-內(nèi)酰胺酶的分類及檢測

β-內(nèi)酰胺酶的分類及檢測表2β-內(nèi)酰胺酶的結(jié)構(gòu)和功能分類分子結(jié)構(gòu)功能舉例最適底物抑制劑(Ambler)(Bush)PENCARBOXCRCTXATMIPMCLAVCLOXEDTA絲氨酸酶A2aPC1，LEN-1卅十－土－－－卄－－2bSHV-1,TEM-1卅十十卄－－－卄－－2beK1,TEM-3,卅十十卄卄卄－卄－－SHV-2,PER-12brTEM-31卅十十十－－－－－－2CPSE-1,BRO-1卄卅十十－－－十－－2e卄卄－卄卄卄－卄－－2fSme-1,NMC-A卄十?十十卄卄十－－IMI-1C1AmpC卄十－卅十－－－卄－D2dOXA-1卄十卅十－－－V－－未定4AVS-1卄卄卄VV－－－－－金屬酶B3IMP-1卄卄卄卄卄－卄－－卄嗜麥芽L-1

Bush-J-M分類策略

3組金屬酶頭孢菌素酶1組

酶EDTA

2e組

2a組

2d組

青霉素酶2c組2f組

非金屬酶4組2be組

廣譜酶2b

2br組A類β-內(nèi)酰胺酶1。

A類β-內(nèi)酰胺酶：廣譜酶2b組ABA大腸埃希菌TEM-1型酶結(jié)構(gòu)；B肺炎克雷伯菌的SHV-1型酶結(jié)構(gòu)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(2be)

經(jīng)典超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

TEM型ESBLsSHV型ESBLsSHV-2型ESBLs、SHV-5型ESBLsSHVΩ環(huán)突變型ESBLs

其他超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

CTX-M-型酶可為分4個小組PER-1及其相關(guān)ESBLPER-1、-2、VEB-1、2CME-1TLA-1特殊的非典型ESBLSFO-1、GES-1TEM型ESBLs1．Glu140→Lys和Glu240→Lys替換：對頭孢他啶和氨曲南耐藥2．Arg164→Ser或His：對頭孢他啶耐藥，對頭孢噻肟敏感3．Gly238→Ser：主要提高了對頭孢噻肟的水解能力（如TEM-19)A類β-內(nèi)酰胺酶與B類、C類和D類酶的同源性比較B類β-內(nèi)酰胺酶又稱金屬β-內(nèi)酰胺酶，Bush功能分類中屬于3組酶，能滅活青霉素類、頭孢菌素類和碳青酶烯類抗生素，但對安曲南敏感；酶活性可被EDTA抑制，但酶抑制劑克拉維酸和氯唑西林對它無作用。金屬酶的功能亞分類：3a、3b、3c金屬酶的分子生物學(xué)亞型分類:B1、B2、B3

亞分類物學(xué)亞類酶的型別宿主發(fā)現(xiàn)國家發(fā)現(xiàn)時間分子量等電點3aB1CcrA3脆弱擬桿菌美國199426未測3aB1CcrA4脆弱擬桿菌美國199426未測3aB1CcrA脆弱擬桿菌美國1986265.23aB1PCM-1洋蔥假單胞菌未知1994未測8.53aB1IMP-1銅綠假單胞菌日本1991289.03aB1IMP-2不動桿菌屬意大利1999268.13aB1IMP-3銅綠假單胞菌日本20003aB1IMP-4不動桿菌屬香港20018.0楊氏枸櫞酸桿菌中國2001未測未測3aB1IMP-6粘質(zhì)沙雷菌日本2001未測未測3aB1IMP-7銅綠假單胞菌加拿大20023aB1IMP-8肺炎克雷伯菌中國臺灣2001未測8.23aB1VIM-1銅綠假單胞菌意大利19995.33aB1VIM-2銅綠假單胞菌法國2000未測未測3aB1VIM-3銅綠假單胞菌臺灣2000未測5.13bB2CphA嗜水氣單胞菌意大利1993288.03bB2A2h嗜水氣單胞菌美國1990288.03bB2ACP嗜水氣單胞菌蘇格蘭1996318.23bB2AsbM1簡達氣單胞菌美國1990349.13bB2AsA-1殺蛙氣單胞菌蘇格蘭199419>7.93bB2Imis溫和氣單胞菌英國1995未測9.3cB2戈氏軍團菌19862510.53aB3L1嗜麥芽窄食單胞菌日本19821186.9

獲得性金屬酶

（1）IMP型金屬酶（2）VIM型金屬酶β-內(nèi)酰胺酶的檢測1．酶蛋白性質(zhì)分析：包括表型分析和酶動力學(xué)分析。2．基因分析：基因型別分類、測序、分析其結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控基因。3．轉(zhuǎn)移性分析：分析酶編碼基因位于質(zhì)粒上還是染色體上；在不在整合子中。

收集菌株耐藥表型分析（紙片藥敏試驗和E-試驗分析）提取酶粗制品進行三相水解試驗、等電聚焦電泳和酶動力學(xué)分析根據(jù)結(jié)果判定酶的類群，選擇相應(yīng)PCR引物擴增陽性陰性

整合子PCR初篩

陽性陰性

鳥槍法克隆可表達β-內(nèi)酰胺酶基因

測定PCR產(chǎn)物序列PCR擴增全測定全克隆片段可變區(qū)并測序序列整合子檢查提取質(zhì)粒接合實驗克隆并轉(zhuǎn)化到DH5α表達β-內(nèi)酰胺酶陽性陰性

鈣轉(zhuǎn)或MgCl2或電轉(zhuǎn)化

ESBLs和AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢測一、ESBLs的檢測1．紙片法：表1肺克、催娩克雷伯、大腸埃希菌ESBLs產(chǎn)株紙片法初篩和確證實驗2．MIC法：表2肺克、催娩克雷伯、大腸埃希菌ESBLs產(chǎn)株MIC法初篩和確證實驗二、AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢測1．初篩試驗2．頭孢西丁三相水解試驗3．聯(lián)合用克拉維酸和氯唑西林兩種抑制平行