免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測中應(yīng)用

目錄1免疫磁珠技術(shù)的介紹2免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測中的應(yīng)用3小結(jié)第一頁，共19頁。1、免疫磁珠技術(shù)的介紹1.1免疫磁珠技術(shù)簡介

免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB,簡稱磁珠)技術(shù),是近年發(fā)展起來的將固化試劑特有優(yōu)點與免疫學(xué)反應(yīng)高度特異性結(jié)合于一體的一項新技術(shù)。以免疫學(xué)為基礎(chǔ),滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個領(lǐng)域,其在免疫檢測、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面得到越來越廣泛應(yīng)用。全自動免疫磁珠技術(shù)細(xì)胞分選系統(tǒng)AutoMACSPro第二頁，共19頁。1.2免疫磁珠的結(jié)構(gòu)磁性微球高分子材料免疫配基第三頁，共19頁。1.3IMB技術(shù)的基本原理磁珠特異性抗體免疫磁珠加入待測液中抗原-抗體-磁性免疫復(fù)合物復(fù)合物分離出來撤去磁場抗原鑒定磁性外力第四頁，共19頁。以細(xì)胞分離為例圖解免疫磁珠技術(shù)的原理第五頁，共19頁。1.4IMB技術(shù)作用方式免疫磁珠分離技術(shù)直接法間接法第一抗體第二抗體

直接法是先用抗體包被磁珠,使抗體與磁珠給合(物理吸附或化學(xué)結(jié)合),再加入抗原物質(zhì),二者結(jié)合形成磁珠-第一抗體-抗復(fù)原合物,在磁力作用下,與其它物質(zhì)分離。

間接法是先用羊抗鼠IgG(第二抗體)包被磁珠,使磁珠作為第二抗體載體,當(dāng)抗原與第一抗體結(jié)合后,加入帶有第二抗體磁珠,磁珠上第二抗體便與第一抗體結(jié)合,形成磁珠-第二抗體-第一抗體-抗原復(fù)合物,在磁力作用下,與其它物質(zhì)分離。第六頁，共19頁。1.5IMB技術(shù)的優(yōu)點

特異性強、分離速度快、效率高可重復(fù)性好、操作簡單不需要昂貴的儀器設(shè)備,不影響被分離細(xì)胞或其它生物材料的生物學(xué)性狀和功能等第七頁，共19頁。2、免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測中的應(yīng)用大腸桿菌布魯式菌單增李斯特菌副溶血性弧菌沙門式菌黃曲霉菌金黃色葡萄球菌阪崎腸桿菌第八頁，共19頁。2.1IMB技術(shù)對大腸桿菌O157H7的檢測(GB/T4789.36-2008)第九頁，共19頁。2.2IMB技術(shù)對單增李斯特菌檢測(SN/T

0184.3-2008)第十頁，共19頁。2.3IMB技術(shù)對布魯氏桿菌檢驗(DB32/T-2016)第十一頁，共19頁。2.4IMB對副溶血性弧菌檢驗(DB32/T-2010)第十二頁，共19頁。2.5IMB技術(shù)對其余食源性致病微生物的檢測應(yīng)用

劉琳琳等人利用“自制的金屬螯合免疫磁珠”來檢測食品中金黃色葡萄球菌。該法能夠在30min內(nèi)富集檢測金黃色葡萄球菌且檢測低限可達(dá)100cfu。同時磁珠可保持活性達(dá)3周以上。此檢測方法同傳統(tǒng)鑒定和分離金黃色葡萄球菌的方法相比具有速度快、靈敏性高、成本低的優(yōu)點。

杜強等人利用“全自動免疫磁珠分選系統(tǒng)”檢測食品中沙門氏菌，與國標(biāo)法相比，全自動免疫珠分選系統(tǒng)取消了SC和TTB增菌，經(jīng)BPW增菌后直接使用系統(tǒng)富集目標(biāo)菌并接種顯色平板。結(jié)果免疫磁珠法陽性檢出率為32％，國標(biāo)法陽性檢出率為31％，二者無顯著性差異(P>0.05)。但磁珠法取消了二次增菌的步驟，檢測時間比國標(biāo)法節(jié)省24h，且平板上的單個菌落生長率和菌株特異性也更好。第十三頁，共19頁。

支援等人基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)特異性,以及量子點熒光標(biāo)記的高靈敏度,免疫磁珠磁性分離,免疫量子點熒光標(biāo)記聯(lián)合應(yīng)用的檢測方法,對阪崎腸桿菌試驗結(jié)果表明，能在2h內(nèi)對乳制品樣品中的食源性致病菌（阪崎腸桿菌）進行檢測，且方法特異性好，靈敏度高（達(dá)102cfu/mL），其在食品檢測領(lǐng)域的應(yīng)用成為可能。

蘇惠玉等人應(yīng)用“山羊抗黃曲霉菌血清的免疫磁珠”捕獲食品中的黃曲霉菌，不需要進行增菌培養(yǎng)，應(yīng)用磁捕獲-熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LMC-FPCR)技術(shù)快速檢測鑒定食品中的黃曲霉菌。結(jié)果：IMC-FPCR方法檢測黃曲霉菌的最低檢測值為2cfu／mL。結(jié)論：建立了黃曲霉菌的磁捕獲-熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(IMC-FPCR)，該方法可用于食品中黃曲霉菌的快速檢測及鑒定。第十四頁，共19頁。2.6IMB技術(shù)在病毒檢測中應(yīng)用研究者利用抗病毒表面蛋白的單抗或多抗，開發(fā)了能捕獲病毒顆粒的免疫磁珠，并對其應(yīng)用時各個影響因素(孵育溫度，時間等)進行了初步評估，證明了利用免疫磁珠技術(shù)可捕獲病毒顆粒并用于各種檢測的可行性。

如Park等制備了針對諾如病毒(norovirus)的GⅠ-1和GⅡ-4外膜蛋白的多克隆抗體，與磁珠偶聯(lián)獲得了相應(yīng)的免疫磁珠后，采用IMBS技術(shù)與熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR聯(lián)用(IMBS-real-timeRT-PCR)，對人為污染已知量的諾如病毒的草莓進行檢測，結(jié)果表明其檢出限可低至3～7個RT-PCR單位。第十五頁，共19頁。2.7IMB技術(shù)在微生物檢測應(yīng)用時的主要影響因素1免疫磁珠的質(zhì)量2目標(biāo)菌、雜菌及磁珠的比例3待測標(biāo)本的性狀4磁珠與待測標(biāo)本的反應(yīng)條件第十六頁，共19頁。2.8IMB技術(shù)在食源性致病菌檢測中應(yīng)用進展1IMB技術(shù)結(jié)合顯色培養(yǎng)基對食源性致病菌進行檢測2IMB技術(shù)結(jié)合PCR技術(shù)對食源性致病菌進行檢測3IMB技術(shù)結(jié)合免疫學(xué)技術(shù)對食源性致病菌進行檢測4IMB技術(shù)結(jié)合電化學(xué)技術(shù)對食源性致病菌進行檢測5IMB技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀對食源性致病菌進行檢測第十七頁，共19頁。3、小結(jié)

IMB技術(shù)在微生物學(xué)檢測領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越廣泛，其方便有效性主要在于代替了常規(guī)的選擇性增菌培養(yǎng)過程，可特異地將目的微生物從樣品中快速分離出來。與其他先進檢測技術(shù)結(jié)合使用，充分發(fā)揮二者優(yōu)勢，還能節(jié)約更多時間、發(fā)揮更大的作用。

但目前在免疫磁珠的生產(chǎn)上還存在一些問題，其制備難度大，要獲得均勻性好、超順磁性、粒度適中、易于結(jié)合蛋白質(zhì)的磁珠很難?，F(xiàn)今大部分的磁珠市場被瑞士Dynal和德國的Miltenyi兩大公司所占有，其產(chǎn)品價格昂貴，這極大地限制了免疫磁珠技術(shù)在我國的普及及應(yīng)用。因此，商業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的國產(chǎn)免疫磁珠是今后研究的主要方向。相信隨著研究的不斷深入，免疫磁珠技術(shù)的應(yīng)用前景定會更加廣闊。第十八頁，共19頁。References:[1].蘇惠玉,謝榮珍與牛建軍,免疫磁珠捕獲結(jié)合熒光PCR技術(shù)檢測食品中黃曲霉菌的研究.食品科學(xué),2010(10):第287-291頁.[2].費楓與黃迅辰,免疫磁珠的原理與特性及其在動物源性食品檢測中的應(yīng)用研究.浙江畜牧獸醫(yī),2014(05):第43-47頁.[3].劉細(xì)霞與涂俊銘,免疫磁珠分離技術(shù)及其在食源性致病菌檢測中應(yīng)用的進展.中國抗生素雜志,2014(12):第956-960頁.[4].盛躍穎與陳敏,免疫磁珠分離技術(shù)在病原微生物檢測中的應(yīng)用.中國食品衛(wèi)生雜志,2011(05):第478-481頁.[5].杜強與屠博文,全自動免疫磁珠分選系統(tǒng)檢測沙門氏菌.食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2016(05):第1836-1839頁.[6].支援等,一種快速檢測阪崎腸桿菌的新方法——免疫磁性分離熒光標(biāo)記.乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2010(05):第231-233+245頁.[7]馬燕萍.免疫磁珠技術(shù)簡介[J].山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報.2000.l0:l0.[8]范蓉,錢和年.免疫磁珠技術(shù)一一種新的免疫學(xué)技術(shù)[J].國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊).1998,21(1):3.[9]陸東東.免疫磁珠技術(shù)的應(yīng)用研究[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗.l999.14(2):10.[10]PetzingerE,WeidenbachA.Mycotoxinsinthefoodchain:eroleofochratoxins[J].LivestockProductionScience,2002.76(3):245-250.[11]PetzingerE,ZieglerK.OchratoxinAfromatoxicologica1