實(shí)驗(yàn)改良氏法測(cè)蛋白含量

關(guān)于實(shí)驗(yàn)改良氏法測(cè)蛋白含量第一頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)室規(guī)則按規(guī)章操作，保障實(shí)驗(yàn)安全；進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要著白大衣；禁止大聲喧嘩，保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的安靜；維持實(shí)驗(yàn)室的整潔。第二頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一?實(shí)驗(yàn)課的考試?

實(shí)驗(yàn)分組?

實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生?

實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫第三頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)名稱姓名：班級(jí)：學(xué)號(hào)：實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)步驟：文字簡(jiǎn)潔，盡可能采用圖表實(shí)驗(yàn)結(jié)果：原始數(shù)據(jù)、計(jì)算過(guò)程、結(jié)論實(shí)驗(yàn)討論：結(jié)果分析、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)日期：同組人員：實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫第四頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、玻璃儀器的常規(guī)清洗二、試劑瓶、吸量管、試管的放置基本操作三、刻度吸量管的使用第五頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一分光光度計(jì)分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)的操作第六頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一

T=I/I0，A=-lgT

1、A1/A2=c1/c22、標(biāo)準(zhǔn)曲線法Lambert-Beer定律A=KcL分光光度計(jì)的原理I0ILK：吸光系數(shù)c：溶液濃度L：溶液厚度C第七頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一光源I0I單色器樣品池狹縫檢測(cè)系統(tǒng)分光光度計(jì)的構(gòu)造第八頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一分光光度計(jì)的使用1.打開(kāi)電源，調(diào)節(jié)旋鈕至需要的波長(zhǎng)，預(yù)熱20~30min2.1檔（空白管），T模式調(diào)100%，顯示“Blank”、“100”3.拉桿拉至1.5檔，T模式調(diào)0%，顯示“0.00”4.切換到A模式，拉至2、3、4檔，讀取各個(gè)樣品的吸光度5.使用完畢后，置于休息檔（1.5檔）拉桿，1-4檔樣品池讀數(shù)波長(zhǎng)第九頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一1檔，空白對(duì)照，A=0，T=100%1.5檔，隔板，A=+∞，T=0%2檔，樣品1，A=？3檔，樣品2，A=？4檔，樣品3，A=？第十頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一1、分清光面、毛面手只可接觸毛面，光線須從光面通過(guò)2、用溶液潤(rùn)洗2-3次，裝至2/3至4/5體積3、粗紙吸水、柔紙擦亮光面4、從低到高依次測(cè)量，不需清洗比色杯5、蒸餾水沖洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面第十一頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)1第十二頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理及方法2、了解標(biāo)準(zhǔn)曲線在物質(zhì)定量測(cè)定中的應(yīng)用及繪制要點(diǎn)第十三頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)原理凱氏定氮法16%紫外吸收280nm呈色反應(yīng)第十四頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+

螯合物

(紫紅色)酚試劑鉬藍(lán)-鎢藍(lán)混合物

(藍(lán)色，深淺與蛋白含量呈正比)（雙縮脲反應(yīng)）Pr.Cu2+改良Lowry法第十五頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，而且要精確控制操作時(shí)間。顯色程度與時(shí)間有關(guān)。專一性較差，干擾物質(zhì)較多。靈敏度高雙縮脲法的檢出限為0.2~1.7mg/ml，而本法的檢出限為0.015~0.110mg/ml。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)第十六頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一實(shí)驗(yàn)步驟試劑（ml）蛋白標(biāo)準(zhǔn)品樣品測(cè)定管012345Pr標(biāo)準(zhǔn)液00.10.20.40.60.8待測(cè)血清1.0生理鹽水1.00.90.80.60.40.20試劑A0.9ml,

混勻后，37℃水浴10min試劑B0.1ml,

混勻后，室溫放置10min試劑C3ml,

立即混勻，37℃水浴10min第十七頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一0x1x2x3x4Y3OD650蛋白質(zhì)量（mg）/蛋白濃度（mg/ml）1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和實(shí)測(cè)樣本濃度的求得Y2Y1樣品吸光度樣品濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果第十八頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一2、濃度換算樣品體積實(shí)測(cè)蛋白質(zhì)量待測(cè)蛋白濃度（g/L）=實(shí)測(cè)蛋白濃度╳稀釋倍數(shù)待測(cè)蛋白濃度（g/L）=╳稀釋倍數(shù)注意終體積相同的前提下，可以用質(zhì)量代表濃度例如：1號(hào)管中，蛋白質(zhì)量為0.02mg，而其終濃度為0.004mg/ml注意溶液的稀釋倍數(shù)例如：若以濃度為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實(shí)測(cè)蛋白濃度為0.02mg/ml,

則待測(cè)蛋白濃度=0.02mg/mlx5x1000=100mg/ml

若以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實(shí)測(cè)蛋白質(zhì)量為0.1mg,

則待測(cè)蛋白濃度=(0.1mg/1ml)x1000=100mg/ml第十九頁(yè)，共二十一頁(yè)，編輯于2023年，星期一未知濃度蛋白溶液實(shí)測(cè)蛋白溶液1ml終體積5ml測(cè)吸光度1:1000稀釋加入A、B、C試劑計(jì)算出終濃度c實(shí)測(cè)蛋白濃度為

cx5未知蛋白濃度為

cx5x1000濃度換算過(guò)程解析未