動(dòng)物細(xì)胞工程上課

關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞工程上課第一頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第二頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)動(dòng)物生物工程常用的技術(shù)第三頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單細(xì)胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：原第四頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變第五頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日思考：2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體第六頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理：細(xì)胞增殖第七頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日1）原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱都為原代細(xì)胞培養(yǎng)。（從機(jī)體取出——10代以內(nèi)的細(xì)胞）2）傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。（原代細(xì)胞——沒有終點(diǎn)）4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中幾個(gè)重要的概念第八頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日第九頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日3)細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上（單層）這種現(xiàn)象叫細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。4)接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。5）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制第十頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日５、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)（2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)（5）作為基因工程的受體細(xì)胞第十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）６、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件第十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日７、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)目的細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白第十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)：動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.2、克隆動(dòng)物：用核移植的方法得到的動(dòng)物。第十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日

3、克?。菏侵竿ㄟ^無(wú)性繁殖而產(chǎn)生的具有完全相同的遺傳物質(zhì)組成的一群細(xì)胞或者生物的個(gè)體?？寺≡谙ＥD語(yǔ)中是“小樹枝葉”的意思，用以指無(wú)性繁殖物，現(xiàn)在則指?jìng)€(gè)體、細(xì)胞、基因等不同水平上的無(wú)性繁殖物，克隆也可理解為復(fù)制。第十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日第十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日第十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日第十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日１、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？思考：（Ｐ４９）２、用于和核移植的供體細(xì)胞一般都選用１０代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，只是為什么？３、你認(rèn)為用上述體細(xì)胞和移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了１００％的復(fù)制嗎？為了使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自具有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞。動(dòng)物體細(xì)胞培養(yǎng)一般當(dāng)傳代至１０－５０代左右時(shí)，部分細(xì)胞的核型可能會(huì)發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變化，而１０代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持二倍體核型，所以，為了保持供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，一般選１０代以內(nèi)的細(xì)胞。第十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日４、動(dòng)物細(xì)胞克隆過程中、選用去核卵（卵母）細(xì)胞的原因是什么？１）體積大、易操作。２）卵細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)含有促使核表達(dá)全能性的的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件。第二十頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日３、體細(xì)胞和移植技術(shù)的應(yīng)用前景：１）在畜牧業(yè)方面：加加速遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁殖。２）保護(hù)瀕危動(dòng)物：增加瀕危動(dòng)物存活量。３）在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域：（１）作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)藥物。（２）作為異種器官供體。（３）核移植克隆動(dòng)物可以作為研究胚胎發(fā)育過程、生物衰老過程生物。（４）作為追蹤疾病發(fā)展過程、疾病治療過程的疾病模型。第二十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景第二十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日４.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題1)通過和一只動(dòng)物產(chǎn)生的克隆動(dòng)物成功率低。２）絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康為題．第二十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日誘導(dǎo)融合人細(xì)胞鼠細(xì)胞熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)40分鐘后370C資料人-鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)(熒光標(biāo)記法)實(shí)驗(yàn)結(jié)論:細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)是可以運(yùn)動(dòng)的第二十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體第二十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日一、動(dòng)物細(xì)胞融合

細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合

受精作用細(xì)胞融合的概念：是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞的過程。第二十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日動(dòng)物細(xì)胞融合第二十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒第二十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核第二十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？使病毒融合活性保持，感染活性喪失。第三十頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、單克隆抗體什么是抗體？

第三十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日問題：抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？什么是抗體？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。第三十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日閱讀教材Ｐ５２Ｐ５３回答下列問題：１、傳統(tǒng)生產(chǎn)抗體的方法是什么？２、傳統(tǒng)方法生產(chǎn)的抗體缺點(diǎn)是什么？３、為什么在自然狀態(tài)下，就是一種抗原刺激級(jí)動(dòng)物產(chǎn)生的特異性抗體就有成千上萬(wàn)種呢？４、要得到某一種特異性抗體，我們應(yīng)該怎么做？５、在體外培養(yǎng)條件下Ｂ淋巴細(xì)胞能無(wú)限繁殖嗎？第三十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日

一個(gè)天然抗原物質(zhì)可有多種和多個(gè)決定簇。教材中所說的抗原分子刺激淋巴細(xì)胞，說的也就是抗原決定簇刺激B淋巴細(xì)胞，使其分裂分化出特異性的效應(yīng)B細(xì)胞，分泌特異性抗體。第三十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日B淋巴細(xì)胞與抗體

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。第三十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既可以大量繁殖，也可以產(chǎn)生抗體。第三十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日單克隆抗體

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無(wú)性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：

特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量高第三十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應(yīng)B細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原第三十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體(選雜交瘤細(xì)胞）（選可以產(chǎn)生抗體的細(xì)胞）第三十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日(選擇雜交瘤細(xì)胞）（選擇可產(chǎn)生抗體的細(xì)胞）第四十頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞第四十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體３、閱讀教材Ｐ５３單克隆抗體制備過程流程圖，科學(xué)家在選擇得到可以產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，又是如何生產(chǎn)抗體的呢？一種方法是：將雜交瘤細(xì)胞在體外大規(guī)模的培養(yǎng)，從細(xì)胞液中就能提取大量單克隆抗體。另一種方法是：把雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹水增殖，再?gòu)男∈蟾骨粌?nèi)提取單克隆抗體第四十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。第四十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體第四十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)第四十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC第四十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）

A．動(dòng)物細(xì)胞融合

B．胚胎移植

C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

D．核移植Ｃ第四十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，編輯于2023年，星期日２．在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是