定性酶免疫測(cè)定的數(shù)據(jù)處理

定性酶免疫測(cè)定的數(shù)據(jù)處理第1頁(yè)/共25頁(yè)定性？定量？定性測(cè)定常以“有”或“無(wú)”也即“陽(yáng)性”或“陰性”來(lái)表達(dá)測(cè)定結(jié)果；半定量測(cè)定雖介于定性和定量之間，但從嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)，其仍屬于定性測(cè)定，只不過(guò)其對(duì)定性測(cè)定中的“陽(yáng)性”作了進(jìn)一步的分級(jí)，即所謂的強(qiáng)陽(yáng)性·陽(yáng)性·弱陽(yáng)性的區(qū)別；定量測(cè)定的結(jié)果則以濃度（如IU/L、ug/L等〕的方式表達(dá)。第2頁(yè)/共25頁(yè)定性測(cè)定結(jié)果確定的依據(jù)定性測(cè)定結(jié)果確定的依據(jù)在于陽(yáng)性陰性判定值（Cut-off）的建立，Cut-off值的確立應(yīng)盡可能地避免假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。除了Cut-off值以外，還有許多其它的設(shè)值方法以判斷陰性和陽(yáng)性結(jié)果，如S/N（常稱為P/N）比值（Ratio）等。

第3頁(yè)/共25頁(yè)與酶免疫測(cè)定數(shù)據(jù)處理和結(jié)果報(bào)告有關(guān)的概念標(biāo)準(zhǔn)差適用于正態(tài)分布的標(biāo)準(zhǔn)差（SD），不能泛泛地用于酶免疫測(cè)定結(jié)果的判定。這是因?yàn)殛幮詤⒖佳宓拿该庖邷y(cè)定值的分布常為非正態(tài)分布，呈一正向偏斜。第4頁(yè)/共25頁(yè)概念變異系數(shù)重復(fù)性（Reproducibility）：一般通過(guò)重復(fù)兩次測(cè)定樣本來(lái)觀察。測(cè)定下限（Detectability）：是指超過(guò)零劑量精密度的最低抗原濃度，可通過(guò)t分布（一邊拖尾，因?yàn)榇藭r(shí)曲線只有上升趨勢(shì)）計(jì)算在測(cè)定下限時(shí)的吸光度值的均值差。測(cè)定敏感性（Sensitivity):是指一實(shí)驗(yàn)的測(cè)定反應(yīng)對(duì)待測(cè)物質(zhì)濃度變化的改變，即dR/dC。

第5頁(yè)/共25頁(yè)概念陽(yáng)性測(cè)定能力指數(shù)（DI（＋））可定義為一實(shí)驗(yàn)對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)定后給出陽(yáng)性結(jié)果的能力（通常稱為“敏感性”）；DI（＋）=[真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）]×100%

陰性測(cè)定能力指數(shù)（DI（－））則為對(duì)陰性樣本測(cè)定給出陰性結(jié)果的能力（通常稱為“特異性”）；DI（－）=

[真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）]×100%

第6頁(yè)/共25頁(yè)概念陽(yáng)性結(jié)果的可靠性（‘預(yù)示值’）即測(cè)定為陽(yáng)性的標(biāo)本實(shí)際上為陽(yáng)性的可能性。

=[真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）]×100%陰性結(jié)果的可靠性則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。

=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%第7頁(yè)/共25頁(yè)測(cè)定結(jié)果的報(bào)告和數(shù)據(jù)處理

酶免疫測(cè)定數(shù)據(jù)處理報(bào)告在理想情況下應(yīng)達(dá)到下述要求:(1)易于讓不熟悉該試驗(yàn)的人所理解;(2)定性測(cè)定必須結(jié)果明確,即陽(yáng)性或陰性、反應(yīng)或不反應(yīng)、在正常范圍內(nèi)或不正常等；（3）定量測(cè)定的線性；（4）數(shù)據(jù)的可重復(fù)性；（5）試驗(yàn)的評(píng)價(jià)不應(yīng)建立在假定的正態(tài)分布上；（6）結(jié)果用于進(jìn)一步分析處理（如流行病學(xué)分析）的充分性。

第8頁(yè)/共25頁(yè)定性酶免疫測(cè)定的CUT-OFF值第9頁(yè)/共25頁(yè)確定CUT-OFF值的方法一使用陰性血清測(cè)定結(jié)果均值的2或3倍作為陽(yáng)性判斷值：取一定數(shù)量（通常較少）的陰性血清樣本，使用已建立的酶免疫測(cè)定方法或試劑盒測(cè)定，如果上述陰性血清樣本的吸光度均值為0.05，則該次測(cè)定的陽(yáng)性判斷值為0.10或0.15。例如現(xiàn)有的試劑盒結(jié)果的判定以P/N或S/N≥2.1為陽(yáng)性，其依據(jù)即是以陰性參考血清的2倍作為陽(yáng)性判定值。這種Cut-off值設(shè)定方法，可以較為避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，但假陰性可能比例較高。總的來(lái)說(shuō)，這是一種非常粗糙的Cut-off值設(shè)定方法。第10頁(yè)/共25頁(yè)確定CUT-OFF值的方法二首先測(cè)定大量（數(shù)千）正常人血清樣本，然后將所得到的吸光度均值＋2或3個(gè)SD作為陽(yáng)性判斷值：當(dāng)正常人血清樣本數(shù)量足夠大時(shí)，使用特定的酶免疫測(cè)定方法測(cè)得的吸光度值將呈正態(tài)分布，在具有95.3％(單側(cè))的可信度的情況下，可以將從正常人血清測(cè)得的吸光度均值＋2SD作為陽(yáng)性判斷值；如要求99％(單側(cè))的可信度，則以吸光度均值＋3SD作為陽(yáng)性判斷值。與第一種方法相比，這種Cut-off值設(shè)定方法更為科學(xué)一些，建立在統(tǒng)計(jì)學(xué)的精確計(jì)算的基礎(chǔ)上，但由于這種方法僅考慮陰性人群，故而難以確定“灰區(qū)”，從圖32可見(jiàn)，有可能會(huì)出現(xiàn)較多的假陰性，因其將整個(gè)“灰區(qū)”幾乎都?xì)w為陰性。第11頁(yè)/共25頁(yè)確定CUT-OFF值的方法三在測(cè)定大量正常人血清樣本的同時(shí)，測(cè)定大量陽(yáng)性血清樣本，如測(cè)定值為正態(tài)分布，則根據(jù)u檢驗(yàn)的特點(diǎn)，以單側(cè)99.5%的可信限先分別確定陰性和陽(yáng)性的Cut-off值；如為非正態(tài)分布，則百分位數(shù)法單側(cè)95％或99％來(lái)確定Cut-off值。陰性和陽(yáng)性人群的Cut-off值確定后，根據(jù)“灰區(qū)”的大小，綜合平衡考慮假陽(yáng)性和假陰性率的情況下確定Cut-off值。這種Cut-off值確定方法，較之單純從陰性人群考慮要較為全面一些，并且對(duì)測(cè)定的“灰區(qū)”有一個(gè)估計(jì)，不會(huì)出現(xiàn)將“灰區(qū)”全部納入陰性的情況。第12頁(yè)/共25頁(yè)確定CUT-OFF值的方法四在測(cè)定大量正常人和大量陽(yáng)性血清樣本的同時(shí)，測(cè)定轉(zhuǎn)化型血清（從陰性轉(zhuǎn)變?yōu)殛?yáng)性過(guò)程中的系列血清）樣本，取假陽(yáng)性和假陰性發(fā)生率最低，且能區(qū)別抗原轉(zhuǎn)化至抗體出現(xiàn)點(diǎn)的吸光度值作為陽(yáng)性判斷值：該方法與上述（3）的區(qū)別是增加了轉(zhuǎn)化型血清樣本的測(cè)定，使得陽(yáng)性判斷值的確定，能最佳地將陽(yáng)性與陰性樣本區(qū)別開(kāi)來(lái)。這種Cut-off值確定方法應(yīng)該說(shuō)是目前最佳的模式，但由于轉(zhuǎn)化型血清樣本非常昂貴且難以得到，因此應(yīng)用起來(lái)有一定難度。第13頁(yè)/共25頁(yè)ROC曲線在Cut-off值設(shè)定中的應(yīng)用

ROC是英文ReceiverOperatingcharacteristic的縮寫，可直譯為接收機(jī)工作特性，其最初主要是用于通訊學(xué)領(lǐng)域。在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域內(nèi)，ROC不僅可用于不同檢驗(yàn)方法之間的比較，而且可用于對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目臨床準(zhǔn)確性的評(píng)價(jià)以及決定正常和異常的分界點(diǎn)。

第14頁(yè)/共25頁(yè)ROC曲線描述的是特定的檢驗(yàn)方法的靈敏度(真陽(yáng)性率)(TPR)[=真陽(yáng)性數(shù)/(真陽(yáng)性+假陰性)]與假陽(yáng)性率(FPR)[=假陽(yáng)性數(shù)/(假陽(yáng)性+真陰性)]之間的關(guān)系，即以FPR為橫坐標(biāo)、TPR為縱坐標(biāo)所作出來(lái)的一條曲線

第15頁(yè)/共25頁(yè)根據(jù)這種關(guān)系，可確定區(qū)分正常與異常的分界點(diǎn)究竟在何處最為合適，也就是說(shuō)此時(shí)的假陽(yáng)性和假陰性率最低或比例最為適當(dāng)或最為符合使用目的。因此，當(dāng)然就可以用于ELISA測(cè)定Cut-off值的確定。第16頁(yè)/共25頁(yè)ROC曲線的含義

第17頁(yè)/共25頁(yè)

怎樣利用ROC曲線來(lái)確定Cut-off值

第18頁(yè)/共25頁(yè)怎樣利用ROC曲線來(lái)確定Cut-off值第19頁(yè)/共25頁(yè)怎樣利用ROC曲線來(lái)確定Cut-off值第20頁(yè)/共25頁(yè)Cut-off值批間差異的控制

ELISA測(cè)定每次的Cut-off值都會(huì)有所差異。但只要這種差異是在允許的范圍內(nèi)，就不會(huì)影響Cut-off值的應(yīng)用。通常有這樣幾種方法來(lái)控制Cut-off值的批間變異，即（1）測(cè)定多份（如50份）正常人血清，確定其吸光度均值＋3SD為試劑盒內(nèi)陽(yáng)性參考血清測(cè)定吸光度的40％。因此，在使用該試劑盒的臨床檢測(cè)中，可將這種參考血清作為測(cè)定控制的一個(gè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，以校準(zhǔn)試驗(yàn)系統(tǒng)的Cut-off值。（2）在測(cè)定中包括標(biāo)準(zhǔn)化的陽(yáng)性混合血清和陰性混合血清。（3）還有一個(gè)簡(jiǎn)單的非參數(shù)方法是測(cè)定許多陰性血清，于是將Cut-off值設(shè)于95％的陰性血清的吸光度值低于此值處，然后將確定的關(guān)鍵的參考血清包括在試劑盒內(nèi)作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。

第21頁(yè)/共25頁(yè)定性酶免疫測(cè)定結(jié)果判斷及報(bào)告結(jié)果判斷：按試劑盒所定的