實(shí)驗(yàn)pH值對唾液淀粉酶活性的

實(shí)驗(yàn)pH值對唾液淀粉酶活性的第1頁/共21頁實(shí)驗(yàn)4pH值對唾液淀粉酶活性的影響

第2頁/共21頁實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.通過實(shí)驗(yàn)觀察pH對酶促反應(yīng)的影響。2.提高分析問題和動手能力。第3頁/共21頁實(shí)驗(yàn)原理淀粉在淀粉酶催化下水解，其最終產(chǎn)物是麥芽糖和葡萄糖。在水解反應(yīng)過程中淀粉的分子量逐漸變小，形成若干分子量不等的過渡性產(chǎn)物，稱為糊精。向反應(yīng)系統(tǒng)中加入碘液可檢查淀粉的水解程度，淀粉遇碘呈藍(lán)色，麥芽糖對碘不顯色。糊精中分子量較大者呈藍(lán)紫色，隨糊精的繼續(xù)水解，對碘呈橙紅色。根據(jù)顏色反應(yīng)，可以了解淀粉被水解的程度。在不同酸堿度下，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一樣。進(jìn)而了解pH對酶促反應(yīng)的影響。第4頁/共21頁實(shí)驗(yàn)器材：【器材】：10mm×100mm試管、試管架、恒溫水浴箱、記號筆、一次性杯子【試劑】：1．1%淀粉溶液：配制方法：取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸餾水，調(diào)成糊狀，再加蒸餾水約80毫升，加熱，使其溶解，最后用蒸餾水稀釋至100毫升，冰箱保存。2．稀釋唾液：同實(shí)驗(yàn)33．緩沖溶液：4．碘溶液

取碘化鉀2g溶于少量蒸餾水中，再取碘1.27g，完全溶解后加蒸餾水至200ml，貯于棕色瓶中。使用前用水稀釋5倍。第5頁/共21頁實(shí)驗(yàn)步驟

加入物(ml)1231%淀粉溶液PＨ5.7緩沖液PH6.8緩沖液PH8.0緩沖液3

33100010001搖勻后37℃恒溫水浴中保溫5分鐘稀唾液2

2

2

取三支試管按下表操作：第6頁/共21頁將上面各管搖勻后放入37℃恒溫水浴中保溫。放置10分鐘后取出，分別向各管加入稀碘液1滴，觀察3管中顏色的區(qū)別，說明pH對酶促反應(yīng)的影響。第7頁/共21頁實(shí)驗(yàn)5溫度對酶促反應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.通過實(shí)驗(yàn)觀察溫度對酶促反應(yīng)的影響。2.提高分析問題和動手能力。實(shí)驗(yàn)原理：同實(shí)驗(yàn)4。根據(jù)顏色反應(yīng)，可以了解淀粉被水解的程度。在不同溫度，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一樣。進(jìn)而了解溫度對酶促反應(yīng)的影響。第8頁/共21頁實(shí)驗(yàn)器材：【器材】：10mm×100mm試管、試管架、恒溫水浴箱、沸水浴、記號筆、一次性杯子【試劑】：1．1%淀粉溶液：同實(shí)驗(yàn)42．稀釋唾液：同實(shí)驗(yàn)33．碘溶液

取碘化鉀4g溶于少量蒸餾水中，再取碘2g，完全溶解后加蒸餾水至300ml，貯于棕色瓶中。第9頁/共21頁實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法：加入物ml1231%淀粉溶液333PH6.8緩沖液111

搖勻后分別于37、沸水、冰浴5分鐘稀唾液111搖勻后分別于37、沸水、冰浴10分鐘取三支試管按下表操作：表溫度對酶促反應(yīng)的影響取出后，分別向各管加入稀碘液1滴，觀察3管中顏色的區(qū)別，說明溫度對酶促反應(yīng)的影響。第10頁/共21頁實(shí)驗(yàn)6唾液淀粉酶的活性測定實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)酶活力，酶活力單位，比活力的測定，加深對概念的理解；2.學(xué)會用3,5-二硝基水楊酸測定還原糖的含量第11頁/共21頁實(shí)驗(yàn)原理：在最適條件下，每分鐘催化單位量的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量定義為一個活力單位。酶的比活力：用每mg蛋白質(zhì)酶活力單位數(shù)表示，表示酶的純度。每隔一段時間測定一次水解的橫渡一濃度為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)作圖，在圖上找出開始部分線形好的部分求出斜率。進(jìn)而求出酶的活力與比活力。

3,5----二硝基水楊酸與還原糖共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量和反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈現(xiàn)比例關(guān)系，利用比色法可測知樣品的含糖量。該方法是半微量測糖法，操作簡便，快速，雜質(zhì)干擾較小。第12頁/共21頁實(shí)驗(yàn)器材：【器材】：10mm×100mm試管、試管架、恒溫水浴箱、沸水浴、記號筆、一次性杯子【試劑】：1．3,5-二硝基水楊酸試劑（又稱DNS試劑）：甲液：溶解6.9g結(jié)晶酚于15.2ml10％氫氧化鈉中，并稀釋至69ml，在此溶液中加入6.9g亞硫酸氫鈉；乙液：稱取255g酒石酸鉀鈉，加到300ml10％氫氧化鈉中，再加入880ml1％3,5-二硝基水楊酸溶液。將甲液與乙液相混合即得黃色試劑，貯于棕色試劑瓶中，在室溫下放置7－10天以后使用。2．0.1％葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mg分析純的葡萄糖（預(yù)先在105℃干燥至恒重），用少量蒸餾水溶解后定容至100ml，冰箱保存?zhèn)溆?。?3頁/共21頁實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法：1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定取8支試管編號，按下表操作：試劑處理

試管編號01234567葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml—0.20.40.60.81.01.21.4蒸餾水/ml2.01.81.61.41.21.00.80.63,5-二硝基水楊酸/ml22222222λ=550nm的吸光值（A）

水浴加熱5min，迅速取出冷卻，在向每管加入21ml的蒸餾水于550nm