DB12T 863-2019水產(chǎn)微生態(tài)制劑 解淀粉芽胞桿菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30天津市地DB12方標(biāo)準(zhǔn)DBT863—2019菌生產(chǎn)技術(shù)Aquaticprobiotics-TechnicalregulationforproductionofBacillusaciens天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布前言T心。水產(chǎn)微生態(tài)制劑解淀粉芽胞桿菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程于水產(chǎn)微生態(tài)制劑解淀粉芽胞桿菌的生產(chǎn)。范性引用文件(包括所有的修改單)適用于本文件。GB5環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB8地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB287農(nóng)用微生物菌劑GBT26428飼用微生物制劑中枯草芽孢桿菌的檢測定義標(biāo)準(zhǔn)。芽胞桿菌bacillusamyloliquefacienstheoriginalstrainirstclassstrainsecondclassstrain瓶中的菌種接種至種子罐中，在種子罐中放大培養(yǎng)的菌種。4生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)備要求4.1生產(chǎn)環(huán)境GB4.1.3生產(chǎn)車間配備消毒滅菌設(shè)施，菌種儲藏室和無菌操作間與生產(chǎn)車間分開。4.2生產(chǎn)設(shè)備不銹鋼發(fā)酵罐，體積根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模自定。生產(chǎn)技術(shù)流程5.1生產(chǎn)流程附錄A5.2菌種質(zhì)量5.2.1用于發(fā)酵的菌種應(yīng)有菌種鑒定報(bào)告或菌株來源相關(guān)信息。檢測菌種的純度和性能，如不純或退化，應(yīng)先進(jìn)行提純復(fù)壯。5.3培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基或接近發(fā)酵培養(yǎng)基。5.3.3發(fā)酵培養(yǎng)基在保證菌體生長旺盛，利于芽胞形成的前提下，盡量利用來源充足、價(jià)格低廉的原5.4滅菌滅菌，滅菌條件為121℃~125℃，0.1MPa~0.15MPa，滅菌20min~30min。5.4.2固體物料含水率50%~60%，121℃~130℃，滅菌1.0h~2.0h。5.5接種搖瓶種子到發(fā)酵罐種子接種量為1%~5%，種子罐到發(fā)酵罐接種量為5%~7%。接種保證無菌操作，調(diào)5.6發(fā)酵5.6.1芽胞桿菌的發(fā)酵溫度為25℃~37℃。5.6.2液體發(fā)酵在發(fā)酵過程中通入無菌空氣，通氣量為10m/h?t~203m3/h?t，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)80r/min~5.6.3芽胞率達(dá)到80%以上終止發(fā)酵。5.6.4發(fā)酵周期24h~48h。5.7發(fā)酵后處理檢測檢測指標(biāo)感官檢測酵氣味。有效活菌數(shù)、芽胞率檢測樣品稀釋稀釋，固體菌劑稀釋方法按照GB26428規(guī)定執(zhí)行。.2涂平板有效活菌測定直接用2~3個(gè)梯度稀釋液(10-6、10-7、10-8)在含淀粉的培養(yǎng)基(參見附錄B)上涂平板，每個(gè)梯度涂3個(gè)平板，芽胞數(shù)則將2~3個(gè)梯度稀釋液80℃處理10min后在含淀粉的培養(yǎng)基(參見附B3培養(yǎng)將涂好的平板在室溫中放置15min，使接種物完全被瓊脂吸收，倒置于培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)48h。.4計(jì)數(shù)選取菌落數(shù)在30~300個(gè)之間的平板計(jì)數(shù)，典型的解淀粉芽胞桿菌菌落表面粗糙，不透明，邊緣不淀粉在菌落周圍產(chǎn)生透明圈。芽胞數(shù)除以菌數(shù)即為芽胞率。9.4雜菌率的測定(好氧或兼性厭氧雜菌)釋的樣品中，選取10-5、10-6、10-73個(gè)稀釋度進(jìn)行雜菌，按GB20287執(zhí)行。g固體菌劑水分含量測定GB執(zhí)行。L.2長途運(yùn)輸時(shí)，防止日曬、雨淋，避免長期受壓和機(jī)械損傷。產(chǎn)品不應(yīng)和易燃、易爆、易腐蝕的物品同車(或其他運(yùn)輸工具)裝運(yùn)。A(規(guī)范性附錄)粉芽胞桿菌生產(chǎn)技術(shù)流程圖A程圖(資料性附錄)含淀粉培養(yǎng)基成分(每升培養(yǎng)基含量):性淀粉：10g；：10