微生物的顯微鏡直接計數(shù)法和大小的測定

關(guān)于微生物的顯微鏡直接計數(shù)法和大小的測定第一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一實驗目的學習使用目鏡測微尺和鏡臺測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。

學習使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。

第二頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一實驗材料顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙。第三頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一實驗步驟測定酵母菌細胞的大小

測定的工具：目鏡測微尺鏡臺測微尺目鏡測微尺每格實際代表的長度隨物鏡的放大倍數(shù)而改變，也會因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正。

第四頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一目鏡測微尺的校正：在40×鏡下，看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動載物臺，使目鏡測微尺的0點與鏡臺測微尺的某一刻度重合，然后，仔細尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計算兩刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。由于鏡臺測微尺的刻度每格長10μm，所以可得

目尺每格長度(μm)=（臺尺格數(shù)×10）/目尺格數(shù)菌體大小的測定：制作一片酵母菌的蓋片，取下鏡臺測微尺，將蓋片置于載物臺上，然后在40×鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。第五頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一酵母菌顯微直接計數(shù)

方法：活菌計數(shù)法——平板菌落計數(shù)法；總菌計數(shù)法——血球計數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細菌計數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。第六頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。在10×鏡下計數(shù)：計數(shù)4個（或5個）中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半第七頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一實驗結(jié)果目鏡測微尺標定結(jié)果：

40×鏡下

倍目鏡測微尺每格長度是

μm。菌號酵母的直徑大小測定結(jié)果

目鏡測微尺格數(shù)實際直徑/μm1

2

3

4

5

均值

第八頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一將顯微計數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個中方格中的總菌數(shù)；D表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)TD二室平均值個/ml12345第一室

第二室

第九頁，共十二頁，編輯于2023年，星期一問題與討論為什么目鏡測微尺必須用鏡臺測微尺來校正？

在顯微鏡下直接測定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點？第十