奴卡菌的培養(yǎng)與鑒定

奴卡菌的培養(yǎng)及鑒定1當前1頁，總共26頁。一、分類與命名分類：

細菌域-放線菌綱-放線菌亞綱-放線菌目-棒桿菌亞目-諾卡菌科-諾卡菌屬與醫(yī)學有關的菌種：

膿腫諾卡菌

非洲諾卡菌星形諾卡菌巴西諾卡菌短鏈諾卡菌肉色諾卡菌皮疽諾卡菌新星諾卡菌豚鼠耳炎諾卡菌假巴西諾卡菌當前2頁，總共26頁。二、生物學特性（一）形態(tài)與染色1、革蘭氏染色：

革蘭氏陽性或不定，無芽孢和鞭毛。菌體呈多向的分枝絲狀，直徑0.5-1.2μm。培養(yǎng)早期可見豐富的菌絲體，常有次級分枝。培養(yǎng)后期菌體裂解為球形或桿狀。

巴西奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌當前3頁，總共26頁。形態(tài)染色星形奴卡菌24h星形奴卡菌72h當前4頁，總共26頁。2、改良抗酸染色為弱陽性（1%硫酸水溶液），呈不均勻性，易被脫色呈陰性。奴卡菌星形奴卡菌星形奴卡菌形態(tài)染色當前5頁，總共26頁。3、痰標本直接涂片革蘭氏染色可見典型的分枝菌絲，菌絲呈90°分枝角。有時不易著色或不均勻。痰涂片菌絲呈90°分枝痰涂片菌絲團痰涂片著色不均形態(tài)染色當前6頁，總共26頁。4、組織中細菌易聚集形成團塊或微粒，在膿性分泌物中肉眼可見“硫磺顆粒”痰涂片弱抗酸染色血培養(yǎng)涂片革蘭氏染色形態(tài)染色當前7頁，總共26頁。痰直接涂片抗酸染色革蘭氏染色形態(tài)染色當前8頁，總共26頁。二、生物學特性（二）培養(yǎng)特性嚴格需氧，可在普通瓊脂上室溫或35℃緩慢生長，初代分離常需孵育1周。在不同培養(yǎng)基或培養(yǎng)時間菌落形態(tài)差異大，可出現(xiàn)光滑到顆粒狀、不規(guī)則、皺褶或堆積的菌落。都能形成氣生菌絲，使菌落表面出現(xiàn)粉狀或天鵝絨樣氣生菌絲體，菌落有泥土氣味。可產(chǎn)生不同的色素，如橙紅、粉紅、黃色、黃綠、紫色等。星形奴卡菌當前9頁，總共26頁。巴西奴卡菌培養(yǎng)特性當前10頁，總共26頁。星形奴卡菌的菌落11d，橙黃色，血平板12d，粗糙黃色，血平板血平板11d氣生菌絲11d，MHA，黃色有棘突培養(yǎng)特性當前11頁，總共26頁。2d，血平板革蘭氏染色血平板11d氣生菌絲11d，MHA，黃色有棘突武國芬肺泡灌洗液和刷檢物培養(yǎng)抗酸染色弱抗酸染色當前12頁，總共26頁。三、鑒定與鑒別（一）屬間鑒定諾卡菌屬于其他需氧放線菌屬如鏈霉菌屬、擬諾卡菌屬、紅球菌屬、馬杜拉放線菌屬以及棒狀桿菌等形態(tài)形似的革蘭氏陽性桿菌的屬間鑒定：1.與鏈霉菌屬、放線菌屬和擬諾卡菌屬的鑒別

四者鏡下形態(tài)均為分枝絲狀，但諾卡菌屬改良抗酸染色弱陽性，后者陰性。革蘭氏染色菌絲與孢子鏈當前13頁，總共26頁。白色鏈霉菌擬諾卡菌MHA，9d，氣生菌絲屬間鑒定當前14頁，總共26頁。2.與分枝桿菌屬的鑒別

分枝桿菌抗酸性強，鹽酸酒精不易脫色。而諾卡菌鹽酸酒精易脫色。膿液涂片，條索狀，V字形排列痰涂片，V，Y，X字形排列痰涂片，細胞內(nèi)吞噬屬間鑒定當前15頁，總共26頁。3.與紅球菌屬的鑒別兩者均可呈現(xiàn)弱抗酸性，但馬紅球菌不產(chǎn)生氣生菌絲。馬紅球菌48h粘液型馬紅球菌SBA粗糙型屬間鑒定當前16頁，總共26頁。馬紅球菌24h弱抗酸馬紅球菌5d革蘭氏染色屬間鑒定當前17頁，總共26頁。4.與棒狀桿菌的鑒別棒狀桿菌不形成菌絲，菌體呈柵欄狀排列。屬間鑒定當前18頁，總共26頁。三、鑒定與鑒別（二）屬內(nèi)鑒定乙酰胺水解、抗生素敏感試驗、芳香基硫酸酯酶、利用糖產(chǎn)酸、利用碳水化合物、七葉苷水解、明膠液化、硝酸鹽還原、溫度耐受、脲酶試驗等。1.生化試驗

明膠液化試驗:將菌液用白金針刺入明膠培養(yǎng)基內(nèi)，35℃溫育7d.取出放4℃15min,反復搖動試管至45°，觀察有無液化的明膠流動。乙酰胺利用試驗：

將菌液接種于乙酰胺斜面，于35℃溫育7d.

斜面由淡黃橙色變?yōu)轷r明粉色為陽性。

枸櫞酸鹽利用試驗：將菌液接種于枸櫞酸鹽斜面，

于35℃溫育7d，如斜面呈藍色為陽性。當前19頁，總共26頁。與人體感染有關的諾卡菌種的生理生化特性菌種45℃生長葡萄糖阿拉伯糖側金盞花醇肌醇鼠李糖半乳糖枸櫞酸鹽利用山梨醇利用尿素酶硝酸鹽還原水解酪蛋白水解七葉苷水解腺嘌呤膿腫諾卡菌-+-----+-++---星形諾卡菌-+---vv+-++-+-皮疽諾卡菌++---+---+--+-巴西諾卡菌-+--+-++-++++-豚鼠耳炎諾卡菌V+v-+----++-++短鏈諾卡菌-----v------+-新星諾卡菌-+-------++---假巴西諾卡菌-+--+-++-+-+++南非諾卡菌v+-vv-v+v++-+-肉色諾卡菌---------+----少食諾卡菌+--------+----非洲諾卡菌++-------++---當前20頁，總共26頁。2.藥敏試驗：

方法：將0.5麥氏單位的菌液接種于MH瓊脂培養(yǎng)基，約10min后加藥敏紙片：慶大霉素10μg,妥布霉素10μg，阿米卡星30μg,紅霉素15μg,溫育于35℃經(jīng)72h。

判定耐藥的標準為：

慶大霉素抑菌環(huán)≤15mm，妥布霉素≤20mm,

阿米卡星≤20mm,

紅霉素≤30mm，環(huán)丙沙星≥35mm。屬內(nèi)鑒定當前21頁，總共26頁。屬內(nèi)鑒定慶大霉素妥布霉素阿米卡星紅霉素SSSSRSSR.RRSRSSSRRRRR新星諾卡菌星形諾卡菌短鏈諾卡菌皮疽諾卡菌星形諾卡菌Ⅳ巴西諾卡菌假巴西諾卡菌星形諾卡菌Ⅰ/Ⅵ豚鼠耳炎諾卡菌Cit星形諾卡菌Ⅳ皮疽諾卡菌MH明顯黃色菌落巴西諾卡菌假巴西諾卡菌星形諾卡菌Ⅰ/Ⅵ豚鼠耳炎諾卡菌+-+-環(huán)丙沙星≥35mIno++--假巴西諾卡菌巴西諾卡菌豚鼠耳炎諾卡菌星形諾卡菌Ⅰ/Ⅵ當前22頁，總共26頁。四、臨床意義

諾卡菌在自然界分布廣泛，多為腐生寄生菌，與人類關系最大的是星形諾卡菌復合體（星形、鼻疽和新星，引起90%的非皮膚部位感染）；巴西諾卡菌（熱帶的足分枝菌病和非熱帶肺部感染，CNS），多為外源性感染。

當前23頁，總共26頁。臨床與感染部位1、足分枝菌病：巴西諾卡菌，熱帶地區(qū)，可通過損傷的皮膚侵犯皮下組織，產(chǎn)生慢性化膿樣肉芽腫，表現(xiàn)為膿腫及多發(fā)性瘺管，好發(fā)于足和腿部。2、孢子絲菌?。盒切沃Z卡菌，皮膚淋巴3、肺部-吸入性：星形諾卡菌，慢性，X光顯示滲入性結節(jié)，空洞，多結節(jié)，類似結核病。星形諾卡菌肺炎患者的痰標本呈肺結核樣乳酪樣痰。4、播散性：由肺部感染引起，90%為星形諾卡菌，CNS占40%，膿腫或肉芽腫；其他部位：眼，腎，關節(jié)，心臟。當前24頁，總共26頁。五、治療一、原則：依宿主、感染部位及體外活性用藥；首選磺胺類，必須治療6-12個月，對耐藥