生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗指導(dǎo)書方成

10試驗五：血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳〔驗證性；4學(xué)時〕【試驗?zāi)康摹堪盐站郾０纺z電泳的原理。生疏聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作過程。了解聚丙烯酰胺凝膠電泳的特點和應(yīng)用范圍。【試驗原理】聚丙烯酰胺凝膠的聚合原理 聚丙烯酰胺凝膠(PAG)是一種人工合成的凝膠，由丙烯酰胺〔Acrylamide簡寫為Acr〕和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺〔N，N1-methylene-bisacrylamide，簡寫B(tài)is〕在催化〔過硫酸胺或核黃素的作用下聚合成含有酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長鏈，相鄰的兩個鏈通過甲叉橋交聯(lián)形成就具有三維網(wǎng)狀構(gòu)造的聚丙烯酰胺凝膠。為了加速聚合，在合成凝膠時還參加四甲基乙二胺作為加速劑。聚丙烯酰胺凝膠具有三維網(wǎng)狀構(gòu)造能起分子篩作用用它作電泳支持物對樣品的分離不僅取決于各組分所帶電荷的多少也與分子大小有關(guān)凝膠網(wǎng)孔的大小主要受成膠物的總濃度及Acr和Bis的比例的影響。一般電泳承受成膠物質(zhì)總濃度為7.5%，此濃度稱為標(biāo)準(zhǔn)凝膠濃度。假設(shè)轉(zhuǎn)變總膠濃度，也應(yīng)相應(yīng)轉(zhuǎn)變Acr和Bis的比例。2．不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳的原理 依據(jù)凝膠各局部緩沖液的種類及pH值，孔徑大小是否一樣等，可分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)聚丙烯酰胺凝膠電泳〔〕。連續(xù)系統(tǒng)是指電泳槽內(nèi)緩沖液的pH值與凝膠中的一樣，不連續(xù)系統(tǒng)則不同。不連續(xù)圓盤電泳一般是在小玻璃管內(nèi)進(jìn)展的3Tris-HCl緩沖液，其pH6.7。下層是分別膠，此層凝膠總濃度為7.5%，是小孔膠，也用Tris-HCl緩沖液，pH8.9。上下電泳槽緩沖液是Tris-甘氨酸緩沖液，pH=8.3。由于凝膠的孔徑和緩沖液的pH值不同，產(chǎn)生濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，使電泳的靈敏度、區(qū)分率提高。濃縮效應(yīng)：無論哪種電泳方式，要想得到良好的分別效果，電泳開頭前必需使樣Tris-HCl緩沖液pH=6.7，電泳時，HCl全部電離為Cl-，而電泳槽內(nèi)Tris-甘氨酸緩沖液pH=8.3，甘氨酸等電點pI=6.0，電泳時，甘氨酸僅極少局部電離為甘氨酸負(fù)離子〔Gly-〕，一般血清蛋白質(zhì)點約pI=5.0，也解離為蛋白質(zhì)負(fù)離子〔Pr-〕，其解離度比HCl酸大。通電后，這三種離子同時向正極泳動，有效泳動率是Cl-

＞Pr-

＞Gly-，電泳時開頭時，Cl-泳動最快〔稱快離子〕，很快超過Pr-，泳動到最前面，Gly-泳動最慢〔稱慢離子〕，泳動到最終，Pr-介于其間，被濃縮成一個狹小的樣品薄層。這種濃縮作用可使蛋白質(zhì)濃縮數(shù)百倍。血清蛋白在紙上電泳和醋酸纖維素薄膜電泳上僅可分成5～7個組分。而在聚丙烯酰20～30電荷效應(yīng)：蛋白質(zhì)樣品在界面處被濃縮成一狹窄的樣品薄層，進(jìn)入分別膠。由于各種蛋白質(zhì)分子的等電點不同，在同一pH的緩沖液中所帶有效電荷不同，因而泳動率也不同，因此各種蛋白質(zhì)就按泳動率快慢挨次排列成一個一個圓盤狀的蛋白質(zhì)區(qū)帶。分子篩效應(yīng)：各種蛋白質(zhì)分子由于分子大小和構(gòu)象不同，因而通過肯定孔徑的分別所帶的凈電荷相像，也會由于分子篩效應(yīng)被分開?！驹囼灄l件】器材 電泳儀、圓盤電泳槽、微量加樣器、注射器、50ml小燒杯試劑〔1〕30%丙烯酰胺儲存液：丙烯酰胺30.0g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加水至100ml，棕色瓶4℃保存?！?〕催化劑〔10％過硫酸銨〕：1g加水至10ml，臨用前現(xiàn)配。〔3〕加速劑：四甲基乙二胺(TEMED〕100ml，4℃保存。濃縮膠緩沖液〔pH6.8〕：取6.0gTris1mol/LHCl48ml，再加蒸餾水至1000ml，4℃保存。100ml4℃保存。(7)染色液：考馬斯亮藍(lán)R-250 0.46g、甲醇〔可用無水乙醇代替〕110ml、28ml冰乙酸，TritonX-1001ml,溶解后補足水至總體積400ml。307〔可用無水乙醇代替110m28mTritonX-1008ml400m。保存液:7%冰醋酸。25ml10g0.055ml，最終加水至100ml?！静僮鞑襟E】凝膠柱的制備取兩端已有金鋼砂磨平的10cm×0.6cm的玻璃管。在距一端7cm7.5cm條線。插入橡皮墊中，垂直安放于試管架中。按下表配制分別膠，快速用滴管將其沿管壁參加玻璃管內(nèi)，至7cm分別膠濃縮膠(ml)30%丙烯酰胺(ml)2.501.00分別膠緩沖液(pH8.8)1.25/濃縮膠緩沖液(pH6.8)/1.25蒸餾水6.207.65TEMED0.050.0510%過硫酸銨0.050.05總體積1010丙烯酰胺濃度〔g%〕7.53.05ml0.5cm削減凝膠外表的震驚與混合。靜置，待凝膠聚合后(約20min)，去除水相，然后用吸水紙吸干剩余的液體。按上表配制濃縮膠，馬上用滴管沿凝膠管壁加至7.5cm處，并隨即沿管壁緩慢參加蒸0.5cm20樣品配制正常入血清0.3ml1.7ml，輕搖混勻。電泳將上述制備好的凝膠管分別插入上電泳槽的橡膠塞孔中，高出槽底。下電泳槽參加10倍稀釋的電泳緩沖液，隨后放入帶凝膠管的上電泳槽。加樣：用微量注射器取樣品液加30μl，沿管壁漸漸加在濃縮膠面上，再用緩沖液沿管壁緩慢加在樣品液上〔防止與樣品液混合稀釋緩沖液，檢查一下是否漏水，如不漏水，參加適量緩沖液，然后將帶電極的蓋放好。、接好電源。調(diào)整電流為lmA/管。待示蹤劑進(jìn)入分別膠時，調(diào)整電流為3mA/管。當(dāng)示蹤劑移至距玻璃管下口時，停頓電泳。剝膠取下凝膠管，用帶有10cm長針頭的注射器，內(nèi)裝蒸餾水做潤滑劑，沿管壁插壓，使凝膠從玻璃管中緩慢滑出。12.510min。向裝有凝膠柱的試管中參加染色液，6010～20min，隨后移入脫色液中，6030～60min。7經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳可分多少區(qū)帶?！玖粢馐马棥緼cr和Bis都是神經(jīng)性毒劑，對皮膚有刺激作用、但在形成凝膠后則無毒，操作時應(yīng)盡量避開接觸皮膚，并留意洗手。蛋白加樣量要適宜。加樣量太少，條帶不清楚；加樣量太多則泳道超載，條帶過寬而重疊，甚至掩蓋至相鄰泳道?？隙ㄒf，貯存過久的過硫酸銨商品不能使用。此外，10%過硫酸銨必需現(xiàn)用現(xiàn)配，4℃冰48h。灌制凝膠時，應(yīng)避開產(chǎn)生汽泡，由于汽泡會影響電泳分別效果。剛灌注分別膠混合溶液后，應(yīng)在分別膠液面上加1～2cm高的水層，以阻隔空氣。膠液面上加水層時要特別留神，緩緩疊加，以免沖壞凝膠的膠面?！舅伎碱}】電泳時，為什么要把上層電泳槽接在負(fù)極上？使聚丙烯酰胺凝膠具有高區(qū)分率的三個因素是什么?【課外閱讀】試驗六：馬鈴薯多酚氧化酶制備及性質(zhì)試驗〔綜合性；4學(xué)時〕【試驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)從組織細(xì)胞中制備酶的方法。把握多酚氧化酶的作用及各種因素對其作用的影響?！驹囼炘怼慷喾友趸甘且环N含銅的酶，其最適pH值為6～7。由多酚氧化酶催化的反響，如以鄰該酶作用的結(jié)果。多酚氧化酶的最適底物是鄰苯二酚〔兒茶酚。間苯二酚和對苯二酚與鄰苯二酚的構(gòu)造相像，它們也可以被氧化為各種有色物質(zhì)。pH酶濃度以及抑制劑和蛋白質(zhì)變性劑等都會轉(zhuǎn)變其生物催化活性?！驹囼灄l件】1．馬鈴薯：50g/組。2．0.1mol/L的NaF4.2g1000mL41.99】3．0.01mol/L1.1g1000mL水中,用稀NaOHpH值為6.0,防止其自身的氧化作用。當(dāng)溶液變成褐色時，應(yīng)重配制。配制的溶液應(yīng)貯110.11】pH6.81+1〔0.2MNa2HPO4+0.2MNaH2PO4〕5%三氯乙酸溶液m/v硫脲，固體0.01mol/L0.11g100mL8．0.01mol/L0.11g100mL9．10．0.8％HCl：19.2mL濃HCl(42%1000mL。11．0.20.3%〔V/V〕的乳酸溶液。12.0.5%的碳酸鈉溶液13．0.01％的碳酸鈉溶液1〔離心管250ml量杯13X離心機、冰箱、恒溫水浴鍋【操作步驟】1．多酚氧化酶的制備每三個小組一起，稱取150g馬鈴薯〔馬鈴薯可以不去皮150mLNaF50mL3500/min5～10min16g，溶解，于4℃30min3500/min15min，倒掉上清液，沉淀用15mLpH6.8的磷酸鹽緩沖液溶解，即為粗酶液，含有馬鈴薯多酚氧化酶。2．多酚氧化酶的催化作用1參加各試劑，觀看反響現(xiàn)象并記錄和分析緣由。試管號12試管號123酶液－鄰苯二酚15－15水－375～10min，觀看顏色變化多酚氧化酶的化學(xué)性質(zhì)2參加各試劑，觀看反響現(xiàn)象并記錄和分析緣由。試管號酶液25％三氯乙酸多酚氧化酶的化學(xué)性質(zhì)1537℃保10min，觀看顏色變化115－－21515－315－少許底物專一性按表33多酚氧化酶的底物專一性試管號酶液鄰苯二酚間苯二酚對苯二酚375～10min，觀看顏色變化11515－－215－15－315－－15底物濃度的影響按表44底物濃度的影響試管號酶液鄰苯二酚水371min，觀看顏色變化151392510303540－酶濃度的影響按表5試管號酶液鄰苯二酚5酶濃度的影響水 混勻后37℃保溫2min，觀看顏色變化115－2115147.氫離子濃度的影響按表6管號123450.8%HCl40----0.3%乳酸-40---0.2%乳酸--40--0.01%碳酸鈉---40-0.5%碳酸鈉----40鄰苯二酚77777酶液77777混合后pH1357937℃保溫色變化,確定pHTCA與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用TCA與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用:①在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽.②作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生轉(zhuǎn)變，暴露出較多的疏水性基團(tuán)，使溶性鹽.②作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生轉(zhuǎn)變，暴露出較多的疏水性基團(tuán)，使之聚攏沉淀.③隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其構(gòu)造簡單性與致密性越大，TCA可能滲入分子內(nèi)部而使之較難被完全除去，在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質(zhì)構(gòu)造發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時間的延長這一作用愈加明顯；在電泳時使用TCA對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時，對于分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇TCA.對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮，承受TCA時也有兩點需要留意:一是用TCA沉淀后，盡量用丙酮徹底抽提TCA;二是樣品處理后要盡快進(jìn)展電泳分析，以免發(fā)生聚攏及斷裂，造成結(jié)果分析的不準(zhǔn)確?！舅伎碱}】在酶制備過程中參加硫酸銨的目的是什么？在多酚氧化酶性質(zhì)試驗中三氯乙酸和硫脲有什么作用？該多酚氧化酶的最適pH值是多少？為什么？通過試驗可知哪些因素會影響酶的催化活力？【課外閱讀】試驗七：干酵母核糖核酸的提取及鑒定〔綜合性；4學(xué)時〕【試驗?zāi)康摹?、把握酵母RNA2、把握鑒定核酸組分的方法和操作?！驹囼炘怼坑捎赗NA的來源和種類很多，因而提取制備方法也各異，一般有苯酚法、去污劑RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中，向水層參加乙醇后，RNA即以白色絮狀沉淀析出，此法能較好地除去DNA和蛋白質(zhì)。上述方法提取的RNA生物活性。工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取 RNA，用這2種方法所提取的核酸均為變性的RNA主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡潔。濃鹽法是用10%左右氯化鈉溶液，90℃提取3-4h，快速冷卻，提取液經(jīng)離心后，上清液用乙醇沉淀 RNA。稀堿法使用稀堿〔本試驗用 0.2%NaOH溶液〕使酵母細(xì)胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液用乙醇沉淀 RNA〔本試驗〕或調(diào)pH2.5利用等電點沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。酵母含RNA達(dá)2.67-10.0%，而DNA含量僅為0.03-0.516%，為此，提取RNA多以酵母為原料。RNA分子中的核糖在濃酸中加熱，脫水轉(zhuǎn)變成糖醛，后者在氧化鐵存在下，與地衣酚試劑(3，5-二羥基甲苯)反響，縮合成綠色化合物，在670nm處有最大吸取峰，從而可進(jìn)展定量測定。待測樣品中的RNA濃度在20-200ug/L如下:【試驗條件】〔市售〔市售pHpH1〔100。⑤燒杯100m〔1。⑥量筒50m〔×10m〔1。⑦抽濾瓶500m〔1、布氏漏斗10c×10.5m〔11m〔×2m5m〔15000min-。2．0.22gNaOH溶于蒸餾水并稀釋至1000m。②乙酸A·。③95〔P10〔比重1.810m，緩緩傾于水中，稀釋至100ml。⑦5%硝酸銀溶液：5gAgNO3

溶于蒸餾水并稀釋至100ml，貯于棕色瓶中。⑧苔黑酚—三氯化鐵試劑：將100mg苔黑酚溶于100ml濃鹽酸中，再參加100mgFeCl·6HO。臨用時配制。3 2【操作步驟】RNA4g100ml0.2%NaOH40ml，沸水浴加熱30分鐘，常常攪拌。參加乙酸數(shù)滴，使提取液呈酸性〔石蕊試紙〕，離心10-15分鐘4000min-。取上清液，參加9530m濾。濾渣先用952次〔每次約10m，繼用無水乙醚洗2次〔每次10m，洗滌時可用細(xì)玻棒留神攪動沉淀。乙醚濾干后，濾渣即為粗RNA，可作鑒定。鑒定：取上述RNA0.5g105ml1-2分鐘，將RNA0.5ml，加苔黑酚-FeCl3

1ml12ml2ml51ml，觀看是否產(chǎn)生絮狀嘌呤銀化合物〔有時絮狀物消滅較慢，可放置十幾分鐘。【留意事項】【思考題】破酵母細(xì)胞時為什么要在沸水浴中進(jìn)展?為什么用酵母作為試驗原料？如何使RNA從酵母中釋放出來？RNA的等電點是多少？3為什么用稀堿溶液可以使酵母細(xì)胞裂解？核酸的溶解性質(zhì)是什么?常用什么試劑分別沉淀核酸?【課外閱讀】RNA含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸等組分，參加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。強酸使核酸分子的有機磷消化為無機磷，使之與鉬酸銨結(jié)合成磷鉬酸銨〔黃色沉淀〕PO43-+3NH4++12MoO42-+24H+===(NH4)3PO4.12MoO3.6H2O+6H2O；當(dāng)有復(fù)原劑〔如維生素C〕存在時，Mo6+被復(fù)原成Mo4+，再與試劑中的其它MoO42-結(jié)合成Mo〔MoO4〕2，呈藍(lán)色，稱鉬藍(lán)。所以試管CRNA與硫酸共熱，生成的核糖進(jìn)而脫水轉(zhuǎn)化為糠醛，三氯化鐵作為催化劑，可與地衣酚反響，生成綠色化合物，所以消滅綠色?！睴R〕嘌呤堿可與硝酸銀反響產(chǎn)生白色的嘌呤銀化合物沉淀。所以消滅渾濁現(xiàn)象。不檢測嘧啶堿，是由于與嘌呤堿相比，它難以被水解下來，同時它難檢測且現(xiàn)象不明顯。DNA粗提與鑒定〔綜合性；4學(xué)時〕【試驗?zāi)康摹浚盐誅NA分別純化的原理和方法。．把握DNA鑒定技術(shù)。【試驗原理】壁破壞后，細(xì)胞釋放出核酸與蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物——核糖核蛋白(RNP)和脫氧核糖核蛋白(DNPNaCl濃度到達(dá)時，DNP1%，但RNP則不一樣，在0.14mol/LNaClDNP溶解度很低，而RNPDNA0.14mol／LDNPRNP他物質(zhì)則可以溶于有機溶劑DNA〔本0.14mol/L〕。在溶液中，DNA鏈略帶負(fù)電荷，而鹽離子可被吸引到DNADNA粘稠物質(zhì)。利用這一原理，就可以用酒精萃取DNA。DNADNA?！驹囼灄l件】洋蔥或其他植物、洗潔精、NaCl、攪拌機或研缽、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL20mL95%酒精、蒸餾水、2mol/LNaCl1g100ml2.75ml〔或10ml60%過氯酸〕，混勻置棕色瓶中，貯于冰箱。臨用前參加1.6%乙醛溶液。所配試劑應(yīng)為無色。[1g100ml〔A.R.〕10ml1.0ml16%的乙醛，試劑應(yīng)為無色。]【操作步驟】1．100g10mL1g攪拌或研磨。2．將搗碎的洋蔥糊用漏斗和紗布過濾到小燒杯中，得到濾液，置于冰箱中冷卻幾分鐘。10mL95〔冷卻過的酒精效果較好，不要震驚或攪拌。此時，燒杯中的液體分為上、下兩層，下層較渾濁，上層澄清，很快上層溶液中就會有白色纖維狀粘稠物析出，用玻璃棒可將其輕輕卷起。進(jìn)一步純化：將析出的DNA2mol/L95%的酒精，使DNA再次析出，用玻棒攪拌，使DNA再次纏繞于玻棒末端。5．鑒定：取兩支試管，編為1、20.015/L2mL12mL5【留意事項】1、洋蔥含有揮發(fā)性刺激物，有效削減刺激，才能使試驗順當(dāng)進(jìn)展?？上葘⒀笫[放入冰箱冷刺激物溶于水，可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細(xì)胞裂開，DNA2mol/L效果。研磨時，切忌使用攪拌器〔榨汁機。使用攪拌器雖可以提高研磨效率，但攪拌器將洋蔥小顆粒由于輕會漂移起來，DNADNA。2、DNA析出的過程中，切忌震驚和攪拌〔不震驚易于分層，我們就能很簡潔觀看到上清液中的絲狀物；攪拌會使格外松軟的DNA斷裂成小段，不易取出DNA不易卷起，可改用外表打毛的牙簽，DNA【思考題】1、不同濃度NaCl〔2mol/L，0.14mol/L，0.015mol/L〕的用途？2DNA,RNADNADNA30mLDNA2mol/LNaCl→同方向攪拌，DNA→參加蒸餾水→DNA析出→過濾得到過濾物→放到2mol/LNaClDNA-NaCl液；方案二：30mL〔木瓜蛋白酶〕→靜置10～15DNA30mL60～7510~15DNA本試驗中鑒定DNA法。⑴配制染色劑。用蒸餾水配制0.05%的溴化乙錠(EB)溶液。⑵將玻璃棒上纏繞的白色絮1EB(260nm)下照耀(暗室中)，可見橙紅色的熒光(DNA260nm試驗九：肝組織中核酸的提取與鑒定〔綜合性；4學(xué)時〕【試驗?zāi)康摹堪盐諒膭游锝M織中提取核酸的根本原理與方法。了解兩類核酸的組成上的主要差異和鑒定方法。【試驗原理】核蛋白主要存在于細(xì)胞質(zhì)中。依據(jù)脫氧核糖核蛋白〔DNP〕與核糖核蛋白〔RNP〕在肯定濃0.14mol/LNacl溶液中，RNPDNP的溶解度較??；相反，在1mol/LNaCl溶液中，RNP的溶解度較小，而DNP的溶解度DNPRNP制脫氧核糖核酸酶對DNA的水解作用。然后用蛋白質(zhì)變性劑使核蛋白變性解離，沉淀除去組分不同主要是戊糖的不同進(jìn)展DNA、RNA的鑒定。DNA分子在酸性溶液中加熱水解后，其脫氧核搪局部可被濃酸縮水成ω-羥基-γ-酮基595nm而可進(jìn)展定量側(cè)定。待測樣品中的DNA濃度在20-200ug/L反響式如下:RNA分子中的核糖在濃酸中加熱，脫水轉(zhuǎn)變成糖醛，后者在氧化鐵存在下，與地衣酚試劑(3，5-670nm處有最大吸取峰，從而可進(jìn)展定量測定。待測樣品中的RNA20-200ug/L下:【試驗條件】〔一〕器材:手術(shù)剪刀；表平皿；天平；玻璃勻漿器〔或電動玻璃勻漿機〕；低速冷凍離心機；燒杯；量筒；試管及試管架；玻棒；吸量管2ml，5ml；恒溫水箱；滴管?！捕吃噭?1．0.14mol/LNaCl〔0.01mol/L〕2．1mol/LNaCl氯仿異戊醇5．95%乙醇苔黑酚顯色劑：先配制0.1%三氯化鐵的濃鹽酸溶液，試驗前用此溶液作溶劑配成0.1%苔黑酚溶液，貯于棕色瓶中。1g100ml2.75ml〔或10ml60%過氯酸〕，混勻置棕色瓶中，貯于冰箱。臨用前參加1.6%乙醛溶液。所配試劑應(yīng)為無色。冰乙酸濃硫酸或過氯酸(60%以上)動物：小白鼠；或穎羊肝【操作步驟】〔一〕核酸提取組織勻漿: 取小白鼠一只，斷頭處死，剖腹取肝，用預(yù)冷的0.14mol/LNaCl〔內(nèi)含0.01mol/L檸檬酸〕溶液洗去肝外表血液，置表平皿上用剪刀剪碎后轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中，參加5ml0.14mol/LNaCl溶液〔內(nèi)含0.01mol/L檸檬酸〕制備勻漿。也可直接取穎羊肝2克，參加5ml0.14mol/LNaCl溶液〔內(nèi)含0.01mol/L檸檬酸〕制備勻漿。RNP與DNP的分別: 將組織勻漿移