高效液相色譜法演示文稿

高效液相色譜法()演示文稿1當(dāng)前1頁(yè)，總共62頁(yè)。2（優(yōu)選）高效液相色譜法()當(dāng)前2頁(yè)，總共62頁(yè)。第1節(jié)高效液相色譜儀當(dāng)前3頁(yè)，總共62頁(yè)。HPLC所用流動(dòng)相必須預(yù)先脫氣，否則容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵的工作；還會(huì)影響檢測(cè)器的正常響應(yīng)。一、輸液系統(tǒng)（一）溶劑脫氣與過(guò)濾①抽真空脫氣②超聲波振蕩脫氣③吹氦脫氣溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾，以除去溶劑中的固體雜質(zhì)，防止堵塞色譜柱、管路系統(tǒng)，保護(hù)高壓泵當(dāng)前4頁(yè)，總共62頁(yè)。（二）高壓輸液泵對(duì)輸液泵的基本要求：

①流量準(zhǔn)確可調(diào)。流動(dòng)相的流速在0.5-2mL/min，流量控制精度通常要求小于±0.5%。②耐高壓。通常要求泵的輸出壓力達(dá)到30-60MPa的高壓。③液流穩(wěn)定。輸出的液流應(yīng)無(wú)脈動(dòng)④泵的死體積小。泵的死體積通常要求小于0.5mL。⑤密封性能好，耐腐蝕當(dāng)前5頁(yè)，總共62頁(yè)。輸液泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵，恒流泵的應(yīng)用更廣泛。當(dāng)前6頁(yè)，總共62頁(yè)。（三）梯度洗脫裝置等度洗脫：用恒定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫，方法簡(jiǎn)便、色譜柱易再生等是其優(yōu)點(diǎn)。

梯度洗脫：在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的配比，逐步提高洗脫強(qiáng)度。梯度洗脫可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中性質(zhì)差異較大的組分，都能在各自適宜的分離條件下分離。

梯度洗脫的特點(diǎn)：①縮短分析周期；②提高分離效果；③改善峰形，很少拖尾；④增加檢測(cè)靈敏度。⑤基線漂移及重復(fù)性不佳當(dāng)前7頁(yè)，總共62頁(yè)。等度洗脫與梯度洗脫（弱）（強(qiáng)）A→B（弱→強(qiáng)）當(dāng)前8頁(yè)，總共62頁(yè)。高壓梯度（外梯度）:利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱低壓梯度（內(nèi)梯度）:一臺(tái)高壓泵,通過(guò)比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。當(dāng)前9頁(yè)，總共62頁(yè)。二、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣器要求密封性好，死體積小，重復(fù)性好。

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，結(jié)構(gòu)如圖所示：當(dāng)前10頁(yè)，總共62頁(yè)。三、分離系統(tǒng)使用色譜柱注意事項(xiàng)：1溶劑和樣品應(yīng)過(guò)濾，防止堵塞。2加前置柱。3用完后要清洗

色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。金屬管用得較多。一般色譜柱長(zhǎng)5～30cm，內(nèi)徑為4～5mm，當(dāng)前11頁(yè)，總共62頁(yè)。四、檢測(cè)系統(tǒng)要求檢測(cè)器靈敏度高、噪聲低、死體積小、線性范圍寬、重復(fù)性好、適用范圍廣等。（一）紫外檢測(cè)器應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。當(dāng)前12頁(yè)，總共62頁(yè)。紫外檢測(cè)器包括固定波長(zhǎng)、可變波長(zhǎng)和光電二極管陣列檢測(cè)器當(dāng)前13頁(yè)，總共62頁(yè)。1024個(gè)二極管陣列10ms完成一次檢測(cè)，1s采集100000個(gè)含吸光度、波長(zhǎng)、時(shí)間的數(shù)據(jù)，得到一張吸光度、波長(zhǎng)、保留時(shí)間的三維色譜圖。當(dāng)前14頁(yè)，總共62頁(yè)。

靈敏度高；線性范圍寬；流通池可做得很小(1mm×10mm，容積8μL)；對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)可選，易于操作；可用于梯度洗脫。特點(diǎn)：（二）熒光檢測(cè)器

高靈敏度，高選擇性。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B，黃曲霉素，卟啉類(lèi)化合物，農(nóng)藥，藥物，氨基酸，甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)。當(dāng)前15頁(yè)，總共62頁(yè)。當(dāng)前16頁(yè)，總共62頁(yè)。（三）示差折光檢測(cè)器

通用型檢測(cè)器，但靈敏度低，對(duì)溫度敏感，不能用于梯度洗脫

可連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成正比。當(dāng)前17頁(yè)，總共62頁(yè)。（四）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

這種檢測(cè)器可用于揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品組分的檢測(cè)，但對(duì)于有紫外吸收的組分的檢測(cè)靈敏度較低，主要用于糖類(lèi)、高分子化合物、高級(jí)脂肪酸及甾體等幾十類(lèi)化合物。

在一定的條件下，光散射強(qiáng)度正比于溶質(zhì)粒子的大小和數(shù)量。散射光強(qiáng)度與樣品微粒質(zhì)量的關(guān)系為

I=kmb式中，m為微粒質(zhì)量，k、b為實(shí)驗(yàn)條件（如溫度、流動(dòng)相性質(zhì)）決定的常數(shù)。因此可根據(jù)散射光強(qiáng)度對(duì)樣品進(jìn)行定量分析。當(dāng)前18頁(yè)，總共62頁(yè)。當(dāng)前19頁(yè)，總共62頁(yè)。五、數(shù)據(jù)記錄處理和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)又稱(chēng)色譜工作站：它可對(duì)分析全過(guò)程（分析條件、儀器狀態(tài)、分析狀態(tài)）進(jìn)行在線顯示，自動(dòng)采集、處理和儲(chǔ)存分析數(shù)據(jù)。當(dāng)前20頁(yè)，總共62頁(yè)。第2節(jié)基本理論高效液相色譜法的塔板理論與氣相色譜法完全相同，速率理論略有差異。一、柱內(nèi)展寬1.渦流擴(kuò)散項(xiàng)渦流擴(kuò)散項(xiàng)與氣相色譜法相同，

A＝2λdp

高效液相色譜多使用3～10um球形固定相顆粒,以均漿高壓裝填，A較小。當(dāng)前21頁(yè)，總共62頁(yè)。2.分子擴(kuò)散項(xiàng)3.流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)

流動(dòng)相傳質(zhì)阻力，實(shí)際包括兩方面，一是移動(dòng)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力Hm，二是滯流（靜態(tài)）流動(dòng)相傳質(zhì)阻力Hsm。組分在液體中的擴(kuò)散系數(shù)僅為氣體的萬(wàn)分之一，在高效液相色譜中,B/u很小，可忽略不計(jì)。當(dāng)前22頁(yè)，總共62頁(yè)。當(dāng)前23頁(yè)，總共62頁(yè)。a.移動(dòng)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力（Cmu）當(dāng)流動(dòng)相在色譜柱內(nèi)流動(dòng)時(shí)，離固定相較遠(yuǎn)的組分流動(dòng)較快，處于固定相顆粒表面的組分流動(dòng)較慢，由于這種差別，會(huì)使組分的色譜峰擴(kuò)展.展寬大小與固定相顆粒直徑平方成正比，與流動(dòng)相線速度成正比，與組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm成反比：b.滯流流動(dòng)相傳質(zhì)阻力（Csmu）當(dāng)前24頁(yè)，總共62頁(yè)。當(dāng)前25頁(yè)，總共62頁(yè)。

流動(dòng)相在色譜柱中流動(dòng)時(shí)，有部分流動(dòng)相進(jìn)入到多孔的固定相深孔中，滯留后難以流動(dòng)。組分分子進(jìn)入滯留區(qū)造成色譜峰擴(kuò)展，使柱效降低，4.固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)（Csu）

組分分子在固定液中傳質(zhì)時(shí)，因所受到的阻力不同而引起色譜峰擴(kuò)展

在鍵合相色譜法中，df很?。▎畏肿訉樱潭ㄏ鄠髻|(zhì)阻力可以忽略。當(dāng)前26頁(yè)，總共62頁(yè)。在高效液相色譜中，范第姆特方程可寫(xiě)成：

H＝A+Cu＝A+Cmu+Csmu

隨著u的增大，H增大，柱效降低，故其最佳流速就在u很小的地方。當(dāng)前27頁(yè)，總共62頁(yè)。為了減小柱內(nèi)展寬，提高柱效，可采取以下措施：(1)用小而均勻的球形固定相，填充均勻，以減少渦流擴(kuò)散。（2）使用低粘度的小分子溶劑作流動(dòng)相，減小流動(dòng)相傳質(zhì)阻力；(3)流動(dòng)相的流速低，一般控制在1mL/min左右二、柱外展寬（4）柱溫25℃左右為宜。柱溫太高，雖Dm增大，傳質(zhì)阻力減小，但易產(chǎn)生氣泡，太低不僅減小Dm，使傳質(zhì)阻力增大，而且流動(dòng)相的粘度增大，柱阻加大。當(dāng)前28頁(yè)，總共62頁(yè)。采用小體積檢測(cè)器，管道對(duì)接宜呈流線形，減少柱外死體積，從而減小柱外展寬，提高柱效。

從進(jìn)樣器到檢測(cè)器之間，除色譜柱以外，其它因素導(dǎo)致的譜峰展寬。當(dāng)前29頁(yè)，總共62頁(yè)。HPLC

高效液相LSC

液固LLC液液IEC離子交換SEC空間排阻AC親和色譜IC離子色譜BPC化學(xué)鍵合相NPBPC正相—RPBPC反相—PIC離子對(duì)ISC離子抑制第3節(jié)各類(lèi)高效液相色譜法當(dāng)前30頁(yè)，總共62頁(yè)。一、吸附色譜法

固定相：固體吸附劑為硅膠、氧化鋁等，較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑.有時(shí)也用高分子多孔小球（吸附+分配并兼有小孔凝膠作用）

以固體吸附劑為固定相，基于其對(duì)不同組分吸附能力的差異進(jìn)行混合物的分離。流動(dòng)相：常用混合溶劑，主體溶劑為正己烷或環(huán)己烷，以一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷或丙酮等作為調(diào)節(jié)劑，用于調(diào)整流動(dòng)相的極性。當(dāng)前31頁(yè)，總共62頁(yè)。a.表面多孔型b.無(wú)定形全多孔c.球形全多孔d.堆積全多孔應(yīng)用：主要用于分離能溶于有機(jī)溶劑的極性與弱極性混合物及異構(gòu)體的分離。二、化學(xué)鍵合相色譜法以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法稱(chēng)為化學(xué)鍵合相色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相色譜法。強(qiáng)極性組分后出峰，弱極性組分先出峰當(dāng)前32頁(yè)，總共62頁(yè)。（一）化學(xué)鍵合固定相用化學(xué)反應(yīng)的方法將有機(jī)分子鍵合在載體表面上，所形成的填料稱(chēng)為化學(xué)鍵合固定相，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相?；瘜W(xué)鍵合相已廣泛用于正相與反相色譜法、離子對(duì)色譜法等諸多色譜法中。1、鍵合反應(yīng)化學(xué)鍵合相的載體是硅膠，表面有≡Si—OH，能與合適的有機(jī)化合物反應(yīng)，使具有不同極性功能團(tuán)的有機(jī)分子鍵合在表面而獲得不同性能的化學(xué)鍵合相，它的制備方法主要是用有機(jī)氯硅烷與硅醇基發(fā)生反應(yīng)（硅烷化），生成Si-O-Si-C鍵合相。

當(dāng)前33頁(yè)，總共62頁(yè)。由于空間位阻效應(yīng)，不可能將較大的有機(jī)官能團(tuán)鍵合到全部硅醇基上，使得部分硅醇基未反應(yīng)。

殘余的硅醇基對(duì)鍵合相的性能有很大影響，它可以減小鍵合相表面的疏水性，對(duì)極性溶質(zhì)產(chǎn)生次級(jí)化學(xué)吸附，從而使保留機(jī)制復(fù)雜化，降低了鍵合相填料的穩(wěn)定性，使組分的峰形拖尾。為盡量減少殘余硅醇基，一般在鍵合反應(yīng)后，要用小分子三甲基氯硅烷等進(jìn)行鈍化處理，稱(chēng)封尾。當(dāng)前34頁(yè)，總共62頁(yè)。當(dāng)前35頁(yè)，總共62頁(yè)。2.鍵合相的分類(lèi)（1）非極性鍵合相

這類(lèi)鍵合相表面基團(tuán)為非極性烴基，如十八烷基、辛烷基、甲基與苯基等。十八烷基鍵合相（ODS）是最常用的非極性鍵合相。當(dāng)前36頁(yè)，總共62頁(yè)。1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯固定相：C1固定相：C8固定相：C18非極性鍵合相常用于反相色譜。鍵合烷基的鏈長(zhǎng)增加，極性降低，載樣量增大、k值增大，C18分離效果優(yōu)于C8,C1當(dāng)前37頁(yè)，總共62頁(yè)。（2）中等極性鍵合相

中等極性鍵合相常見(jiàn)的有醚基鍵合相（如YWG-ROR′）。這種鍵合相可作正相或反相色譜的固定相，視流動(dòng)相的極性而定。（3）極性鍵合相常用氨基、氰基鍵合相。分別將氨丙硅烷基[—Si(CH2)3NH2]及氰乙硅烷基[—Si(CH2)2CN]鍵合在硅膠上而制成。它們可用作正相色譜的固定相。（4）離子交換鍵合相離子交換基團(tuán)如-SO3－，-NR3＋鍵合在擔(dān)體表面。當(dāng)前38頁(yè)，總共62頁(yè)。3.鍵合相的性質(zhì)

（1）穩(wěn)定性鍵合相在pH2-8.5范圍內(nèi)穩(wěn)定，太高的pH值會(huì)使硅膠溶解，太低的pH值會(huì)使鍵合的烷基脫落。（2）鍵合量鍵合相的鍵合量常用含碳量(C%)來(lái)表示，按含碳量的不同，可分為高碳、中碳及低碳型鍵合相。當(dāng)前39頁(yè)，總共62頁(yè)。高碳ODS鍵合相：若R1、R2是二個(gè)甲基，構(gòu)成高碳ODS鍵合相

［Si-O-Si(CH3)2-C18H37］。

中碳ODS鍵合相：若R1是氫，R2是氯，氯與硅膠的另一個(gè)硅醇基脫HCl，則生成中碳ODS鍵合相

［（Si-O-)2Si(H)-C18H37］；低碳ODS鍵合相：若R1、R2都是氯，與硅膠的另二個(gè)硅醇基再脫二分子HCl，生成低碳ODS鍵合相

［(Si-O-)3Si-C18H37］。

當(dāng)前40頁(yè)，總共62頁(yè)。（3）表面覆蓋度覆蓋度的大小決定鍵合相是分配還是吸附占主導(dǎo)。

Partisil5-ODS的表面覆蓋度為98％，即殘存2％的硅醇基，分配占主導(dǎo)。

Partisil10-ODS的表面覆蓋度為50％，既有分配又有殘余硅醇基的吸附作用。含碳量大，則載樣量大，保留能力強(qiáng)當(dāng)前41頁(yè)，總共62頁(yè)。（二）正相鍵合相色譜法

最常用的有氰基（-CN）氨基（-NH2）、二醇基（DIOL）極性鍵合相。流動(dòng)相一般用非極性或弱極性有機(jī)溶劑，如正己烷溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑（如氯仿、醇、乙腈等），以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。通常用于分離能溶于有機(jī)溶劑的極性至中等極性的分子型化合物。4.鍵合相的特點(diǎn)①固定相不易流失，壽命長(zhǎng)②選擇性好③穩(wěn)定性好④傳質(zhì)快，柱效高⑤適于作梯度洗脫。當(dāng)前42頁(yè)，總共62頁(yè)。分離選擇性：極性強(qiáng)的組分k大，后洗脫出柱。流動(dòng)相的極性增強(qiáng)，洗脫能力增加，使組分k減小，tR

減小。分離機(jī)制分配：把有機(jī)鍵合層作為一個(gè)液膜看待，溶質(zhì)在兩相的溶解吸附：溶質(zhì)與鍵合極性基團(tuán)間的誘導(dǎo)、氫鍵和定向作用當(dāng)前43頁(yè)，總共62頁(yè)。（二）反相鍵合相色譜法

典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動(dòng)相組成的色譜體系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）鍵合相；流動(dòng)相常用甲醇-水或乙腈-水。

反相色譜的保留機(jī)制還沒(méi)有一致的看法，有分配與吸附之爭(zhēng)，還有疏溶劑理論等。鍵合基團(tuán)的覆蓋率高，分配為主；覆蓋率低，吸附為主。如果覆蓋率高，對(duì)殘余硅醇基封尾，則吸附作用大為降低。當(dāng)前44頁(yè)，總共62頁(yè)。

疏溶劑理論把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的烷基的“分子毛”，這種“分子毛”有強(qiáng)的疏水特性。一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑的作用，將會(huì)從極性流動(dòng)相中被“擠”出來(lái)，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動(dòng)的親合作用，使它離開(kāi)固定相，減少保留值，此即解締過(guò)程。顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。當(dāng)前45頁(yè)，總共62頁(yè)。保留行為的主要影響因素1、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）

極性越弱，疏水性越強(qiáng)，k越大，tR也越大。同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k越大；2、固定相硅膠表面鍵合烷基越大，覆蓋度越大，則溶質(zhì)的k越大。3、流動(dòng)相極性越強(qiáng)，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k越大溶劑種類(lèi)：水為弱溶劑，醇、已腈為強(qiáng)溶劑溶劑比例：水的比例增加，使k增大當(dāng)前46頁(yè)，總共62頁(yè)。稠環(huán)芳烴的分析

固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動(dòng)相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min

流速：1mL/min

柱溫：30oC

柱壓：70104Pa

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器當(dāng)前47頁(yè)，總共62頁(yè)。反相鍵合相色譜法是應(yīng)用最廣的色譜法，主要用于分離非極性至中等極性的各類(lèi)分子型化合物.派生的離子抑制法、離子對(duì)法還可用于酸、堿、鹽的分析。在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。（三）反相離子對(duì)色譜法

把離子對(duì)試劑加入到含水流動(dòng)相中，組分離子在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離子（counterion）生成中性離子對(duì)，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使k增加，改善分離效果。當(dāng)前48頁(yè)，總共62頁(yè)。原理

樣品離子反離子

中性締合物（只溶于有機(jī)相）

有機(jī)堿

A固定相

+

?離子對(duì)試劑水相當(dāng)前49頁(yè)，總共62頁(yè)。影響容量因子的因素離子對(duì)試劑的種類(lèi)和濃度：碳鏈長(zhǎng)度增加，溶質(zhì)的k增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升高，溶質(zhì)的k增大流動(dòng)相的pH：有利于組分和離子對(duì)試劑離子化時(shí)（離子對(duì)的形成），組分的k值最大固定相、流動(dòng)相性質(zhì)（同一般RP-HPLC）。

離子對(duì)試劑的選擇分析酸類(lèi)或帶負(fù)電荷物質(zhì)：用季銨鹽，如四丁基銨磷酸鹽（TBA）和溴化十六烷基三甲基銨（CTAB）等當(dāng)前50頁(yè)，總共62頁(yè)。分析堿類(lèi)或帶正電荷的物質(zhì)：用烷基磺酸鹽或硫酸鹽，如正戊烷基磺酸鈉（PICB5）、正己烷基磺酸鈉（PICB6）、適用范圍：有機(jī)酸、堿、鹽等離子型和非離子型化合物的混合物。反相離子對(duì)色譜很易實(shí)現(xiàn)，用ODS柱，在流動(dòng)相甲醇-水或乙腈-水中加入0.03～0.01mol/L的離子對(duì)試劑即可。反相離子對(duì)色譜法分析奶粉中三聚氰胺流動(dòng)相：含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液(pH3.0):甲醇=7:3當(dāng)前51頁(yè)，總共62頁(yè)。（四）離子抑制色譜法

用反相色譜法，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，抑制組分的解離，增加它在固定相中的溶解度，以達(dá)到分離有機(jī)弱酸、弱堿的目的，這種技術(shù)稱(chēng)為離子抑制色譜法。1．抑制劑通過(guò)向流動(dòng)相中加入少量弱酸（常用醋酸）、弱堿（常用氨水）或緩沖鹽（常用磷酸鹽及醋酸鹽）為抑制劑，調(diào)節(jié)pH值，抑制組分的解離，增加中性分子存在的幾率。如分離十二烷酸時(shí)，可在流動(dòng)相乙腈/水中加入少量乙酸，以抑制十二烷酸的離解當(dāng)前52頁(yè)，總共62頁(yè)。2．容量因子及其影響因素除與反相色譜法有相同的影響因素外，主要受流動(dòng)相的pH值的影響。對(duì)于弱酸，即流動(dòng)相的pH值小于它的pka值時(shí)，主要以分子形式HB存在，k值增大，tR增大；反之，pH＞pka，組分以離子形式B為主，k值變小，tR減小，對(duì)于弱堿，情況相反。當(dāng)前53頁(yè)，總共62頁(yè)。3．適用范圍

適用于3.0≤pKa≤7.0的弱酸；6.0≤pKb≤7.0的弱堿。對(duì)于pKa＜3.0的酸及pKb<6.0的堿，應(yīng)采用離子對(duì)色譜法或離子交換色譜法。在進(jìn)行離子抑制色譜法時(shí)，流動(dòng)相的pH需在2～8之間

流動(dòng)相的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)至比組分的pK值大（對(duì)堿）或?。▽?duì)酸）1~2個(gè)單位以上，使分子形式的的分布系數(shù)較大，有較大的k值。當(dāng)前54頁(yè)，總共62頁(yè)。（四）分離類(lèi)型的選擇當(dāng)前55頁(yè)，總共62頁(yè)。第4節(jié)改善分離度的方法在高效液相色譜分析中，實(shí)際上固定相種類(lèi)的選擇十分有限，當(dāng)色譜柱選定后，主要通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成改善分離.雖然n也受流動(dòng)相的影響，但主要由色譜柱的性能所決定，溶劑系統(tǒng)主要影響容量因子k和分配系數(shù)比α。選擇不同種類(lèi)的溶劑或改變多元溶劑系統(tǒng)的配比，都會(huì)改變k和α值，影響分離度。當(dāng)前56頁(yè)，總共62頁(yè)。一、對(duì)流動(dòng)相的要求①與固定相不互溶②純度高不純的溶劑會(huì)引起基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽峰”③粘度低若使用高粘度溶劑，勢(shì)必增高壓力，不利于分離。常用的低粘度溶劑有水、丙酮、甲醇、乙晴等。但粘度過(guò)于低的溶劑也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它們易在色譜柱或檢測(cè)器內(nèi)形成氣泡，影響分離.

當(dāng)前57頁(yè)，總共62頁(yè)。④與檢測(cè)器匹配⑤對(duì)樣品有適宜的溶解度⑥毒性小1.加入調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)k二、改善分離度的方法使用UV檢測(cè)器時(shí)，溶劑截止波長(zhǎng)要小于測(cè)量波長(zhǎng)；使用折光率檢測(cè)器，溶劑的折光率要與待測(cè)物有較大差異。當(dāng)前58頁(yè)，總共62頁(yè)。

通常希望組分的容量因子k保持在2~10范圍內(nèi)，若組分的k