。如苯巴比妥及其鈉鹽、異戊巴比妥及其鈉鹽以及它們的制劑，中國藥典均采用銀量法測定其含量。巴比妥類藥物含量測定

1.原理

反應(yīng)摩爾比：1:1溶劑系統(tǒng)：甲醇＋3％無水碳酸鈉終點(diǎn)指示：自身指示法電位法指示（Ag－玻璃電極系統(tǒng)）

Na2CO3苯巴比妥及其鈉鹽、異戊巴比妥及其鈉鹽以及它們的制劑缺點(diǎn)：受溫度影響較大；滴定終點(diǎn)以溶液出現(xiàn)渾濁為終點(diǎn)指示難以觀察。-----—操作簡便，專屬性強(qiáng)巴比妥類藥物含量測定2.測定方法與計(jì)算指示電極(Ag)參比電極(玻璃/甘汞)0.2g甲醇

40ml苯巴比妥測定3%無水碳酸鈉電位滴定法(AgNO3)巴比妥類藥物含量測定取本品約0.2g，加甲醇40ml使溶解，加入新鮮配制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O3（或24.83mg的C11H17N2NaO3）。

例如:異戊巴比妥及其鈉鹽的測定：12無水碳酸鈉應(yīng)新鮮配制硝酸銀滴定液應(yīng)新鮮配制注意事項(xiàng)

巴比妥類藥物含量測定

二、溴量法

（定量過量）Br2+2KI2KBr+I2（剩余）I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6--司可巴比妥鈉測定反應(yīng)的摩爾比：1:2巴比妥類藥物含量測定

司可巴比妥鈉的測定方法：

取本品約0.1g，精密稱定，置于250ml碘量瓶中，加水10ml振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min，微開瓶塞，加KI試液10ml，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。

F：？巴比妥類藥物含量測定12操作中要防止溴和碘的逸失平行條件進(jìn)行空白試驗(yàn)可以減少溴和碘逸失帶來的誤差。注意事項(xiàng)3溴滴定液的配制：取溴酸鉀3.0g與溴化鉀15g，加水適量使之溶解成1000ml，搖勻。KBrO3＋5KBr＋6HCl→3Br2＋6KCl＋3H2O

巴比妥類藥物含量測定

原料藥剩余滴定法巴比妥類藥物含量測定

三、酸堿滴定法（酸量法）水-乙醇混合溶劑中滴定膠束水溶液中滴定非水滴定法巴比妥類藥物含量測定異戊巴比妥水—醇溶解麝香草酚酞NaOH淡藍(lán)色1.水-乙醇混合溶液巴比妥類藥物含量測定2.膠束水溶液正膠束反膠束H2O巴比妥類表面活性劑溶解麝香草酚酞指示劑NaOH滴定溴化十六烷基三甲基芐銨CTMA氯化四癸基二甲基芐銨TDBA巴比妥類藥物含量測定

溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯、乙醇-三氯甲烷

滴定劑：甲醇鈉（鉀）、氫氧化四丁基胺

指示劑：麝香草酚藍(lán)3.非水滴定法巴比妥類藥物含量測定四、紫外分光光度法直接測定的UV法提取分離后的UV法巴比妥類藥物含量測定1.直接測定的紫外分光光度法

本法是將供試品溶解后，根據(jù)溶液的pH，在最大吸收波長（λmax）處，直接測定對照品溶液和供試品溶液的吸收度，再計(jì)算藥物的含量。中國藥典對注射用硫噴妥鈉的含量測定采用本法。

Beer-Lambert定律

A=-㏒T=ElCA∝C巴比妥類藥物含量測定以注射用硫噴妥鈉的含量測定為例：

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%氫氧化鈉溶液定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液；另取硫噴妥對照品，加0.4%氫氧化鈉溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液。照分光光度法，在304nm波長處測定吸收度，根據(jù)每支的平均裝量計(jì)算。每1mg硫噴妥相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaS。巴比妥類藥物含量測定

單組分定量的方法：

1.吸收系數(shù)法（絕對法）巴比妥類藥物含量測定

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線法

3.對照法巴比妥類藥物含量測定

2.提取分離后的紫外分光光度法

提取分離的主要目的是消除干擾物質(zhì)對測定的影響。根據(jù)巴比妥類藥物具有弱酸性，在氯仿等有機(jī)溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點(diǎn)。測定時(shí)取供試液適量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥類藥物。氯仿提取液加pH7.2～7.5緩沖溶液，振搖，分離棄去水相緩沖液層。再用0.45mol/L氫氧化鈉溶液提取氯仿層中的巴比妥類藥物，將堿提取液調(diào)節(jié)至適宜pH，然后選擇相應(yīng)的吸收波長進(jìn)行測定。巴比妥類藥物含量測定巴比妥類藥物含量測定

3.差示紫外分光光度法（?A法）

本法是利用巴比妥藥物在不同pH值溶液中的電離級數(shù)不同，因而產(chǎn)生紫外吸收光譜的情況不同，以此為依據(jù)設(shè)計(jì)測定方法。該法常用于巴比妥類藥物的制劑分析，也可用于體內(nèi)巴比妥類藥物的監(jiān)測。巴比妥類藥物含量測定

（1）測定方法

取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱膒H，或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當(dāng)波長處，測其吸收度的差值（A值）。巴比妥類藥物含量測定

（2）必要條件

a.供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。b.干擾物的吸收不受測定時(shí)化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變。巴比妥類藥物含量測定

（3）定量依據(jù)供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x、y表示，干擾物用z表示。巴比妥類藥物含量測定

也就是說，吸收度差值（A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除。

可用對照法定量

（4）特點(diǎn)保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，又無需事先分離，并能消除干擾。巴比妥類藥物含量測定1.下列哪種方法能用于巴比妥類藥物的含量測定（）

A非水滴定法B溴量法

C兩者均可D兩者均不可巴比妥類藥物含量測定巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)主講人:XXX內(nèi)容特殊取代基的鑒別試驗(yàn)鈉鹽的鑒別試驗(yàn)熔點(diǎn)測定丙二酰脲鑒別反應(yīng)12巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)（一）丙二酰脲鑒別反應(yīng)已經(jīng)收載在《中國藥典》（2015）通則0301。包括銀鹽反應(yīng)和銅鹽反應(yīng)，分別生成沉淀和呈色反應(yīng)。紫色巴比妥類銅吡啶試液吡啶硫噴妥鈉綠色銅吡啶試液吡啶SS巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)（二）利用特殊取代基的鑒別試驗(yàn)①與碘試液反應(yīng)—棕黃色消失司可巴比妥鈉，P1651.利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)②與高錳酸鉀的反應(yīng)紫色的高錳酸鉀棕色的二氧化錳司可巴比妥鈉，P165巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)司可巴比妥鈉的鑒別I2+碘褪色Br2KMnO4巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)黃色2.利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)與硝酸鉀和硫酸共熱區(qū)分苯巴比妥與不含芳環(huán)取代的巴比妥類藥物。①硝化反應(yīng)苯巴比妥類黃色硝基化合物巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)橙紅橙黃紫紅色②與亞硝酸鈉-硫酸反應(yīng)苯巴比妥，P160巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)③與甲醛-硫酸反應(yīng)玫瑰紅接界面苯巴比妥，P161巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)3.硫元素的鑒別試驗(yàn)

S2-+Pb2+→PbS↓黑巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)硫代巴比妥類與巴比妥類的區(qū)別巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)12銀焰色反應(yīng)：鮮黃色銅取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。(三)鈉鹽的鑒別試驗(yàn)巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)(四)熔點(diǎn)測定(五)紅外吸收光譜巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點(diǎn)巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)苯巴比妥【鑒別】（1）取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，混合，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。（2）取本品約50mg，置試管中，加甲醛試液1ml，加熱煮沸，冷卻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，使成兩液層，置水浴中加熱。接界面顯玫瑰紅色。（3）本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集227圖）一致。（4）本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）。巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)司可巴比妥鈉【鑒別】(1)取本品1g，加水100ml溶解后，加稀醋酸5ml強(qiáng)力攪拌，再加水200ml，加熱煮沸使溶解成澄清溶液（液面無油狀物）,放冷，靜置待析出結(jié)晶，濾過，結(jié)晶在70℃干燥后，依法測定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)約為97℃。(2)取本品0.1g，加水10ml溶解后，加碘試液2ml，所顯棕黃色在5分鐘內(nèi)消失。(3)本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集137圖）一致。(4)本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）。巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)硫噴妥鈉【鑒別】(1)取本品約0.5g，加水10ml使硫噴妥鈉溶解，加過量的稀鹽酸，即生成白色沉淀；濾過，沉淀用水凈，在105℃干燥后，依法測定（附錄ⅥC）熔點(diǎn)為157～161℃。(2)取本品約0.1g，加吡啶溶液(1→10)10ml使硫噴妥鈉溶解，加銅吡啶試液1ml，振搖，放置1分鐘，即生成綠色沉淀。(3)取本品約0.2g，加氫氧化鈉試液5ml與醋酸鉛試液2ml，生成白色沉淀；加熱后，沉淀變?yōu)楹谏?4)取本品，熾灼后，顯鈉鹽的火焰反應(yīng)（附錄Ⅲ）。巴比妥類藥物鑒別試驗(yàn)區(qū)別苯巴比妥、司可巴比妥鈉、硫噴妥鈉苯巴比妥司可巴比妥鈉硫噴妥鈉Cu2+綠色紫堇色紫堇色硫噴妥鈉苯巴比妥司可巴比妥鈉甲醛-硫酸玫瑰紅色無此現(xiàn)象苯巴比妥硫酸-亞硝酸鈉碘試液KMnO4司可巴比妥鈉思考與討論1．巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成配位化合物，顯綠色的藥物是A.苯巴比妥B.異戊巴比妥C.司可巴比妥D.巴比妥E.硫噴妥鈉巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)主講人:XXX巴比妥類藥物概述巴比妥類藥物是環(huán)狀丙二酰脲類的鎮(zhèn)靜催眠藥中樞抑制作用：鎮(zhèn)靜-催眠-抗驚厥-麻醉作用其中苯巴比妥還具有抗癲癇的作用巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)特征與典型藥物結(jié)構(gòu)通式取代基巴比妥酸母核巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)環(huán)狀丙二酰脲1,3-二酰亞胺基團(tuán)決定巴比妥類藥物特性1.母核部分2.取代基部分區(qū)別不同類型的巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)分析巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)分析5,5－取代的巴比妥類藥物5,5－取代的硫代巴比妥類藥物1,5,5－取代的巴比妥類藥物5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)硫噴妥鈉1,5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)性狀：白色結(jié)晶或者結(jié)晶性粉末具有一定的熔點(diǎn)溶解性：微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機(jī)溶劑中；其鈉鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。理化特性巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)2.弱酸性

132*酮式-烯醇式互變異構(gòu)*在水溶液中可以發(fā)生二級電離*可與強(qiáng)堿成鹽，鹽溶液顯堿性—酸化析出游離藥物—有機(jī)溶劑提取水溶液顯酸性巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)互變異構(gòu)為烯醇式結(jié)構(gòu)HH弱酸性弱酸性巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)

巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)3.水解反應(yīng)—酰亞胺基團(tuán)的性質(zhì)（用于鑒別）2NH3↑具氨臭味，可使紅石蕊試紙變藍(lán)NaOH巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)1,5,5-取代AgNO3Na2CO3可溶性一銀鹽4.與重金屬反應(yīng)(1)與Ag+的反應(yīng)—用于鑒別、含量測定巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)AgNO3Na2CO3可溶性一銀鹽AgNO3Na2CO3二銀鹽（白）5,5-取代巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)紫色巴比妥類銅吡啶試液吡啶硫噴妥鈉綠色↓銅吡啶試液吡啶(2)與Cu2+的反應(yīng)---鑒別SS巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)(3)與Co2+的反應(yīng)--鑒別和含量測定巴比妥類+Co2+4(CH3)2CHNH2紫色無水條件：無水甲醇或乙醇紫堇色巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)(4)與Hg2+的反應(yīng)白色巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)丙二酰脲基團(tuán)中氫比較活潑巴比妥類+香草醛濃Ｈ２ＳＯ４棕紅色(5)與香草醛的反應(yīng)巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)5.紫外吸收光譜特征—鑒別、含量測定酸性堿性pH10pH13巴比妥類不電離無吸收一級電離λmax240nm二級電離5,5取代255nm1,5,5240nm硫代巴比妥類有吸收λmax287nm238nm有吸收304nm255nm有吸收304nm消失巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)巴比妥類藥物的紫外吸收光譜λ(nm)2902702502300.51.01.5AABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未電離)B.pH9.9緩沖液(一級電離)C.pH13NaOH液(1mol/L,二級電離)1,5,5-三取代巴比妥類藥物不存在二級電離，最大吸收波長不變。巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)硫噴妥的紫外吸收光譜HCl溶液(0.1mol/L)NaOH溶液(0.1mol/L)巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)（1）TLC:采用對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法，要求供試品斑點(diǎn)的Rf值應(yīng)與對照品斑點(diǎn)的一致。（2）HPLC:與對照品比較保留行為，主要是比較保留時(shí)間和