LCMS在藥物代謝動力學中的應用

LCMS在藥物代謝動力學中的應用第1頁/共25頁要點：(刪除4-6片)一、幾種現(xiàn)代分析方法介紹與比較二、LC-MS在藥物動力學中的應用三、LC-MS在代謝物研究中的應用四、LC-MS在現(xiàn)代新藥研究中的應用

1、高通量篩選

2、中藥現(xiàn)代化第2頁/共25頁體內(nèi)藥物分析中的現(xiàn)代分析方法與技術(標題一致性)一、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術（GC-MS)*二、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(LC-MS)*三、液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(LC-NMR)四、毛細管電泳免疫分析(CEIA)五、柱切換高效液相色譜法六、高效毛細管電泳法(HPCE)第3頁/共25頁第4頁/共25頁氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術（GC-MS）特點：靈敏度高、分析速度快、鑒別能力強；但它受到藥物分子的極性和熱穩(wěn)定性等限制，要求分子具有揮發(fā)性或通過衍生化提高分子的揮發(fā)性，因此其有明顯的局限性。第5頁/共25頁液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(LC-NMR)特點：能提供最大量的分子結構信息，在體內(nèi)藥物分析中對代謝產(chǎn)物的鑒定具有顯著優(yōu)勢，但是在做NMR分析前必須做大量的分離純化工作，不利于樣品的快速分離；另外，NMR檢測靈敏度低是LC-NMR技術的瓶頸。第6頁/共25頁液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(LC-MS)基本組成：HPLC裝置、接口裝置與離子源、質(zhì)量分析器。第7頁/共25頁

目前商品化LC-MS儀主要用大氣壓離子化接口（API）。API不僅是一種較好的接口技術，同時也是一種離子化方法，該技術使樣品的離子化在處于大氣壓條件下的離子化室中完成。第8頁/共25頁API的操作模式分三種：一、電噴霧離子化（ESI)二、氣動輔助電噴霧離子化三、大氣壓化學離子化（APCI)第9頁/共25頁液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(LC-MS）特點：樣品前處理簡單，無需衍生化，適用范圍廣將色譜的高分離能力與質(zhì)譜的高檢測靈敏度、定性專屬性集于一身隨著接口裝置和離子化技術的發(fā)展成熟，該技術在體內(nèi)藥物分析中逐漸發(fā)展成為一種常規(guī)的分離檢測方法第10頁/共25頁LC-MS在藥物動力學中的應用介紹

藥物動力學研究，需對生物樣品中的微量乃至痕量成分定量分析。而當今的藥物研制日趨低劑量，使常規(guī)的分離檢測技術難以滿足復雜介質(zhì)中痕量成分準確定量的要求。LC-MS技術的高靈敏度使之在這一領域的應用日趨廣泛并趨于常規(guī)化。第11頁/共25頁舉例：閆小華等人用LC/MS聯(lián)用法測定人血漿中氟西汀的濃度：第12頁/共25頁色譜條件色譜柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)柱溫：30℃流動相：10mmol/L醋酸銨緩沖液-甲醇（20：80）流速：1.0ml/min第13頁/共25頁質(zhì)譜條件離子檢測方式：選擇性離子檢測；離子極性：正離子離子化方式：氣動輔助電噴霧離子化檢測對象：苯磺酸氨氯地平傳輸區(qū)電壓：100V干燥氣流速：10L/min霧化室壓力：40psi干燥氣溫度：350℃第14頁/共25頁

以往文獻中均以紫外檢測器檢測氨氯地平的濃度,但口服10mg氨氯地平后體內(nèi)最高血漿濃度不到10ng·mL–1,最低只有0.2ng·mL–1,遠遠超出了紫外的檢測范圍,而本實驗采用LC-MS法測定,結果最低檢測濃度為0.12ng·mL–1

，本法簡便,靈敏,能滿足測定血漿中藥物濃度的要求。第15頁/共25頁LC-MS在代謝物研究中的應用

在新藥開發(fā)過程中，為了預防潛在的毒性，測定是否有代謝物和已知藥物相關，是否和原藥具有相同的治療作用或?qū)ζ渌委熡袃?nèi)在的活性，有必要對代謝物進行結構鑒定。第16頁/共25頁舉例：

陳懷俠等人運用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MSn)聯(lián)用技術研究了樟柳堿大鼠肝勻漿中的代謝物：第17頁/共25頁色譜條件：色譜柱：C18柱(150mm×2mmi.d.,5μm),流動相：甲醇/0.01%三乙胺溶液(用甲酸調(diào)節(jié)pH3.5)(60∶40,V/V)柱溫：40℃流速：0.2mL/min。第18頁/共25頁質(zhì)譜條件：

采用電噴霧離子化方式,檢測離子為正離子。離子源噴射電壓5.0kV,毛細管電壓45V,毛細管溫度200℃,氮氣為鞘氣,其流速40個單位,其它通過碰撞誘導解離獲得母分子離子的多級質(zhì)譜,優(yōu)化的多級質(zhì)譜相對碰撞能量為30%。采用全掃描一級質(zhì)譜及其源內(nèi)碰撞誘導解離、全掃描二級質(zhì)譜及三級質(zhì)譜等方式進行測定。第19頁/共25頁

依據(jù)上述實驗方法,在樟柳堿的大鼠肝勻漿培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了原藥及其代謝物。本實驗首先總結出樟柳堿電噴霧質(zhì)譜的電離和裂解規(guī)律,由原藥的特征碎片及特征中性丟失為依據(jù),通過LC-MS數(shù)據(jù)鑒別代謝物,完全可以排除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。因此,本方法靈敏度高,專屬性好。第20頁/共25頁LC-MS在高通量篩選中的應用

隨著組合化學和高通量活性篩選技術的發(fā)展，大量的活性化合物被發(fā)現(xiàn)，這就對這些活性化合物的藥代屬性進行篩選提出要求。為解決體內(nèi)外藥代動力學篩選規(guī)模小及化合物相互影響的問題,國外實驗室開發(fā)了快速的藥代動力學篩選法,將樣品收集周期短至6～8h,利用串聯(lián)LC-MS-MS技術,計算AUC0～t

。利用體外肝細胞培養(yǎng)和串聯(lián)LC/MS可識別代謝產(chǎn)物。第21頁/共25頁

生物樣品的分析借用LC-MS/MS技術,通過應用混合功能型色譜柱,樣品不經(jīng)處理就可以直接快速地分析,極大地提高了藥代篩選的通量性。第22頁/共25頁LC-MS在中藥現(xiàn)代化中的應用

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術自身的優(yōu)點也決定了其在中藥藥動學方面將發(fā)揮不可