祁自柏體外診斷試劑的分類和基本原理詳解演示文稿

祁自柏體外診斷試劑的分類和基本原理詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有74頁\編輯于星期日（優(yōu)選）祁自柏體外診斷試劑的分類和基本原理現(xiàn)在是2頁\一共有74頁\編輯于星期日

我國體外試劑的幾個發(fā)展階段

1七十年代末，乳膠凝集，血球凝(PHA,RPHA）

2八十年代初期，放射免疫測定(RIA)，

抗HBs單克隆抗體

3八十年代中期，酶聯(lián)免疫試劑，基因工程表達(dá)乙肝

病毒核心抗原和e抗原

4九十年代，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，丙肝，戊肝

病毒基因被克隆，各種基因工程抗

原被應(yīng)用

5近期，發(fā)光免疫,生物芯片技術(shù)(基因芯片，

蛋白芯片)

現(xiàn)在是3頁\一共有74頁\編輯于星期日（第一類）

酶聯(lián)免疫（酶標(biāo)板、磁珠、微粒子）類試劑酶聯(lián)免疫法：乙型肝炎病毒e抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）；癌胚抗原定量測定試劑盒(免疫熒光法)化學(xué)發(fā)光法：人生長激素（GH）定量測定試劑盒增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光免疫分析法：巨細(xì)胞病毒抗體檢測試劑盒時間分辨熒光法：游離甲狀腺素（FT4）定量測定試劑盒電化學(xué)發(fā)光法：甲型肝炎病毒抗體診斷試劑盒微粒子酶免法：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒現(xiàn)在是4頁\一共有74頁\編輯于星期日酶聯(lián)免疫試劑抗原抗體之間的特異反應(yīng)與酶的高效催化反應(yīng)有機(jī)的結(jié)合。固相樣品放大抗原抗體抗抗體-酶-底物-顯色抗體抗原抗體-酶-底物-顯色現(xiàn)在是5頁\一共有74頁\編輯于星期日酶標(biāo)板樣品中HCV抗原HRP酶標(biāo)記抗HCV抗體抗HCV抗體HRP酶單克隆抗體丙肝抗原ELISA試劑現(xiàn)在是6頁\一共有74頁\編輯于星期日HIV-1p24抗原檢測試劑的原理現(xiàn)在是7頁\一共有74頁\編輯于星期日

1雙抗體夾心法應(yīng)用HBsAg,HBeAg,HBcAg,pres1,pres2

2雙抗原夾心法應(yīng)用抗HBs，抗HIV

3競爭法 應(yīng)用抗HBc,抗pres24中和抑制法應(yīng)用抗Hbe5捕獲法應(yīng)用抗HBcIgM6間接法應(yīng)用抗HCV,抗HEV,幾種主要的酶聯(lián)免疫方法模式現(xiàn)在是8頁\一共有74頁\編輯于星期日發(fā)光免疫試劑1.抗原抗體反應(yīng)的基本原理及方法模式與酶聯(lián)免疫試劑完全相同2.檢測光信號，其光信號可因酶催化而產(chǎn)生也可用其他方法使其產(chǎn)生現(xiàn)在是9頁\一共有74頁\編輯于星期日酶促化學(xué)發(fā)光以酶為催化劑，通過氧化反應(yīng)，使底物發(fā)光。過氧化物酶（HRP)促發(fā)光，底物——魯米諾堿性磷酸酶(AP)促發(fā)光，底物——螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯（AMPPD)現(xiàn)在是10頁\一共有74頁\編輯于星期日魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（HRP）商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（一）現(xiàn)在是11頁\一共有74頁\編輯于星期日ROHRBOHOHROHSN魯米諾及其衍生物的增強(qiáng)劑（Enhancer）現(xiàn)在是12頁\一共有74頁\編輯于星期日AMPPD及其衍生物的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（AP）光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3+*OO-OOCH3商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（二）現(xiàn)在是13頁\一共有74頁\編輯于星期日非酶促化學(xué)發(fā)光及電化學(xué)發(fā)光非酶促化學(xué)發(fā)光：以吖啶酯、過氧化氫為發(fā)光系統(tǒng)，不需要酶的催化。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國產(chǎn)化（Abbott)電化學(xué)發(fā)光：氧化反應(yīng)是通過電極上的電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生，標(biāo)記物為三氯聯(lián)吡啶釕。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國產(chǎn)化。（Roche）現(xiàn)在是14頁\一共有74頁\編輯于星期日CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（三）吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)/非酶促現(xiàn)在是15頁\一共有74頁\編輯于星期日e-TPATPATPA+H+e-e-PlatinumelectrodeMagnet發(fā)光Ru2+基態(tài)Ru2+激發(fā)態(tài)Ru3+++電化學(xué)發(fā)光法原理現(xiàn)在是16頁\一共有74頁\編輯于星期日在電場的作用下，三丙胺（TPA）被氧化成陽離子自由基TPA+，后者很不穩(wěn)定，可自發(fā)失去一個質(zhì)子（H+），形成自由基TPA，這是一種很強(qiáng)的還原劑，可將一個電子給三價的三聯(lián)吡啶釕衍生物[Ru(bpy)3]3+，使其形成激發(fā)態(tài)的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激發(fā)態(tài)的[Ru(bpy)3]2+通過熒光機(jī)制衰減，發(fā)射出一個波長620nm的光子，重新生成基態(tài)的[Ru(bpy)3]2+。該過程在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，光電倍增管檢測光強(qiáng)度，光強(qiáng)度與[Ru(bpy)3]2+的濃度呈線性關(guān)系，故可測出待測抗原的含量?，F(xiàn)在是17頁\一共有74頁\編輯于星期日時間分辨熒光將三價稀土離子銪（Eu）等通過絡(luò)合物標(biāo)記到抗原或抗體分子上，通過檢測銪等的熒光實(shí)現(xiàn)免疫分析

應(yīng)注意環(huán)境及樣品中同類元素導(dǎo)致的本底干擾，特別是北方地區(qū)現(xiàn)在是18頁\一共有74頁\編輯于星期日時間分辨熒光增強(qiáng)原理現(xiàn)在是19頁\一共有74頁\編輯于星期日發(fā)光信號檢測光敏二極管、光敏電池、光電偶合器（CCD）結(jié)構(gòu)簡單、性能穩(wěn)定但靈敏度低、線性范圍較窄。主要特點(diǎn)原理：光信號光電轉(zhuǎn)換器件電壓或電流信號放大現(xiàn)在是20頁\一共有74頁\編輯于星期日單光子計(jì)數(shù)器是目前高靈敏度發(fā)光分析儀的核心部件光電倍增管高壓高速放大器高速比較器高速分頻器發(fā)光樣品產(chǎn)生光子激發(fā)光陰極產(chǎn)生光電子在陽極上形成較強(qiáng)信號脈沖信號相對發(fā)光單位數(shù)字脈沖(RLU)在各打拿極之間得到能量和數(shù)目的倍增現(xiàn)在是21頁\一共有74頁\編輯于星期日流動池檢測方式示意圖檢測器檢測池負(fù)壓泵廢液四通閥沖洗液樣品管計(jì)量泵干燥空氣原位進(jìn)樣泵氧化劑優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單，運(yùn)行成本低缺點(diǎn)：明顯的易產(chǎn)生交叉污染，工作效率受限?，F(xiàn)在是22頁\一共有74頁\編輯于星期日常見進(jìn)口發(fā)光免疫分析產(chǎn)品生產(chǎn)廠商產(chǎn)品技術(shù)類型反應(yīng)體系產(chǎn)品特點(diǎn)儀器類型ROCHE電化學(xué)發(fā)光、磁微珠腫瘤標(biāo)志物E170ABBOTT化學(xué)發(fā)光、磁微珠堿性磷酸酶、吖啶酯乙肝項(xiàng)目I2000Bayer化學(xué)發(fā)光、磁微珠吖啶酯內(nèi)分泌項(xiàng)目ADVIACentaurBeckman化學(xué)發(fā)光、磁微珠堿性磷酸酶UniCelDxI800DPC化學(xué)發(fā)光、塑料球堿性磷酸酶藥物分析Immuline2000強(qiáng)生化學(xué)發(fā)光辣根過氧化物酶丙肝生物梅里埃化學(xué)發(fā)光堿性磷酸酶HIVPE(Wallac)時間分辨熒光現(xiàn)在是23頁\一共有74頁\編輯于星期日（第二類）

膠體金（硒、乳膠）類試劑膠體金法：梅毒抗體-乙肝表面抗原診斷試劑盒膠體硒法：HIV(1+2+0)試劑盒現(xiàn)在是24頁\一共有74頁\編輯于星期日膠體金試劑原理硝酸纖維膜加樣

檢測區(qū)對照區(qū)(HBsAg)-----------------------------玻璃纖維膜-------------------

抗HBs羊抗鼠鼠抗HBs現(xiàn)在是25頁\一共有74頁\編輯于星期日膠體金免疫層析法反應(yīng)示意圖吸樣墊膠體金墊包被T線包被C線上樣墊NC膜支撐物現(xiàn)在是26頁\一共有74頁\編輯于星期日HIV膠體金類快速診斷試劑檢測結(jié)果現(xiàn)在是27頁\一共有74頁\編輯于星期日第三類）

免疫印跡試劑免疫印跡試劑盒:風(fēng)濕病自身抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）現(xiàn)在是28頁\一共有74頁\編輯于星期日免疫印跡法示意圖現(xiàn)在是29頁\一共有74頁\編輯于星期日

用于RR樣品的HCV抗體確認(rèn)獨(dú)特的IgG（I/II）及hSOD內(nèi)部質(zhì)控設(shè)計(jì)用于檢測的固相化抗原

重組表達(dá)蛋白：c33c，NS5合成肽抗原：c100p（5-1-1p），c22pIgGcontrolIIIgGcontrolIIDc100(p)5-1-1(p)c33cc22(p)hSODNS5RIBA?HCV3.0現(xiàn)在是30頁\一共有74頁\編輯于星期日c100-3NS5c33cc22-3SOD3+Control1+ControlPosINDPosNegINDRIBA模式圖現(xiàn)在是31頁\一共有74頁\編輯于星期日3+controlband(serumaddition)CapsidNS3-1NS3-2NS4NS51+controlband(reagentaddition)

GLDHCVBLOT3.0現(xiàn)在是32頁\一共有74頁\編輯于星期日（第四類）

蛋白芯片（微陣列）類試劑蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（蛋白芯片法）；多腫瘤標(biāo)志物檢測試劑盒（蛋白芯片法）現(xiàn)在是33頁\一共有74頁\編輯于星期日每張芯片檢測48個樣本，每個樣本同時檢測5個指標(biāo)，

丙型肝炎病毒分片斷抗體檢測蛋白芯片NS4NS4NS3NS3CC總總NS5NS5（C代表核心,NS3,NS4,NS5代表非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原）陽性對照陰性對照空白對照現(xiàn)在是34頁\一共有74頁\編輯于星期日（第五類）

單抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體）免疫組化：ImmuChem免疫組化試劑盒（單抗）免疫比濁：血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒現(xiàn)在是35頁\一共有74頁\編輯于星期日（第六類）

多抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（人血清/馬血清）免疫組化：癌胚抗原檢測試劑盒（多抗）免疫比濁：β-微球蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒現(xiàn)在是36頁\一共有74頁\編輯于星期日抗原抗原：指進(jìn)入有免疫活性的組織（宿主）而引發(fā)免疫應(yīng)答的物質(zhì)?；螂m不能引發(fā)免疫，但可以同抗體結(jié)合的物質(zhì)。蛋白質(zhì)，多糖，核酸，糖脂，青霉素全抗原性具有多個抗原決定族現(xiàn)在是37頁\一共有74頁\編輯于星期日抗體宿主對體內(nèi)存在的外來分子，微生物或其他因子的應(yīng)答而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)（免疫球蛋白，丙種球蛋白）根據(jù)抗體性質(zhì)：多克隆抗體，單克隆抗體根據(jù)抗體分子結(jié)構(gòu)：IgA,D,E,G,M現(xiàn)在是38頁\一共有74頁\編輯于星期日IgGIgM抗體模式圖現(xiàn)在是39頁\一共有74頁\編輯于星期日單克隆抗體由一株淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，針對一種抗原決定族抗原免疫小鼠-取脾臟-與瘤細(xì)胞融合-克隆篩選-單克隆抗體細(xì)胞株擴(kuò)增細(xì)胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-純化抗體現(xiàn)在是40頁\一共有74頁\編輯于星期日流程雜交瘤技術(shù)現(xiàn)在是41頁\一共有74頁\編輯于星期日現(xiàn)在是42頁\一共有74頁\編輯于星期日多克隆抗體針對多個抗原決定族抗原免疫動物-采集動物血清純化抗體現(xiàn)在是43頁\一共有74頁\編輯于星期日

血型抗原/RBC抗體/外周血

AAanti-B

BBanti-A

O noneanti-A&anti-B

ABA&BnoneABO血型測定現(xiàn)在是44頁\一共有74頁\編輯于星期日空氣柱微柱玻璃珠反應(yīng)艙試劑現(xiàn)在是45頁\一共有74頁\編輯于星期日結(jié)果判讀現(xiàn)在是46頁\一共有74頁\編輯于星期日（第七類）

診斷血清（菌液）診斷血清：侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清；志賀氏菌屬四種混合多價血清診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原診斷菌液現(xiàn)在是47頁\一共有74頁\編輯于星期日診斷血清工藝流程采集血清收集抗體（離心機(jī)）效價檢測等分裝、凍干免疫動物免疫抗原制備分離血清滅活處理吸收非特異性抗體吸收用抗原制備現(xiàn)在是48頁\一共有74頁\編輯于星期日診斷菌液工藝流程效價檢測等分裝、包裝細(xì)菌培養(yǎng)滅活處理現(xiàn)在是49頁\一共有74頁\編輯于星期日（第八類）

血球凝集類試劑抗體致敏血球：破傷風(fēng)抗體診斷試劑（血凝法）；白喉抗體診斷試劑（血凝法）現(xiàn)在是50頁\一共有74頁\編輯于星期日間接凝集試驗(yàn)示意圖+

用可溶性抗原致敏紅細(xì)胞或其它顆粒性介質(zhì)，可以用來測定細(xì)菌、病毒等微生物的抗體。現(xiàn)在是51頁\一共有74頁\編輯于星期日間接血凝試劑基本生產(chǎn)工藝流程醛化紅細(xì)胞的制備致敏抗原或抗體的制備紅細(xì)胞的采集致敏抗原（或抗體）的制備紅細(xì)胞的醛化（洗滌、離心、醛化）致敏抗原（或抗體）的檢定對照血球的制備紅細(xì)胞的致敏（鞣化、致敏、封閉）稀釋液的制備半成品檢定分裝、凍干、包裝成品檢定現(xiàn)在是52頁\一共有74頁\編輯于星期日（第九類）

核酸擴(kuò)增類試劑熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒PCR-ELISA：結(jié)核分支桿菌檢測試劑盒（核酸擴(kuò)增酶聯(lián)免疫法）PCR-毛細(xì)管電泳：性染色體多倍體（分型與突變）檢測試劑盒；PCR-電泳：α-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增（TMA）：沙眼衣原體與結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒現(xiàn)在是53頁\一共有74頁\編輯于星期日PCR基本原理示意圖現(xiàn)在是54頁\一共有74頁\編輯于星期日PCR過氧化物酶聯(lián)物96孔酶標(biāo)法加樣分析觀察數(shù)據(jù)PCR產(chǎn)物的檢測

96孔酶標(biāo)法

現(xiàn)在是55頁\一共有74頁\編輯于星期日Taqman法的原理Polymerization5‘5‘3‘3‘5‘ForwardPrimer5‘ReversePrimerStrandDisplacement5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQRQProbeP3‘RQCleavage5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQPolymerizationCompleted5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQReporterQuencher現(xiàn)在是56頁\一共有74頁\編輯于星期日ContinuouscyclingDegradeRNAwithRNaseHactivityandprimer2hybridizesChironProcleixHIV-1/HCVAssay

Step2:Transcription-MediatedAmplificationRNAtranscriptionbyRNApolymeraseRNAamplificationproductIsothermalincubation>109foldamplificationinonehourcDNAsynthesisbyreversetranscriptaseDNAsynthesisbyreversetranscriptaseTargetRNAPromoter-primerhybridizes現(xiàn)在是57頁\一共有74頁\編輯于星期日（第十類）

基因芯片（微陣列）類試劑基因芯片（微陣列）：α-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒PCR-雜交：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向雜交法）現(xiàn)在是58頁\一共有74頁\編輯于星期日基因芯片法聯(lián)合檢測HBVDNA－HCVRNA現(xiàn)在是59頁\一共有74頁\編輯于星期日現(xiàn)在是60頁\一共有74頁\編輯于星期日現(xiàn)在是61頁\一共有74頁\編輯于星期日

乙型肝炎病毒基因多態(tài)性檢測芯片芯片外觀及點(diǎn)樣區(qū)示意圖如上：點(diǎn)陣信息：點(diǎn)陣信息：A1:1896野生型B1:1896突變型A2:1814野生型B2:1814突變型A3:1762野生型B3:1762突變型A4:1764野生型B4:1764突變型A5:P區(qū)528位野生型B5:P區(qū)528位突變型A6:P區(qū)552位野生型B6:P區(qū)552位突變型A7:P區(qū)552位突變型B7：陰性參照Ⅱ

現(xiàn)在是62頁\一共有74頁\編輯于星期日檢測結(jié)果圖

1762/64位點(diǎn)聯(lián)合變異現(xiàn)在是63頁\一共有74頁\編輯于星期日丙型肝炎病毒基因分型檢測

芯片示意圖

Ⅰ：陽性內(nèi)參照I；Ⅱ：陰性內(nèi)參照I；Ⅲ：陽性內(nèi)參照II；Ⅳ：陰性內(nèi)參照II。

A1:I型B1:I型A2:1a/2aB2:1a/1bA3:1bB3:1bA4:II型B4:II型A5:2aB5:2aA6:3a/3bB6:3bA7:3bB7:6aA8：陰性A8：陰性

現(xiàn)在是64頁\一共有74頁\編輯于星期日丙型肝炎病毒基因分型芯片示意圖現(xiàn)在是65頁\一共有74頁\編輯于星期日（第十一類）

探針放大（原位雜交）類試劑bDNA類：HIV-1bDNA檢測試劑盒；mRNA檢測試劑盒(生物素原位雜交法)現(xiàn)在是66頁\一共有74頁\編輯于星期日探針放大類試劑--支鏈DNA技術(shù)病毒的RNA釋放后加入微孔板中——板孔中包被有可與病毒特異結(jié)合的一系列靶探針（TargetProbe），另一系列靶探針的一端可標(biāo)記在游離的病毒核酸鏈上，另一端可與bDNA結(jié)合——bDNA信號放大——加入酶標(biāo)記物對結(jié)合的bDNA進(jìn)行標(biāo)記——經(jīng)過清洗后加入底物進(jìn)行反應(yīng)，測定反應(yīng)強(qiáng)度?，F(xiàn)在是67頁\一共有74頁\編輯于星期日（第十二類）

普通生化類試劑（十萬級要求）（包括酶類化學(xué)試劑、凝血試劑類等試劑）酶類化學(xué)試劑:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定試劑盒；堿性磷酸酶（ALP）測定試劑盒凝血試劑:凝血酶原時間（PT）測定試劑盒；組織纖溶酶原激活物（t-PT）測定試劑盒現(xiàn)在是68頁\一共有74頁\編輯于星期日普通生化類試