殼寡糖的酶法制備和分離技術(shù)可行性研究報告

2023年度新苗人才計劃項目項目名稱：殼寡糖的酶法制備和分離技術(shù)的研究立項背景及意義殼寡糖(Chitooligosaccharide)，又名甲殼低聚糖，是由氨基葡萄糖通過β-1,4-糖苷鍵連接而成的聚合度約為2-20的低聚糖，其分子量低于5000，具有穩(wěn)定的三維結(jié)構(gòu)。殼寡糖可運用殼聚糖經(jīng)過生物酶技術(shù)降解制得。殼聚糖廣泛存在于自然界的蝦殼、蟹殼和真菌中，雖然有特殊的生物活性，但由于其分子量大、水溶性差，在人體內(nèi)不易被吸收而使其應用受到限制。作為一種生物技術(shù)產(chǎn)品，殼寡糖幾乎包括了所有殼聚糖的所有優(yōu)點，它具有良好的生物相容性和生物降解性、親水性、吸附性、生物學活性等多種理化特征以及天然、高效、毒副作用少、抗藥性不顯著、性能多樣等特點?？茖W研究表明，殼寡糖的功能作用和生物活性比起殼聚糖將提高數(shù)十倍、應用領(lǐng)域更加廣泛、人體吸收率近100%（殼聚糖吸收率6.48%），而且增加了促進鈣吸收的新的功能作用，具有較高的科技含量和附加值，發(fā)達國家稱其為“軟黃金”。殼寡糖具有三調(diào)（免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)pH值、調(diào)節(jié)荷爾蒙）、三降（降血脂、降血糖、降血壓）、三排（排膽固醇、排重金屬離子、排毒素）、三抑（抑制癌細胞、抑制癌細胞轉(zhuǎn)移、抑制癌毒素）等功能，同時，還具有抗自由基、防輻射、抗炎、止血以及促進傷口愈合等功能。殼寡糖及其衍生產(chǎn)品可廣泛應用于醫(yī)藥、保健、食品、日化、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。在醫(yī)藥保健領(lǐng)域具有提高免疫、活化細胞、調(diào)節(jié)血糖血脂血壓膽固醇、預防治療癌癥、強化肝功、促進鈣吸收、增殖腸道有益菌等功能；在食品飲料領(lǐng)域是一種良好的健康食品添加劑，可增殖乳酸菌、雙歧桿菌等人體有益菌100倍以上；在日化領(lǐng)域具有營養(yǎng)皮膚、抑菌、保濕等功能，性能優(yōu)于傳統(tǒng)的透明質(zhì)酸等產(chǎn)品；在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域可激活植物免疫系統(tǒng)和酶系活性，能促進植物生長、提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)、增強抗病力、增殖生物菌肥有益菌群等，具有藥肥雙效功能，被譽為“不是農(nóng)藥的農(nóng)藥，不是化肥的化肥”，市場前景極其廣闊。目前殼寡糖產(chǎn)品的年需求量在6000噸以上。在精細化工領(lǐng)域，由于殼寡糖的綠色天然的特性符合世界日化產(chǎn)品的發(fā)展趨勢，含天然活性物質(zhì)的化妝品順應回歸自然、科學美容的消費趨勢，歐洲現(xiàn)已有60多個與殼寡糖相關(guān)的化妝品品牌，年需求殼寡糖1500噸。我國化妝品年銷售額從1982年的2億元人民幣發(fā)展到2023年的400億元，居亞洲第二位。在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，從中國產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究中心統(tǒng)計可知，2023年我國醫(yī)藥生物技術(shù)工業(yè)總產(chǎn)值將達到400億-500億元。在保健食品領(lǐng)域，韓國于1996年即批準殼寡糖為功能性保健食品，我國現(xiàn)在已有許多保健品及藥品等年需求殼寡糖上百噸的保健食品生產(chǎn)廠家，國內(nèi)許多醫(yī)藥保健品公司正在申報殼寡糖保健食品文號，預計年需求量將以高于30%的速度遞增。在農(nóng)林畜牧領(lǐng)域，因殼寡糖具有良好的抗病蟲害功能,且有安全、微量、高效、成本低等優(yōu)勢，可使水果、蔬菜、糧食增產(chǎn)10%-30%，因而可以應用于生物農(nóng)藥產(chǎn)品，部分替代化學農(nóng)藥。目前我國農(nóng)業(yè)病蟲害共2023余種，受災面積數(shù)10億畝。因此殼寡糖在農(nóng)林畜牧上的應用對我國的農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義，以殼寡糖為基礎的生物農(nóng)藥將有廣闊的發(fā)展空間?？萍疾恳褜ⅰ皻す烟切庐a(chǎn)品的開發(fā)應用”列為國家“九五”攻關(guān)計劃項目和“十五”招投標項目，要求建立數(shù)條年產(chǎn)500噸以上的殼寡糖生產(chǎn)線，到2023年總產(chǎn)值可達1100億-1300億元，從而滿足國內(nèi)市場的需求。殼寡糖的級別不同，售價差額較大。農(nóng)業(yè)專用殼寡糖市場價為400元/公斤；食品級殼寡糖市場價為600元/公斤；而化妝品級殼寡糖市場價為150元/公斤。隨著殼寡糖應用范圍的不斷擴大，加之作為一種性能優(yōu)異的基礎原料，市場需求量將呈穩(wěn)步上升趨勢。同時，殼寡糖作為一種中間原料，出口市場穩(wěn)定。近年來，隨著我省海產(chǎn)品加工業(yè)的發(fā)展，尤其是甲殼素綜合利用產(chǎn)業(yè)的興起，我省逐步成為東南亞地區(qū)海產(chǎn)品加工利用中心和主要的甲殼素產(chǎn)業(yè)發(fā)展基地。。2023年全省甲殼素制品的直接經(jīng)濟總產(chǎn)值約10億元左右（與其相關(guān)的、間接的紡織、食品、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的產(chǎn)值達數(shù)百億元）。在此基礎上，本項目從殼聚糖的局限性出發(fā)，著重研究了通過專一性酶法技術(shù)降解殼聚糖，制備聚合度均一的殼寡糖產(chǎn)品，將使產(chǎn)品的附加值得到大幅度地提升。因此，本項目的實施，對于有效利用甲殼素資源，促進我省甲殼素行業(yè)健康發(fā)展，意義重大。由于項目原料來源方便、價格低廉，將大大降低了加工企業(yè)的生產(chǎn)成本，滿足了市場緊缺，且安全無公害，推廣應用前景廣闊，對全國的水產(chǎn)加工業(yè)發(fā)展具有重要影響。國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢開發(fā)應用殼寡糖是甲殼質(zhì)行業(yè)的制高點，也是當今生物制藥技術(shù)的一個亮點。目前，其科研開發(fā)主要集中在日本、韓國等國家。殼寡糖的主要制備方法有化學法、物理法和生物法?；瘜W法主要包括酸水解法、氧化法、超臨界流體法、配位降解法等。目前，國內(nèi)對H2O2氧化降解法研究較多，可在降解過程中伴隨的副反應還需要探索出有效的遏止方法，另外必須注意氧化降解對產(chǎn)品活性的影響以及存在殘留的H2O2對食品安全性是否產(chǎn)生隱患也是值得考慮。物理法包括微波法、超聲波法、光降解法、γ射線法等。生物法主要有酶法降解、反應器和酶降解、糖基轉(zhuǎn)移法等。其中已用于工業(yè)化生產(chǎn)的有酸水解法、氧化降解法,但是存在產(chǎn)品相對分子質(zhì)量分布較寬,均一性差，分離純化難度高以及污染嚴重等問題；物理方法也有一定的缺點,不能作為主體方法用于殼寡糖的制備；酶降解法條件溫和,產(chǎn)物不用脫鹽，工藝易于控制,易于得到所需聚合度的殼寡糖,并且對環(huán)境不產(chǎn)生污染，是較理想的制備方法，特別是酶降解和反應器聯(lián)合方法,已經(jīng)在產(chǎn)業(yè)化道路上邁出第一步，但在制備工藝上還有許多有待改進提高產(chǎn)量的地方。20世紀90年代末，酶法生產(chǎn)殼寡糖在日本、韓國實現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。我國對該產(chǎn)品的研究雖起步較晚，但近年來做了大量的工作，并趨于活躍。2023年8月，山力、濟南海得貝公司利用復合酶法制備殼寡糖的生產(chǎn)線正式投產(chǎn)，殼寡糖在我國第一次實現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。復合酶比起專一性酶制備殼寡糖，所得降解產(chǎn)物相對分子量分布不容易控制，聚合度不夠均一。但因為目前市場上專一性酶價格昂貴，如何尋找到降解效果好、成本又不高的專一性酶，是一個急需解決的技術(shù)難題。而這一技術(shù)難題的解決無疑將為我國整個甲殼素行業(yè)的發(fā)展提供幫助。三、項目主要研究開發(fā)內(nèi)容、技術(shù)關(guān)鍵以及科研創(chuàng)新的主要方式（一）主要研究內(nèi)容：1、專一性酶菌種的篩選。通過制作以殼聚糖為唯一碳源的平板篩選分離培養(yǎng)基進行篩選。

采用平板劃線分離法接種，放入30℃2、產(chǎn)酶菌種的發(fā)酵培養(yǎng)。根據(jù)已優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)條件進行發(fā)酵培養(yǎng)，對發(fā)酵上清液中粗酶，采用75%飽和度乙醇沉淀，獲得粗酶粉，測定酶活力，低溫保存。3、殼寡糖的酶法制備和性質(zhì)研究通過還原端基、酶解產(chǎn)物聚合度、水解液調(diào)堿性后透光率變化測定以及酶解產(chǎn)物的TLC、HPLC分析，研究殼聚糖酶降解殼聚糖過程中殼聚糖脫乙酰化度、殼聚糖濃度、酶用量、反應時間和pH值對酶促反應速率和產(chǎn)物聚合度的影響。4、研究殼寡糖的分離技術(shù)、純化工藝；超濾/離子交換樹脂5、殼寡糖的含量檢測方法研究；采用高效液相色譜法(HPLC)、測定低聚糖類的含量。6、殼寡糖產(chǎn)品質(zhì)量標準的制定。（二）關(guān)鍵技術(shù)：1、高活力殼聚糖酶制劑的制備以及殼聚糖酶酶活的測定；2、殼寡糖的酶法制備技術(shù)；3、殼寡糖的分離技術(shù)；4、殼寡糖制品分析檢驗技術(shù)，包括還原端基、酶解產(chǎn)物聚合度、水解液調(diào)堿性后透光率變化的測定；殼寡糖的含量和純度、相對分子質(zhì)量、雜質(zhì)含量的測定；殼寡糖水溶性、水分的測定以及酶解產(chǎn)物的TLC、HPLC分析。（三）創(chuàng)新的主要方式：1、殼寡糖產(chǎn)品加工采用酶法工藝，克服了傳統(tǒng)化學法分子量分布范圍寬、易變色的缺點，且不會帶來環(huán)境污染問題2、為殼聚糖的高值化利用提供了新途徑。四、項目預期目標（一）主要技術(shù)經(jīng)濟指標1、目標：（1）以殼聚糖為原料，采用酶法的技術(shù)有效地制備、分離殼寡糖；（2）提供完整的加工技術(shù)研究報告，包括提取工藝、分離技術(shù)、產(chǎn)品質(zhì)量研究、操作技術(shù)流程等。2、殼寡糖產(chǎn)品技術(shù)指標（1）水分含量

<7%

（105℃（2）分子量為500-5000Da（Waters600E檢測）；（3）不溶物≤1.0％；（4）粘度（5％）≤10mPaS；（5）pH4-6

；（6）脫乙酰度≥70％；（7）六、七、八糖含量達到50%以上；（8）分散度小于1.5；3、經(jīng)濟指標（1）發(fā)表相關(guān)學術(shù)論文1篇；（2）提供符合質(zhì)量標準的樣品。（二）應用或產(chǎn)業(yè)化前景殼寡糖在食品加工中可用殼寡糖做填充劑、增色劑、脫色劑、穩(wěn)定劑和保鮮包狀膜。殼寡糖的應用范圍在不斷擴大，受到了國家的高度重視。目前市場上殼寡糖價格比較高，一直處于求大于供的現(xiàn)象。如何有效地解決這一問題，就需要研究和探索可行的方法來制備殼寡糖。酶法生產(chǎn)殼寡糖項目，將有利促進了我國殼寡糖行業(yè)的發(fā)展。與其它降解法相比，酶降解法具有反應條件溫和，降解過程及降解產(chǎn)物相對分子量分布容易控制，制備的低聚糖生物活性高，產(chǎn)物不用除鹽。過程容易控制，且不對環(huán)境造成污染等優(yōu)勢，是理想的殼寡糖生產(chǎn)方法。本項目的制備方法解決了產(chǎn)品的安全性問題，減少資源浪費，滿足市場要求，應用前景廣闊。但低聚殼聚糖的制備，尤其是聚合度6-8殼寡糖的制備大都處于實驗室的研究階段。因此，本項目擬在實驗室研究的基礎上，通過專一性酶法制備殼寡糖，進一步發(fā)展成產(chǎn)業(yè)化，以滿足國內(nèi)外對殼寡糖的需求。五、項目實施方案（一）技術(shù)路線1、采用專一性酶解法進行制備殼寡糖；2、殼寡糖的分離，純化精制技術(shù)研究采用水解產(chǎn)物薄層層析(TLC)分析、水解產(chǎn)物(HPLC)分析。3、提取率及品質(zhì)分析采用數(shù)理統(tǒng)計的方法來分析提取率的高低，此外，采用相應的方法進行質(zhì)量、水溶性、水分的檢測。4、技術(shù)流程篩選菌種，篩選菌種，菌種擴大培養(yǎng)。碳源、氮源、pH碳源、氮源、pH溫度、培養(yǎng)時間高活力殼聚糖酶制劑的制備高活力殼聚糖酶制劑的制備殼聚糖的脫乙酰度殼聚糖的分子量殼寡糖的殼聚糖的脫乙酰度殼聚糖的分子量殼寡糖的酶解殼寡糖的分離殼寡糖的分離殼寡糖樣品分析與檢驗殼寡糖樣品分析與檢驗（二）組織方式以組員分工合作的形式來負責完成此項課題（三）課題分解（1）菌種的篩選；（2）產(chǎn)酶菌種的發(fā)酵培養(yǎng)；（3）殼寡糖的酶法制備和性質(zhì)研究；六、計劃進度安排日期工作進度2023年7月至2023年1月篩選產(chǎn)專一性殼寡糖酶的菌種并對菌種進行擴大培養(yǎng)的技術(shù)。殼寡糖的酶法制備，以及殼寡糖的分離、純化技術(shù)。2023年2月至2023年3月殼寡糖產(chǎn)品分析與檢驗。2023年4月至2023年6月進一步完善并優(yōu)化生產(chǎn)技術(shù)，完成項目總結(jié)，準備項目鑒定。七、現(xiàn)有工作基礎與條件實驗室具備實驗所需的設備：TGL-16C臺式離心機上海安亭科學儀器廠電熱恒溫水浴鍋江蘇金壇縣國華儀器廠XW-80A漩渦混合器上海醫(yī)科大學儀器廠隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱上海市躍進醫(yī)療器械儀器一廠HYG-A型回轉(zhuǎn)恒溫調(diào)速搖瓶柜江蘇太倉市實驗設備廠手提式滅菌鍋無錫市第二醫(yī)療器械廠超凈臺蘇州凈化設備廠磁力攪拌器江蘇江陰科研器械廠WFZ-W2100紫外/可見分光光度計尤尼柯(上海)儀器W1100紫外分光光度計北京瑞利分析儀器公司MettlerToledo320-5pH計上海梅特勒烏氏粘度計八、經(jīng)費預算省級科技計劃項目經(jīng)費預算表項目名稱：金額單位：萬元序號預算科目名稱合計省財政撥款經(jīng)費地方部門配套經(jīng)費自籌經(jīng)費11、設備費2（1）購置設備費3（2）試制設備費4（3）設備租賃費52、材料費0.363、測試化驗加工費0.1574、燃料動力費85、差旅費0.196、會議費0.05107、合作、協(xié)作研究與交流費118、出版/文獻/信息傳播/知識產(chǎn)權(quán)事務費0.15129、人員勞務費0.051310、專家咨詢費1411、管理費1512、其他開支16經(jīng)費總計0.8

一、工程概況忠縣白石鎮(zhèn)兩河片區(qū)供水工程建設規(guī)模1000m3/d規(guī)模水廠一座，水源為紅旗水庫，經(jīng)遼陰巖凈水廠常規(guī)工藝處理后，用配水管道向用戶供水。該項目位于白石鎮(zhèn)華山村，主要項目有反應沉淀池、重力式無閥濾池、清水池、加氯加藥房、管理用房、減壓池、配水管、圍墻、進場道路及廠區(qū)道路、PE100（160、140、125、110、90、75、63、50、40、32）管道約40公里等。主要解決白石鎮(zhèn)白花村、關(guān)金村、華山村、望巖村、中坪村5個村5617人的飲水安全問題。1、建設四方建設單位：忠縣水務服務中心設計單位：重慶布澤水利電力勘測設計有限公司監(jiān)理單位：北京市中冠水利工程監(jiān)理有限公司重慶分公司施工單位：四川山江建工集團有限公司二、工期工期：合同工期為：20**年**月**日到20**年**月**日。實際工期20**年**月**日到20**年**月**日。在建設單位的正確部署下，組織措施落實到位，以各行政村為單元，切實做好政策處理，組織平行流水施工，使得各項工作開展順利，按時完成了本工程的施工任務。三、主要施工方法一、PE100管施工施工準備（1）施工技術(shù)人員認真熟悉圖紙，領(lǐng)會設計意圖，對圖紙中發(fā)現(xiàn)的問題及時與業(yè)主、監(jiān)理及設計人員聯(lián)系。熟悉PE100管的一般性能，掌握必須的操作要點。（2）在各項預制加工項目開始前，根據(jù)設計施工圖編制材料計劃，將需要的材料、設備等按規(guī)格、型號準備好，運至現(xiàn)場。（3）材料設備要求：管材和管件的內(nèi)外壁應光滑平整，無氣泡、裂紋、脫皮和明顯的痕紋、凹陷，色澤應基本一致。管材的端面應垂直于管材的軸線。管件應完整、無缺損、無變形。到現(xiàn)場的管材、管件等自檢合格后并經(jīng)監(jiān)理、業(yè)主驗明材質(zhì)，核對質(zhì)保書，規(guī)格、型號等，合格后方能入庫，并分別作好標識。（4）材料的保存：管件和管材不應長期置于陽光下照射，為避免管子在儲運時彎曲，堆放在平整的地方且堆置高度不得超過1.5米，管件逐層堆碼。搬運管材和管件時，應小心輕放，避免油污，嚴禁劇烈撞擊，與尖銳觸碰和拋、摔、拖。施工現(xiàn)場與材料存放處溫差較大時，于安裝前將管件和管材在現(xiàn)場放置一定時間，使其溫度接近施工現(xiàn)場環(huán)境溫度。施工條件(1)施工圖紙及其他技術(shù)文件齊全,進行圖紙技術(shù)交底,滿足施工要求。(2)施工方案、施工技術(shù)、材料機具供應等能保證正常施工。(3)施工現(xiàn)場滿足管道施工的條件。管道裁剪及連接1、管道的裁剪切割管材須端面垂直于管軸線，切割時使用管剪或管道切割機，必要時用鋒利的鋼鋸，對其斷面去除毛邊和毛刺。管徑較小（De20～De40）時用管剪比較方便，管徑較大時用管道切割機或鋼鋸裁剪管道，在裁剪前應在裁剪的位置畫好印記，確保管材端面垂直于管軸線。2、管道的連接（1）同種材質(zhì)的給水聚丙烯管及管配件之間安裝可采用熱熔連接或電熔連接，安裝應使用專用熱熔或熱熔工具。暗敷在地坪面內(nèi)的管道不得采用絲扣或法蘭連接。（2）管道一般熱熔連接，以下介紹熱熔連接的步驟：1）接通熱熔以電源，到達工作溫度指示燈亮后開始操作；2）為防止可能出現(xiàn)的細小裂紋和管道的損傷，在操作前，將管材兩端各切下4-5厘米，以去掉受損的端口。再擦拭管材與管件的端面保證清潔、干燥、無油；試壓及沖洗消毒1、試壓所有的安裝管網(wǎng)都要排空并進行壓力試驗。冷水管試驗壓力應為管道系統(tǒng)工作壓力的1.5倍，但不得小于1.6MPa；（1）試驗的準備水壓試驗時間應在熱熔管道連接24小時后進行，在管道安裝完畢之后而尚未隱封起來之前，要先向管路內(nèi)通水并排出氣體。如果可能的話，要把壓力泵按放在系統(tǒng)的最低處。采用能夠讀出變化值為0.01MPa壓力的壓力表，壓力表要安裝在被試管網(wǎng)的最低點。（2）試驗增大壓力到規(guī)定的試驗壓力值。一小時之后開始試驗。在這個時期雖然有壓力損失，也不能增大壓力。試驗壓力變化要小于或等于0.05MPa。在工作壓力的1.15倍狀態(tài)下，穩(wěn)壓2小時，壓力降不得超過0.03MPa，同時檢查各連接處不得滲漏。對試壓管道應采取安全有效的固定保護措施,但接頭部位必須明露。此項試驗在各末端開口處用管帽封堵,所有配水器具、水表均不安裝。為了能正確地辨別隱蔽管道的真實位置,隱蔽后的管道應在地面用紅色油漆標識管道位置,防止在土建和其他工種施工過程中破壞管道。（3）管道通水及沖洗消毒（1）管道通水水壓試驗全部合格后,在供水設備具備供水條件,減壓裝置已調(diào)至規(guī)定的數(shù)值,各用戶末端的配水器具安裝完畢,室內(nèi)外排水系統(tǒng)和設施均具備使用條件的情況下,可進行全系統(tǒng)通水試驗。其目的在于檢驗供水系統(tǒng)的供水能力、水壓是否滿足設計和規(guī)范規(guī)定。（2）管道沖洗消毒給水管道系統(tǒng)在驗收前應進行通水沖洗。沖洗水流速宜>2m/s,沖洗時應不流死角,每個配水點龍頭都應打開,在系統(tǒng)最低點設放水口,直至沖洗出口處排水水質(zhì)與進水相當為止。管道沖洗完在使用前應采用游離氯濃度為20～30mg/L的水灌滿管道進行消毒,含氯水在管中應靜置24h以上。管道消毒后，用飲用水沖洗，并經(jīng)衛(wèi)生監(jiān)督管理部門取樣檢驗，水質(zhì)符合現(xiàn)行的國家標準《生活飲用水衛(wèi)生標準》后，方可交付使用。材料的節(jié)約1、管件的合理使用由于PE管配件的價格比較昂貴，在管道安裝中盡量減少管配件的使用，尤其是管徑較大的干立管更應注意管件的合理使用質(zhì)量控制措施在施工前,先進行包括工程特點、設計要求及本工藝規(guī)定內(nèi)容的施工技術(shù)交底。增強施工人員的質(zhì)量意識,調(diào)集責任心強、經(jīng)驗豐富的人員參與施工。設立專職質(zhì)檢員進行過程控制。保管好各類施工機具,特別是要保證熱熔焊接機處于良好的工作狀態(tài)。設置嚴密的質(zhì)量控制體系,實行分級控制,每道工序都要進行檢查,合格后方可進入下道工序。一、溝槽開挖（1）溝槽開挖前工作開槽前要認真調(diào)查了解地上地下障礙物，以便開槽時采取妥善加固保護措施，根據(jù)業(yè)主方提供的地下管線資料和我公司的現(xiàn)場調(diào)查，統(tǒng)計出現(xiàn)況地下管線情況，采取有效措施加以保護。（2）溝槽開挖形式根據(jù)設計圖中設計管道的規(guī)格及埋置深度以及規(guī)范要求來確定溝槽開挖的形式。（3）開挖方法a.土方開挖采用機械開挖，槽底預留20cm由人工清底。開挖過程中嚴禁超挖，以防擾動地基。對于有地下障礙物的地段由人工開挖，嚴禁破壞。b.溝槽開挖盡量按先深后淺順序進行，以利排水。c.挖槽土方處置，按現(xiàn)場暫存、場外暫存、外棄相結(jié)合的原則進行。開槽土方凡適宜回填的土選擇妥善位置進行堆放，但不得覆蓋測量等標注，均暫存于現(xiàn)場用于溝槽回填?；靥钔潦┕で爸贫ê侠硗练秸{(diào)配計劃，作好土方平衡少土方外運及現(xiàn)場土方調(diào)運。d.開槽后及時約請各有關(guān)人員驗槽，槽底合格后方可進行下道工序。如遇槽底土基不符合設計要求，及時與設計、監(jiān)理單位及地勘部門聯(lián)系，共同研究基底處理措施，方可進行下道工序。二、下管在溝槽檢底后，經(jīng)核對管節(jié)、管件位置無誤后立即下管。下管時注意承口方向保持與管道安裝方向一致，同時在各接口處掏挖工作坑，工作坑大小為方便管道撞口安裝為宜。七、檢查第一節(jié)管與第二節(jié)管安裝要準確，管子承口朝來水方向。安完第一節(jié)管后，用鋼絲繩和手板葫蘆將它鎖住，以防止脫口。安裝后，檢查插口推入承口的位置是否符合要求，用探尺插入承插口間隙中檢查膠圈位置是否正確，并檢查膠圈是否撞勻。八、安裝注意事項（1）管子需要截短時，插口端加工成坡口形狀，割管必須用球墨鑄鐵管專用切割機，嚴禁采用氣焊。（2）上膠圈之前注意，不能把潤滑劑刷在承口內(nèi)表面，不然會導致接口失敗。十、溝槽回填（1）水壓試驗前，除接口處管道回填至管頂50cm以上（2）管道兩側(cè)回填高差不超過20cm。（3）回填分層進行。管道兩側(cè)和管頂以上50cm用木夯夯實，每層虛鋪厚度不大于20cm；管頂以上50cm至地面用蛙式打夯機夯實，每層虛鋪厚度20-25cm；應做到夯夯相連，一夯壓半夯。（4）分段回填時，相鄰兩段接茬呈階梯形。（5）回填土不得有石塊、房渣土等不能夯實的土質(zhì)。十一、水壓試驗（1）進行水壓實驗應統(tǒng)一指揮，明確分工，對后背、支墩、接口、排氣閥等都應規(guī)定專人負責檢查，并明確規(guī)定發(fā)現(xiàn)問題時的聯(lián)絡信號。（2）管道接口完成后，用短管甲、短管乙及盲板將試壓管段兩端及三通處封閉，試壓管段除接口外填土至管頂以上50cm并夯實。做好后背及閘門、三通等管件加固。由低點進水，高點排氣，注滿水后浸泡24小時后，在試驗壓力下10min降壓不大于0.05Mpa時，為合格。（3）水壓實驗應逐步升壓，.每次升壓以0.2Mpa為宜，每次升壓以后，穩(wěn)壓檢查沒有問題時再繼續(xù)升壓。（4）水壓實驗時，后背、支撐、管端等附近不得站人，檢查應在停止升壓時進行。五、工程質(zhì)量（一）質(zhì)量目標及保證體系本標工程施工質(zhì)量目標是“合格”等級，在監(jiān)理工程師和本公司的監(jiān)督下開展工作。項目經(jīng)理為質(zhì)量總負責，全面負責施工質(zhì)量的控制，施工員、質(zhì)檢員、施工班組長、測量員按質(zhì)量體系程序文件要求，各自做好本職工作。（二）質(zhì)量保證措施1、遵循“信譽至上、質(zhì)量第一”的宗旨。嚴格按設計和施工圖紙標準精心組織施工，并接受業(yè)主和監(jiān)理工程師對施工質(zhì)量的檢查與監(jiān)督。2、加強對職工、民工的質(zhì)量意識教育，牢固樹立“質(zhì)量第一”的觀念，發(fā)揚創(chuàng)優(yōu)傳統(tǒng)，做好技術(shù)措施交底工作，層層落實質(zhì)量管理崗位責任制。3、推行全面質(zhì)量管理，強化質(zhì)量保證體系，工地內(nèi)設置質(zhì)檢組和試驗組，實行專職質(zhì)量管理，對工程的每個部位、每個工序都實行嚴格控制。4、層層落實工程質(zhì)量責任制，每道工序都嚴格實行“三檢制”，使“初檢、復檢、終檢”責任落實到人：“初檢”由施工班長負責，“復檢”由項目質(zhì)量員負責，“終檢”由公司質(zhì)安科人員負責。堅持工前有交底，工中有檢查，工后有驗收的一條龍操作管理辦法。每道工序在完工后，須經(jīng)監(jiān)理機構(gòu)抽檢并簽證合格后方可進行下道工序施工。密切配合監(jiān)理機構(gòu)對工程質(zhì)量的檢查和監(jiān)督，聽從監(jiān)理工程師的指示。發(fā)現(xiàn)問題及時落實糾正。5、建立質(zhì)