2014年-2015工作文件優(yōu)寧維學(xué)術(shù)美天旎基礎(chǔ)知識(shí)

1/1MD0xxx.01MiltenyiBiotec:

MACS?

技術(shù)分選

德國美天旎生物技術(shù)有限公司

.cn概述MACS技術(shù)現(xiàn)已成為細(xì)胞分選的金標(biāo)準(zhǔn)，是全球公認(rèn)的高品質(zhì)的分選細(xì)胞工具。

適用范圍：

許多不同的領(lǐng)域均可使用該技術(shù)少量細(xì)胞到大量細(xì)胞，高頻細(xì)胞到罕見細(xì)胞復(fù)雜的細(xì)胞亞群

MACS原理MACS分選柱為我們公司的專利產(chǎn)品，用于滯留磁性標(biāo)記的細(xì)胞。

MACS技術(shù)基礎(chǔ)MACS微珠MACS分選柱MACS分選器MD0347.01MACS技術(shù)原理MACS(MagneticActivatedCellSorting)：免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)基于抗原抗體的特異性識(shí)別磁性微珠通過偶聯(lián)在其上的抗體與細(xì)胞相連在高強(qiáng)度、梯度磁場中分離細(xì)胞MACS微珠MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒，可用于目的細(xì)胞的磁性標(biāo)記。

特性：

50nm大小對(duì)細(xì)胞沒有毒性可生物降解不影響細(xì)胞特性種類：直標(biāo)、間標(biāo)、多選微珠

MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑MACS微珠：直標(biāo)微珠多選微珠抗熒光素微珠

（Anti-FITC,Anti-PE,

Anti-APC）鏈霉親和素微珠

（StreptavidinMicroBeads）

抗生物素微珠

（Anti-BiotinMicroBeads）抗免疫球蛋白微珠

（Anti-ImmunoglobulinMicroBeads）MACS?間接標(biāo)記磁珠MACS?

間標(biāo)磁珠：極大地?cái)U(kuò)展了分選范圍?

在沒有直接標(biāo)記微珠可選時(shí)

?

使用自備抗體或配體的磁性分選中

?

分選或去除用多個(gè)抗體混合物標(biāo)記的多種細(xì)胞

?

分選稀有細(xì)胞和抗原弱表達(dá)的細(xì)胞

? 分選標(biāo)記蛋白質(zhì)

MD0044.02MACS模擬APC：T細(xì)胞活化、擴(kuò)增試劑盒NewMACS分選柱

》鐵珠表面有親水包被，不損傷細(xì)胞。

》無菌包裝。

》可用于分選多種細(xì)胞及亞細(xì)胞物質(zhì)、細(xì)菌、病毒、mRNA和蛋白質(zhì)。作用：將磁場增強(qiáng)1000－10000倍細(xì)胞從磁場中經(jīng)過，受力均勻，保證純度和回收率過濾掉細(xì)胞團(tuán)塊

分選柱的種類陽性分選柱陰性分選柱用于分子生物學(xué)的分選柱陽性分選柱最大的細(xì)胞上樣量為2×108XSLSMS最大捕獲的細(xì)胞量為107最大的細(xì)胞上樣量為2×109最大的細(xì)胞上樣量為2×1010最大捕獲的細(xì)胞量為108最大捕獲的細(xì)胞量為109您需要分選的細(xì)胞總量是多少？您需要分選的是高頻細(xì)胞還是稀有細(xì)胞？細(xì)胞頻度〈5%時(shí)，使用兩個(gè)分選柱分選稀有細(xì)胞！回收率優(yōu)先純度優(yōu)先最大的細(xì)胞上樣量最大的細(xì)胞捕獲樣量1071081082×1081092×1082×1095×108去除分選抗原表達(dá)強(qiáng)弱如何？您優(yōu)先考慮的是純度還是回收率？您需要分選的細(xì)胞總量是？MS柱LS柱LD柱CS柱D柱μ分選柱專門為μMACSTM或thermoMACSTM

分選器而設(shè)計(jì)的。應(yīng)用：mRNA的分離

cDNA合成免疫沉淀

DNA和RNA結(jié)合蛋白的純化蛋白相互作用MD0651.01MACS?

磁性分選基本原理MACS微珠進(jìn)行磁性標(biāo)記未標(biāo)記的細(xì)胞

先行流出移出磁場，洗脫陽性分選的細(xì)胞分選策略

? 陽性分選

?

去除分選

?

去除分選后再陽性分選

?多重分選

MD0044.02MACS細(xì)胞分選策略

1、陽性分選

? 根據(jù)特異性標(biāo)志分選細(xì)胞:陽性分選是指目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，直接分選

?

優(yōu)點(diǎn)：

》高純度，尤其是富集稀有的細(xì)胞

》高回收率

》操作簡便、迅速

MD0044.02應(yīng)用CD34磁珠陽性分選人造血干細(xì)胞

（過2個(gè)分選柱）分選前分選后陽性成分

MACS細(xì)胞分選策略

2、去除分選

?

去除分選是磁性標(biāo)記非目的細(xì)胞，并將其從細(xì)胞混合物中去除，即未磁性標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞。

?

去除分選策略適用范圍

》去除不需要的細(xì)胞

》缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞

》不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合

》需進(jìn)一步通過陽性選擇分選細(xì)胞亞群

MD0044.02MD0160.02去除分選磁性標(biāo)記分選未磁性標(biāo)記細(xì)胞panT細(xì)胞分選試劑盒分選小鼠未標(biāo)記T細(xì)胞分選前分選后MD0147.02

3.去除分選后再陽性分選

?

即先去除非目的細(xì)胞，再進(jìn)行陽性分選。

?

適用范圍：

》非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性選擇目的細(xì)胞的抗原。

》要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細(xì)胞。

MD0044.021.去除非CD4+T細(xì)胞。

用生物素化抗體混合物和抗生物素微珠間接磁性標(biāo)記非CD4+T細(xì)胞磁性分選去除標(biāo)記細(xì)胞

先行流出為CD4+T細(xì)胞2.CD25微珠直接磁性標(biāo)記CD25+細(xì)胞陽性分選靶細(xì)胞CD4+CD25+

調(diào)節(jié)性T滯留在分選柱上，離開磁場后洗脫下來去除后再陽性分選CD4+CD25+雙陽性細(xì)胞去除后再陽性分選小鼠CD4+CD25+雙陽性細(xì)胞分選前CD4+CD25+細(xì)胞CD4+CD25-細(xì)胞CD4+細(xì)胞MD0652.01多選微珠標(biāo)記MACS分選磁性顆粒的酶解離終止解離反應(yīng)根據(jù)第二標(biāo)志進(jìn)行微珠標(biāo)記MACS分選MACS細(xì)胞分選策略

4、多選微珠：

磁性標(biāo)記磁性分選磁珠解離第二標(biāo)志標(biāo)記磁性分選MD0xxx.01CD4多選微珠分選CD4+/CD45RO+細(xì)胞亞群分選前PBMCCD4+細(xì)胞CD4+CD45RO+細(xì)胞固相胞內(nèi)染色示意圖陽性分選磁性標(biāo)記的細(xì)胞洗脫陽性細(xì)胞將陽性細(xì)胞固定將固定的陽性細(xì)胞上柱破膜，胞內(nèi)染色洗脫，底物孵育，流式檢測及免疫組化檢測目錄解析第1-2頁：了解該目錄的結(jié)構(gòu)，我公司都有哪些產(chǎn)品。第2章：MACS技術(shù)：2.01-2.11的CliniMACS部分。此章節(jié)講述我公司技術(shù)原理、優(yōu)點(diǎn)，標(biāo)記和分選策略，主要產(chǎn)品分類和應(yīng)用概述，為全目錄的基礎(chǔ)和精華部分。第3章：人類細(xì)胞分選干細(xì)胞

T細(xì)胞

NKB

單核細(xì)胞

DCAPC

粒細(xì)胞

FCR阻斷劑第4章：腫瘤細(xì)胞分選第5章：非人類靈長類細(xì)胞分選第6章：小鼠細(xì)胞分選：干細(xì)胞

T細(xì)胞

NKBDC

單核

APC第7章：大鼠細(xì)胞分選第8章：間標(biāo)分選第9章：細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分選：了解原理，有哪幾種產(chǎn)品第10章：凋亡死亡細(xì)胞第11章：分子生物學(xué)分選第12章：分選柱第13章：分選器第14章：autoMACS：14.04第15章：輔助設(shè)備：15.02第16章：抗體：16.11,16.75-77，其他與分選部分對(duì)應(yīng)第17章：細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品：了解第18章：臨床分選：18.06,18.08,18.13,18.15,18.18,18.20,18.28,18.30,18.32,18.36內(nèi)容比較多，如果時(shí)間允許，希望大家盡量全部完成，如果不能，下面有基本幾步：一級(jí)：完成第1、2部分二級(jí)：一級(jí)+各章節(jié)productreview三級(jí)：二級(jí)+每一章節(jié)前面概述四級(jí)：三級(jí)+13，14五級(jí)：三級(jí)+人類干細(xì)胞、T、NK、DC，小鼠T、DC凋亡及死亡相關(guān)產(chǎn)品AnnexinV檢測凋亡細(xì)胞試劑盒死細(xì)胞去除試劑盒基礎(chǔ)微珠MACS細(xì)胞試劑產(chǎn)品細(xì)胞分選

人類小鼠大鼠非人類靈長類細(xì)胞分析檢測抗體檢測試劑盒MACS分選設(shè)備分選器分選柱MACS附件分選濾器各種適配器試管架其他MACS分子生物學(xué)產(chǎn)品核酸相關(guān)產(chǎn)品細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)產(chǎn)品蛋白相關(guān)產(chǎn)品基因芯片相關(guān)產(chǎn)品核酸標(biāo)記核酸分離2006/2008目錄2006目錄的第19章（首字母或貨號(hào)進(jìn)行檢索）2008目錄的23章（首字母或貨號(hào)進(jìn)行檢索）Q&A抗原決定簇和克隆號(hào)?

某一抗原，一般情況下會(huì)有幾個(gè)抗原決定簇，針對(duì)不同的抗原決定簇，可以產(chǎn)生不同的抗體。針對(duì)同一抗原

決定簇也可產(chǎn)生不同族、不同亞族和不同親和性的抗體。比如：CD133抗體有兩型抗原（CD133/1，CD133/2）克隆號(hào)有：AC133AC141293C3怎樣熒光染色標(biāo)記細(xì)胞？有以下幾種可能性：在用直接磁珠標(biāo)記后，用和磁珠上耦聯(lián)的抗體特異性一致的抗體來做熒光標(biāo)記；如果靶細(xì)胞是間接磁珠標(biāo)記，簡單的方法是使用熒光（FITC）耦聯(lián)一抗和抗該熒光（FITC）磁珠或抗亞型磁珠來做磁性標(biāo)記，這樣磁珠標(biāo)記和熒光標(biāo)記在同一步內(nèi)完成。

Q&A能否用同一克隆號(hào)抗體做磁珠標(biāo)記和熒光標(biāo)記？

是的，可以。一般說來，抗體-磁珠復(fù)合物的抗體濃度決定了只有部分細(xì)胞表位被抗體結(jié)合。因此，用同樣特異性的抗體做磁珠標(biāo)記和熒光標(biāo)記不會(huì)大大影響熒光染色的效果。這個(gè)通用規(guī)律不適合微弱表達(dá)的抗原，例如：造血祖先細(xì)胞的CD34抗原，必須用不同于微珠抗體克隆號(hào)的其他抗體來染色。

Q&A為什么要使用脫氣處理的緩沖液？怎樣脫氣？我們推薦使用脫氣的緩沖液，因?yàn)榫彌_液里過量的氣體會(huì)導(dǎo)致柱子里形成氣泡，使柱內(nèi)流速減慢，最終導(dǎo)致堵柱、損害分選效果。所以，我們推薦您用脫氣后的緩沖液來獲得最佳MACS分選效果。、優(yōu)先在室溫下抽真空或超聲10分鐘可以很容易地給緩沖液脫氣Q&A用間標(biāo)微珠滴定細(xì)胞分選用抗體您能否推薦一個(gè)標(biāo)記細(xì)胞的一抗?jié)舛龋咳绻麤]有用最適濃度一抗會(huì)發(fā)生什么？我怎樣確定我的一抗的最適滴度？為什么在一抗與細(xì)胞孵育后要洗細(xì)胞？

Q&A您能否推薦一個(gè)標(biāo)記細(xì)胞的一抗?jié)舛?？?duì)于每個(gè)抗體來說，并沒有一定的推薦使用濃度。該濃度取決于細(xì)胞表面抗原的表達(dá)量和抗體的親和力。因此應(yīng)該通過試驗(yàn)確定某個(gè)特異性抗體的最適濃度。Q&A如果一抗沒有用最適濃度會(huì)發(fā)生什么情況？

一抗使用濃度應(yīng)保證靶細(xì)胞能被高度標(biāo)記，而非靶細(xì)胞只有最低的非特異性染色。過高的抗體濃度會(huì)導(dǎo)致非靶細(xì)胞上一抗的非特異性結(jié)合，其后與間標(biāo)磁珠孵育時(shí)靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞都會(huì)被磁珠標(biāo)記。當(dāng)選用陽性分選即磁珠標(biāo)記靶細(xì)胞時(shí)，這樣會(huì)使得陽性組分純度差。當(dāng)用去除法去掉不想要的細(xì)胞時(shí)，這樣會(huì)導(dǎo)致未標(biāo)記細(xì)胞的回收率下降，因?yàn)榉翘禺愋詷?biāo)記會(huì)使想要得到的細(xì)胞滯留在柱內(nèi)。過低的抗體濃度導(dǎo)致靶細(xì)胞標(biāo)記不徹