光譜分析技術(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)19句

光譜分析技術(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)19句

1、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)序列的同源性不要超過(guò)70%，保證特異性擴(kuò)增。

2、熒光：一些物質(zhì)原子受光照耀時(shí)，能汲取入射光子的能量，使其電子從低能級(jí)向較高能級(jí)躍遷，處于此激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，電子可通過(guò)躍遷的形式放射可見(jiàn)光子，放出多余的能量而返回基態(tài)，這種放出從前所汲取能量的可見(jiàn)光，即熒光。熒光在停頓激發(fā)的時(shí)候發(fā)光在10-7-10-8s內(nèi)停頓。

3、引物3’端堿基是引發(fā)延長(zhǎng)的起點(diǎn)，因此肯定要與模板DNA配對(duì)。引物3’端最正確堿基選擇是G和C，它們形成的堿基配比照較穩(wěn)定。

4、選擇適宜的探針濃度，防止非特異性標(biāo)記。合理設(shè)置對(duì)比，識(shí)別結(jié)果中的假陽(yáng)性或假陰性。

5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在PCR反響體系中引入DNA結(jié)合熒光染料或熒光探針，對(duì)每一循環(huán)擴(kuò)增反響產(chǎn)物DNA片段的累積狀況進(jìn)展實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)記錄，通過(guò)數(shù)學(xué)模型實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量及定性的分析。其特點(diǎn)為全封閉（污染少）、高準(zhǔn)確、高靈敏。

6、常用光學(xué)顯微鏡：一般光學(xué)顯微鏡，相差顯微鏡，偏光顯微鏡，熒光顯微鏡，微分干預(yù)顯微鏡，暗視野顯微鏡，激光共聚焦掃描顯微鏡。

7、流式細(xì)胞術(shù)直方圖（histogram）：又稱(chēng)單參數(shù)直方圖，用于定性和定量分析。在圖中，橫坐標(biāo)為熒光或光散射強(qiáng)度的相對(duì)值，單位是“道數(shù)”。道數(shù)與熒光強(qiáng)度之間可以是線性或?qū)?shù)關(guān)系?？v坐標(biāo)通常表示細(xì)胞消失的頻率，即相對(duì)細(xì)胞數(shù)。每個(gè)峰表示性質(zhì)一樣的一群細(xì)胞。

8、熒光能量共振轉(zhuǎn)移：受激態(tài)熒光素將其能量向另一個(gè)熒光素傳遞，使后者被激發(fā)，這一過(guò)程稱(chēng)為熒光能量共振轉(zhuǎn)移。能量的供應(yīng)者叫供體熒光素，能量的承受者叫受體熒光素。條件：

9、供體與受體間的距離<10nm或=1-7nm

10、供體的放射光譜與受體的汲取光譜有實(shí)質(zhì)的重疊。

11、逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描被激發(fā)熒光成像

12、共聚焦：掃描的激光與熒光收集共用一個(gè)物鏡，物鏡的焦點(diǎn)即掃描激光的聚焦點(diǎn)，也是瞬時(shí)成像的物點(diǎn)。

13、直接免疫熒光法：用一種（單色）或多種（多色）熒光素標(biāo)記的單克隆抗體染色細(xì)胞后，測(cè)量其熒光強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

14、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：是用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）對(duì)組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進(jìn)展組織和細(xì)胞原位檢測(cè)技術(shù)。

15、辨別率：指能清晰辨別兩點(diǎn)間最小距離的力量或能夠辨別出兩質(zhì)點(diǎn)圓心最小距離的力量，是電鏡最重要的參數(shù)之一。

16、前向角散射（即0度角）：范圍在0.5~

17、0度內(nèi)）又稱(chēng)為“近前向小角光散射”，代表與入射激光方向一樣的細(xì)胞衍射光強(qiáng)度。前向角散射與檢測(cè)時(shí)樣本中細(xì)胞的體積大小呈正相關(guān)。

18、光散射參數(shù)：細(xì)胞在流淌中通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)量區(qū)時(shí)，經(jīng)激光照耀，細(xì)胞向空間360度立體角的全部方向散射光線，光散射的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小、外形、質(zhì)膜、內(nèi)部構(gòu)造等有關(guān)。

19、引物的濃度一般為0.1~0.5μmol/L。

20、抗原修復(fù)：組織在制作過(guò)程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使局部抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過(guò)程中不能將其顯示出來(lái)，為了解決上述的問(wèn)題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來(lái)或修正過(guò)來(lái)的過(guò)程。

21、長(zhǎng)度一般為15~30個(gè)核苷酸。

22、熒光探針：以熒光物質(zhì)作為指示劑，并在肯定波長(zhǎng)光的激發(fā)下使指示劑產(chǎn)生熒光，通過(guò)檢測(cè)所產(chǎn)生的熒光實(shí)現(xiàn)對(duì)被測(cè)物質(zhì)的定性或定量分析。