微生物檢驗(yàn)-厭氧菌

學(xué)習(xí)要點(diǎn)厭氧菌感染的條件、臨床特征和微生物學(xué)檢驗(yàn)厭氧球菌、無芽孢厭氧桿菌的種類和臨床意義梭狀芽孢桿菌的種類、致病機(jī)制和微生物學(xué)檢驗(yàn)第一頁，共98頁。第一節(jié)概述一大群在有氧條件下不能生長(zhǎng)，必須在無氧或低氧條件下才能生長(zhǎng)的細(xì)菌有芽胞的G+梭菌，只有一個(gè)屬，即梭菌屬，共有130個(gè)種，以芽胞形式存于體外無芽胞的G+及G-桿菌與球菌，包括40多個(gè)屬，300多個(gè)菌種和亞種厭氧菌的感染遍及臨床各科，且多為混合感染；對(duì)氨基糖甙類抗生素耐藥，而對(duì)甲硝唑(滅滴靈)普遍敏感第二頁，共98頁。第三頁，共98頁。正常情況下菌群之間保持著微生態(tài)平衡，厭氧菌代謝產(chǎn)生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生長(zhǎng)如長(zhǎng)期使用廣譜抗生素、激素、免疫抑制劑等，在發(fā)生菌群失調(diào)或機(jī)體免疫力下降或細(xì)菌進(jìn)人非正常寄居部位時(shí)，這些厭氧菌即可作為條件致病菌而導(dǎo)致內(nèi)源性感染第四頁，共98頁。無芽胞厭氧菌在臨床厭氧菌標(biāo)本檢出率中約占90％，分布廣泛，多為條件致病菌無芽胞厭氧菌同需氧菌與兼性厭氧菌共同構(gòu)成機(jī)體的正常菌群，其中厭氧菌占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，例如腸道菌群占99.9％第五頁，共98頁。兩類厭氧菌感染的不同點(diǎn)

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項(xiàng)目

有芽胞厭氧菌感染

無芽胞厭氧菌感染

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感染類型

外源性感染為主

內(nèi)源性感染為主致病因素

以外毒素為主,內(nèi)毒素侵襲因素為主,毒性強(qiáng)毒性弱

感染中比例

10%

90%

機(jī)體條件多數(shù)與健康與機(jī)體抵抗力關(guān)系不大降低密切相關(guān)

各科分布

多見于外傷感染、分布臨床各科,引起食物中毒身體各部位炎癥,

膿腫,敗血癥

臨床病型

具有特殊臨床病型

無特殊臨床病型

治療

以抗毒素治療為主

以抗菌藥物治療為主預(yù)防

多數(shù)可用抗毒素緊急

增強(qiáng)機(jī)體抵抗力

預(yù)防,以類毒素預(yù)防

──────────────────────────────第六頁，共98頁。厭氧菌感染的條件組織缺氧或氧化還原電勢(shì)(Eh)降低可造成厭氧菌生長(zhǎng)的適宜環(huán)境，易于遭受厭氧菌感染局部組織的氧化還原電勢(shì)降低：如血管損傷、燒傷、動(dòng)脈硬化、腫瘤壓迫、組織壞死等，可造成局部組織的缺血、缺氧等皮膚黏膜屏障被破壞：如大面積外傷伴有需氧菌感染，為厭氧菌感染提供了條件第七頁，共98頁。厭氧菌感染的條件機(jī)體免疫功能下降：如接受免疫抑制劑、放療或化療的患者；糖尿病、慢性肝、腎疾病及老人、嬰幼兒、早產(chǎn)兒等菌群失調(diào)：長(zhǎng)期應(yīng)用氨基糖甙類抗生素，或長(zhǎng)期應(yīng)用頭孢菌素、四環(huán)素等無效者，均可誘發(fā)厭氧菌感染需氧菌、兼性厭氧菌的混合感染。需氧菌生長(zhǎng)耗竭了氧氣，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)第八頁，共98頁。厭氧菌感染的臨床特征感染局部產(chǎn)生氣體，組織腫脹和壞死粘膜附近的感染深部外傷的繼發(fā)感染，流產(chǎn)胃腸手術(shù)后發(fā)生的感染分泌物有惡臭，或?yàn)榘笛t色，并在紫外光下發(fā)出紅色熒光分泌物涂片鏡檢有細(xì)菌，而常規(guī)培養(yǎng)陰性者；或在培養(yǎng)基深部長(zhǎng)的細(xì)菌長(zhǎng)期應(yīng)用氨基糖甙類抗生素治療無效病例第九頁，共98頁。第二節(jié)厭氧菌檢驗(yàn)標(biāo)本采集臨床在進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)前應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系，以便實(shí)驗(yàn)室做好接種培養(yǎng)的準(zhǔn)備不能被正常菌群污染；應(yīng)盡量避免接觸空氣。最理想是能取得組織標(biāo)本下列標(biāo)本無送檢價(jià)值，不宜做厭氧菌培養(yǎng)：①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內(nèi)容物、肛拭；⑤接近皮膚和粘膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及粘膜層表面；⑦排出的尿或?qū)?；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物標(biāo)本運(yùn)送中應(yīng)盡量避免接觸空氣，不要冷藏第十頁，共98頁。標(biāo)本運(yùn)送方法1.無氧小瓶運(yùn)送法2.厭氧袋運(yùn)送法3.針筒運(yùn)送法4.其他運(yùn)送法第十一頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)直接鏡檢結(jié)合標(biāo)本來源，性狀與氣味，可提供許多有用的信息,對(duì)估計(jì)標(biāo)本中含菌量、細(xì)菌種類和選擇培養(yǎng)基等都有意義除血液外，各種標(biāo)本均須直接涂片作革蘭染色鏡檢，標(biāo)本發(fā)臭，鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)菌染色不均，形態(tài)奇特者常是厭氧菌的表現(xiàn)第十二頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)直接鏡檢標(biāo)本呈琥珀酸味，帶血性或用紫外燈照射發(fā)紅色熒光，涂片鏡檢為G-球桿菌，間或有長(zhǎng)短不一的多形性，并有惡臭者，常為產(chǎn)黑色素普雷沃菌菌體細(xì)長(zhǎng)，兩端尖,為梭形的G-桿菌，有紫色顆粒沿菌體長(zhǎng)軸排列，成雙排列尖端相對(duì)，并有丁酸臭味者，常是具核梭桿菌菌體高度多形性，長(zhǎng)短不一，菌體中部腫脹或呈圓球者，可能是壞死梭桿菌第十三頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)直接鏡檢如兩端鈍圓著色深，中間著色淺不均勻，且有空泡，長(zhǎng)短不一的革蘭陰性桿菌常脆弱類桿菌極小的G-球菌，可能是韋榮球菌G+無芽胞桿菌，呈乳酸氣味者，可能是乳酸桿菌；呈丙酸氣味者，并有特殊排列呈X、Y、或柵狀者可能是痤瘡丙酸桿菌；有醋酸氣味的可能是雙歧桿菌菌體分枝，呈棒狀或柵狀排列，且發(fā)現(xiàn)黃色顆粒，有琥珀酸氣味者，多是放線菌第十四頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)直接鏡檢G+芽胞桿菌，肯定是梭狀芽胞桿菌屬G+短粗兩端鈍圓桿菌，無芽胞，中性粒細(xì)胞也很少且變形破碎，標(biāo)本來自戰(zhàn)傷或肢體嚴(yán)重腫脹者，大多是產(chǎn)氣莢膜梭菌G+桿菌，有芽胞，并有異丁酸或異戊酸等氣味，標(biāo)本來自抗生素相關(guān)性腸炎者，大多是艱難梭菌第十五頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇合適的培養(yǎng)基，常用的有非選擇性和選擇性培養(yǎng)基兩種非選擇培養(yǎng)基強(qiáng)化血瓊脂平板(BAP)：即布氏瓊脂或牛心、牛腦浸出液瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，補(bǔ)加酵母浸膏（0.5％）、動(dòng)物血（5％-10％）、維生素K1（0.1μg/ml）和氯化血紅素(5μg/ml)，是一種非選擇性培養(yǎng)基，幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌第十六頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)選擇培養(yǎng)基卡那—萬古霉素凍溶血瓊脂平板（KVLB）：可抑制大多數(shù)兼性厭氧菌，使產(chǎn)黑色素普雷沃菌早期形成黑色素。只需2-3d出現(xiàn)黑色菌落。絕大多數(shù)類桿菌屬、普雷沃菌屬和紫單胞菌屬都生長(zhǎng)良好，梭桿菌和厭氧球菌不能生長(zhǎng)。是常用的選擇性培養(yǎng)基?？敲顾睾繛?5-100μg/ml，萬古霉素為75μg/ml第十七頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基七葉苷膽汁平板（BBE）：本培養(yǎng)基含20％膽汁，1g/l七葉苷和100μg/ml的慶大霉素。抑制需氧菌，膽汁抑制對(duì)之敏感的厭氧菌。只有耐膽汁的脆弱類桿菌與可變梭桿菌和死亡梭桿菌不被抑制，反被刺激菌落較大，還能水解七葉苷，菌落周圍有棕黑色的暈第十八頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)選擇培養(yǎng)基卵黃平板（EYA）和兔血平板：用于選擇產(chǎn)氣莢膜梭菌，標(biāo)本接種兔血平板，見有雙溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)是與菌落一樣大小的透明溶血，外環(huán)是寬的甲型溶血，放半小時(shí)后菌落變綠色或褐色，同時(shí)可接種卵黃平板，以進(jìn)行卵磷脂酶試驗(yàn)鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌FS培養(yǎng)基梭桿菌選擇培養(yǎng)基VS培養(yǎng)基韋榮球菌選擇培養(yǎng)基CCFA培養(yǎng)基艱難梭菌選擇培養(yǎng)基第十九頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)厭氧培養(yǎng)方法厭氧罐培養(yǎng)法：應(yīng)用物理或化學(xué)方法造成無氧環(huán)境。如冷觸媒法：利用氣體發(fā)生器產(chǎn)生氫及二氧化碳，產(chǎn)生的氫在觸媒作用下，與罐內(nèi)的氧結(jié)合成水，將氧消耗掉，造成無氧環(huán)境。產(chǎn)生的二氧化碳約為10％，也適宜厭氧菌生長(zhǎng)。方法為：先將觸媒(金屬鈀或鉑)及美藍(lán)指示劑放入罐內(nèi)，然后將已接種的平板置于罐內(nèi)，將氣體發(fā)生袋的指定角剪開，加入10ml水，立即放入罐內(nèi)，封閉厭氧罐即可第二十頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)厭氧培養(yǎng)方法氣袋法：原理相同，只是將厭氧罐用無毒、透明的塑料袋代替厭氧手套箱培養(yǎng)法：厭氧手套箱公認(rèn)的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器。它是密閉的大型金屬箱，前面有透明面板，板上裝兩個(gè)手套，可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作。適用于在無氧環(huán)境中連續(xù)進(jìn)行標(biāo)本接種、培養(yǎng)和鑒定等全部工作厭氧工作站第二十一頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)鑒定試驗(yàn)：據(jù)厭氧菌的菌體形態(tài)、染色反應(yīng)、菌落性狀以及對(duì)某些抗生素的敏感性等作出初步鑒定。最后鑒定則要進(jìn)行生化反應(yīng)及終末代謝產(chǎn)物等項(xiàng)檢查形態(tài)與染色：不僅能反映各種厭氧菌的特殊形態(tài)，同時(shí)也為鑒定厭氧菌提供參考依據(jù)；可用拉絲實(shí)驗(yàn)協(xié)助判定染色結(jié)果第二十二頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落性狀：不同厭氧菌其菌落形狀和性質(zhì)不同。梭菌的菌落特點(diǎn)是形狀不規(guī)則，而無芽胞厭氧菌多呈單個(gè)的圓形小菌落色素：產(chǎn)黑色素普魯沃菌產(chǎn)生黑褐色或黑色色素。齲齒放線菌產(chǎn)生粉紅色色素。奈氏放線菌產(chǎn)生黃褐色色素溶血：產(chǎn)氣莢膜梭菌在新鮮血瓊脂平板形成雙溶血圈熒光：產(chǎn)黑色素普魯沃菌在紫外線燈下，顯示磚紅色熒光；梭桿菌常發(fā)生黃綠色熒光；艱難梭菌發(fā)生綠色熒光第二十三頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)快速鑒定：其原理是依據(jù)細(xì)菌在代謝過程中所產(chǎn)生的胞外酶與少量生化基質(zhì)迅速反應(yīng)，能在4小時(shí)觀察結(jié)果，無需在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)，只需用濃菌液即可，自動(dòng)化程度高其他耐氧試驗(yàn)：當(dāng)在厭氧平板上有菌生長(zhǎng)時(shí)，為確定是否為厭氧菌，必須做耐氧試驗(yàn)藥物鑒定試驗(yàn)：用于鑒定厭氧菌的抗生素有卡那霉素和滅滴靈?？敲顾氐拿舾行詫⑺髼U菌屬與類桿菌屬區(qū)分開，大多數(shù)類桿菌對(duì)卡那霉素耐藥；滅滴靈紙片在鑒別厭氧菌(敏感)與非厭氧菌(不敏感)有重要意義第二十四頁，共98頁。第二十五頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)其他聚茴香腦磺酸鈉試驗(yàn)：厭氧消化鏈球菌對(duì)50g/l的聚茴香腦磺酸鈉溶液敏感，而絕大多數(shù)其他G+球菌耐藥生化鑒定：主要包括多種糖類發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、卵磷脂酶試驗(yàn)、脂肪酶試驗(yàn)、蛋白溶解試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)及膽汁肉湯生長(zhǎng)試驗(yàn)和硫化氫試驗(yàn)等。為簡(jiǎn)化厭氧菌鑒定，有多種試驗(yàn)鑒定系統(tǒng)，如推測(cè)性平皿系統(tǒng)等。雖然不完善，但可使厭氧菌的鑒定標(biāo)準(zhǔn)化，自動(dòng)化第二十六頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)其他氣液相色譜技術(shù)（GLC）：應(yīng)用GLC分析厭氧菌的終末代謝產(chǎn)物，因各種厭氧菌的代謝產(chǎn)物不同，故已成為鑒定厭氧菌及其分類的比較可靠的方法．可在數(shù)十分鐘至數(shù)小時(shí)即可作出診斷PCR：如采用PCR方法檢測(cè)抗生素相關(guān)性腹瀉病人糞便中艱難梭菌的毒素基因陽性率高達(dá)82．8％，明顯高于厭氧培養(yǎng)法的檢出率19.2％，且與厭氧培養(yǎng)法的一致性為100％第二十七頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)其他基因探針：如用地高辛標(biāo)記脆弱類桿菌的基因探針，檢測(cè)標(biāo)本中的脆弱類桿菌其敏感性為89％，特異性為91．7％，檢測(cè)靈敏度為10pgDNA，故其特異性強(qiáng)，敏感性和靈敏度均高，并具有快速簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)第二十八頁，共98頁。厭氧菌感染的微生物學(xué)檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果分析與報(bào)告根據(jù)革蘭染色鏡檢，菌落性狀、耐氧試驗(yàn)及藥敏試驗(yàn)若發(fā)現(xiàn)厭氧菌可初步報(bào)告：“檢出厭氧菌，形似xxx菌”再根據(jù)生化反應(yīng)及終末代謝產(chǎn)物作最終報(bào)告：“分離鑒定出xxx菌”及“藥物敏感試驗(yàn)：xxx結(jié)果”有條件的單位可采用基因探針或PCR技術(shù)，快速準(zhǔn)確的檢測(cè)厭氧菌第二十九頁，共98頁。

臨床標(biāo)本肉眼觀察分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)及直接鏡檢厭氧培養(yǎng)

2-7d確定厭養(yǎng)培養(yǎng)需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)生長(zhǎng)無生長(zhǎng)生長(zhǎng)

兼性厭氧菌專性厭氧菌保存菌種分類鑒定藥物敏感試驗(yàn)形態(tài)與染色菌落特性生化反應(yīng)藥敏性鑒定氣液相色譜第三十頁，共98頁。第三節(jié)厭氧球菌（Anaerobiccocci）在臨床標(biāo)本中檢出的厭氧菌大約有25％為厭氧性球菌G+消化球菌和消化鏈球菌屬G-韋榮球菌屬第三十一頁，共98頁。

臨床意義黑色消化球菌（P.niger）是消化球菌屬中唯一的菌種通常寄居在人的體表和與外界相通的腔道中，是人體正常菌群，在臨床上可引起人體各部組織和器官的感染，常與其他細(xì)菌混合感染，如腹腔感染、肝膿腫等一、消化球菌屬（Peptococcus）第三十二頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G+，菌體圓形，直徑0.3-1.3μm，單個(gè)、成雙、短鏈或成堆排列，無芽胞，無莢膜第三十三頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)生長(zhǎng)緩慢，厭氧培養(yǎng)2-4d才形成黑色不溶血的小菌落，接觸空氣后顏色變淺，傳代后黑色消失，通過庖肉培養(yǎng)后又可產(chǎn)生黑色素不發(fā)酵糖，觸酶陽性為其特點(diǎn)。對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、潔霉素、四環(huán)素及滅滴靈敏感第三十四頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本黑色有臭味從感染部位采集標(biāo)本，作直接涂片鏡檢和分離培養(yǎng)。接種血瓊脂平板，并同時(shí)接種含血清硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基或庖肉培養(yǎng)基(增菌培養(yǎng))，經(jīng)厭氧培養(yǎng)2-4d后，觀察菌落形態(tài)，革蘭染色觀察菌體形態(tài)和排列作出初步報(bào)告。據(jù)生化反應(yīng)、抗生素紙片敏感試驗(yàn)以及氣液相色譜分析代謝產(chǎn)物作出最后報(bào)告第三十五頁，共98頁。二、消化鏈球菌屬（Peptostreptococcus）厭氧消化鏈球菌、不解糖消化鏈球菌、吲哚消化鏈球菌、大消化鏈球菌、微小消化鏈球菌、普氏消化鏈球菌、產(chǎn)生消化鏈球菌、四聯(lián)消化鏈球菌與天芥菜春還原消化鏈球菌等代表菌種為厭氧消化鏈球菌（P.anaerobius）第三十六頁，共98頁。臨床意義以厭氧消化鏈球菌最常見消化鏈球菌可引起各部組織和器官感染，又以混合感染為多見，如腹腔感染、肝膿腫、外陰、陰道及盆腔感染、肺部和胸膜感染、口腔感染、顱內(nèi)感染以及皮膚和軟組織感染等第三十七頁，共98頁。臨床意義厭氧消化鏈球菌可與金黃色葡萄球菌或溶血性鏈球菌協(xié)同引起嚴(yán)重的創(chuàng)傷感染，即厭氧鏈球菌肌炎。該菌常可引起細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，主要由原發(fā)病灶口腔、牙周和尿道感染而引起。致菌血癥較少見在臨床標(biāo)本分離厭氧菌株中，本菌屬占20％-35％，為第2位，僅次于脆弱類桿菌第三十八頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G+球形或卵圓形，菌體直徑0.3-1.0μm，成雙或呈短鏈狀排列。無鞭毛，無芽胞，無莢膜專性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求較高，需羊血和血清培養(yǎng)基才能生長(zhǎng)，35℃-37℃pH7-7.5時(shí)生長(zhǎng)佳。在厭氧血平板上，菌落1mm，灰白色凸起、不透明邊緣整齊，一般不溶血，培養(yǎng)物常有惡臭氣味第三十九頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)生化反應(yīng)不活潑，在硫乙醇酸鈉液體培養(yǎng)基中，呈顆粒狀沉淀生長(zhǎng)。吐溫-80促進(jìn)生長(zhǎng)觸酶陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，不發(fā)酵乳糖，分解甘露醇，不水解膽汁七葉苷，吲哚、尿素酶、硝酸鹽還原試驗(yàn)均為陰性，對(duì)多聚茴香磺酸鈉（SPS）敏感第四十頁，共98頁。三、韋榮球菌屬（Veillonella）革蘭陰性厭氧球菌，有7個(gè)種，其中小韋榮球菌（V.parvala）和產(chǎn)堿韋榮球菌（V.alaclescens）是常見的二個(gè)種口腔、咽部、胃腸道和女性生殖道的正常菌群，致病力不強(qiáng)，為條件致病菌。本屬菌可產(chǎn)生內(nèi)毒素，為脂多糖，有抗原性臨床標(biāo)本可采自軟組織膿腫和血液。大多見于混合感染。臨床分離率小于1％。小韋榮球菌可引起上呼吸道感染，而產(chǎn)堿韋榮球菌多見于腸道感染。第四十一頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G-球菌，直徑0.3-0.5μm，排列成對(duì)或短鏈，近似奈瑟球菌，無鞭毛和芽胞專性厭氧，在血瓊脂平板上發(fā)育良好，培養(yǎng)48h后，形成1-2mm圓形、凸起灰白色至黃色混濁菌落，不溶血；在硫乙醇酸鹽肉湯中混濁生長(zhǎng)，產(chǎn)生小氣泡新鮮培養(yǎng)物立即置紫外線下照射，菌落可顯紅色熒光，接觸空氣后熒光消失生化反應(yīng)不活潑，不分解糖類，還原硝酸鹽第四十二頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)小韋榮球菌觸酶試驗(yàn)陰性，而產(chǎn)堿韋榮球菌為陽性取臨床標(biāo)本作直接涂片、革蘭染色、鏡檢。如發(fā)現(xiàn)Ｇ-小球菌、成對(duì)或短鏈或不規(guī)則排列，疑為本菌屬可用厭氧血瓊脂平板分離培養(yǎng)，2-3d觀察結(jié)果，同時(shí)可接種硫乙醇酸鹽肉湯或庖肉培養(yǎng)基，觀察生長(zhǎng)情況與形態(tài)，并做生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定第四十三頁，共98頁。第三節(jié)Ｇ-無芽胞厭氧桿菌一群不形成芽胞的厭氧桿菌，種類較多，包括類桿菌屬、普雷沃菌屬、紫單胞菌屬和梭桿菌屬等；是正常菌群，可作為條件致病菌引起內(nèi)源性感染第四十四頁，共98頁。一、類桿菌屬（Bacteroides）

臨床意義最重要的Ｇ-無芽胞厭氧桿菌，脆弱類桿菌（B.fragilis）是本屬代表菌株常寄生于口腔、腸道和女性生殖道，其中脆弱類桿菌占臨床分離株的25％，占類桿菌分離株的50％，居臨床厭氧菌分離株首位。腸道的重要菌群，為大腸埃希菌的100-1000倍脆弱類桿菌能產(chǎn)生一種鋅依賴金屬蛋白酶或腸毒素，能使腸粘膜細(xì)胞產(chǎn)生病理效應(yīng)?？梢鹋陨诚到y(tǒng)、胸腔及顱內(nèi)感染第四十五頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)Ｇ-，大小為(0.8-1.3μm)×(1.6-8μm)，著色不均，兩端鈍圓而濃染，中間不著色染色較淺似空泡。在陳舊培養(yǎng)物或含糖的液體培養(yǎng)基中呈明顯多形性，無鞭毛、無芽胞，多數(shù)有莢膜第四十六頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)專性厭氧，在厭氧血平板經(jīng)24-48h培養(yǎng)后，菌落圓形，表面光滑，邊緣整齊，不溶血，加入氯化血紅素、維生素K和20％膽汁可促進(jìn)生長(zhǎng)在膽汁七葉苷(BBE)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛，菌落較大，能分解膽汁七葉苷，使培養(yǎng)基變黑色，菌落周圍有黑暈，故BBE可作為脆弱類桿菌的選擇鑒別培養(yǎng)基第四十七頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)觸酶試驗(yàn)陽性，發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，不發(fā)酵阿拉伯糖、鼠李糖、山梨醇和海藻糖，水解膽汁七葉苷，耐20％膽汁，并生長(zhǎng)旺盛。中間類桿菌脂酶陽性，發(fā)酵代謝產(chǎn)物是乙酸、丙酸和琥珀酸，一般不產(chǎn)生丁酸大部分菌株對(duì)青霉素G、卡那霉素和新霉素耐藥，但95％以上對(duì)氯霉素、氨芐青霉素、哌拉西林、替卡西林、亞胺硫霉素、甲硝唑等敏感第四十八頁，共98頁。二、普雷沃菌屬（Prevotella）

臨床意義代表菌種是產(chǎn)黑色素普雷沃菌（P.melaninogenica）寄生在口腔、女性生殖道等部位的正常菌群，僅次于脆弱類桿菌。是一種常見的條件致病菌，可引起內(nèi)源性感染和混合感染，女性生殖道及口腔感染較為多見致病物質(zhì)可能是膠原酶，與結(jié)締組織的分解有關(guān)第四十九頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)涂片檢查為G-球桿狀，大小約0.8-1.5μm×1.0-3.5μm，成雙或短鏈，兩端鈍圓，有濃染和空泡。呈多形性。無鞭毛、芽胞和莢膜第五十頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)專性厭氧菌。在厭氧平板上生長(zhǎng)良好，經(jīng)2-3d培養(yǎng)后，菌落為圓形凸起、呈β-溶血。菌落在紫外光（波長(zhǎng)366nm）照射下有磚紅色熒光，菌落初形成時(shí)為灰白色，5-7d轉(zhuǎn)為黑色，色素出現(xiàn)后熒光即消失生長(zhǎng)時(shí)需氯化血紅素和維生素K，故在培養(yǎng)基中加入這兩種物質(zhì)可促進(jìn)生長(zhǎng)第五十一頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)在20%膽汁培養(yǎng)基中絕大多數(shù)不生長(zhǎng)，觸酶陰性，除中間普雷沃菌、變黑普雷沃菌和部分洛氏普雷沃菌外脂酶均為陰性，脲酶陰性多數(shù)對(duì)氨基青霉素、頭孢菌素、卡那霉素和萬古霉素耐藥，而對(duì)甲硝唑霉素、利福平和新霉素敏感第五十二頁，共98頁。三、卟啉單胞菌屬（Porphyromonas）

臨床意義與人類有關(guān)的有不解糖紫單胞菌（P.asaccharolytica）、牙髓紫單胞菌（P.endodontalis）和牙齦紫單胞菌（P.gingivalis）等3種,代表菌種是不解糖紫單胞菌主要分布于人類口腔、泌尿生殖道和腸道，在正常人體的檢出率低。動(dòng)物源性紫單胞菌在被動(dòng)物咬傷感染的人體中檢出，這些菌株與人源紫單胞菌相似，但基因型不同。主要引起人類牙周炎、牙髓炎、根尖周炎、也可引起肺胸膜炎、闌尾炎和細(xì)菌性陰道炎，尚可引起頭、頸和下呼吸道感染第五十三頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G-桿菌或球桿菌，大小約1.5-3.5μm×0.8-1.5μm，兩端鈍圓，著色不均勻維生素K和氯化血紅素可促進(jìn)本菌生長(zhǎng)及黑色素的產(chǎn)生，凍溶血較非凍溶血更有利于早期產(chǎn)生黑色素。在厭氧血瓊脂平板上，35℃-37℃厭氧培養(yǎng)3-5d，形成1-2mm圓形凸起、邊緣整齊、棕色或黑色菌落，維生素K1和氯化血紅素可促進(jìn)本菌生長(zhǎng)及黑色素的產(chǎn)生第五十四頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)產(chǎn)生色素，不分解或弱分解糖。觸酶試驗(yàn)多陰性，膽汁七葉苷和脂酶試驗(yàn)陰性，吲哚多陽性。能液化明膠。代謝產(chǎn)物為乙酸、丙酸和異戊酸等對(duì)卡那霉素、多粘菌素耐藥，對(duì)萬古霉素、頭孢菌素、氯霉素、氯林可霉素、羥氨芐青霉素等均敏感。第五十五頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)與產(chǎn)黑色素普魯沃菌相簽別，產(chǎn)黑色素普魯沃菌可發(fā)酵葡萄糖、乳糖和蔗糖，而紫單胞菌均不發(fā)酵糖與其他紫單胞菌相鑒別，不解糖紫單胞菌觸酶試驗(yàn)陰性，巖藻糖苷酶試驗(yàn)陽性；牙髓紫單胞菌和牙齦紫單胞菌。巖藻糖苷酶試驗(yàn)均為陰性，觸酶試驗(yàn)陽性第五十六頁，共98頁。四、梭桿菌屬（Fusobacterium）是臨床常見的G-無芽胞厭氧菌，因其兩端尖細(xì)如梭，故名梭桿菌。是人口腔、上呼吸道、腸道及泌尿生殖道的正常菌群，以牙縫中最為多見。在臨床標(biāo)本中，常見的有具核梭桿菌（F.nucleatum）、壞死梭桿菌（F.necrophorum）、死亡梭桿菌（F.mortiferum）和潰瘍梭桿菌（F.ulcerans）等16種。其代表菌種為具核梭桿菌第五十七頁，共98頁。臨床意義具核梭桿菌最常見，在口腔、生殖器、胃腸道和上呼吸道中被發(fā)現(xiàn)壞死梭桿菌是毒力很強(qiáng)的梭桿菌，可在兒童和青年人中引起扁桃體炎，有時(shí)并發(fā)單核細(xì)胞增多癥，它是青年人扁桃體周圍膿腫中最常分離到的厭氧菌。尚可引起膿胸和菌血癥第五十八頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G-梭形桿菌，兩端尖細(xì)，中間膨大、似梭狀，無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)專性厭氧菌，在血平板上生長(zhǎng)良好。經(jīng)48h培養(yǎng)后，菌落直徑l—2mm，不規(guī)則圓形略凸起，灰色發(fā)光透明，常顯示珍珠光斑點(diǎn)，通常不溶血絕大部分菌株在20％膽汁中不生長(zhǎng)，不分解膽汁七葉苷，不發(fā)酵任何糖類，吲哚和DNA酶試驗(yàn)陽性，觸酶陰性。不還原硝酸鹽，脂酶試驗(yàn)陰性。主要代謝產(chǎn)物是丁酸第五十九頁，共98頁。第四節(jié)G+無芽胞厭氧桿菌

在厭氧菌中約占15％。常見的有丙酸桿菌屬、優(yōu)桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬等四個(gè)屬多是人和動(dòng)物皮膚、口腔、腸道等部位的重要生理菌群，在體內(nèi)起到調(diào)節(jié)和維持人體微生態(tài)平衡的重要作用菌落、生化反應(yīng)、菌體形態(tài)等都很相似，鑒定較難。應(yīng)用氣液相色譜法（GLC），根據(jù)其代謝產(chǎn)物不同，可對(duì)菌屬做出初步判定第六十頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G+厭氧棒狀桿菌，無芽孢、鞭毛、莢膜，數(shù)次在厭氧環(huán)境下傳代后可變?yōu)榧嫘詤捬蹙?，吐?80可刺激其生長(zhǎng)，大都能液化明膠，觸酶試驗(yàn)陽性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生丙酸第六十一頁，共98頁。

二、乳桿菌屬（Lactobacillus）

臨床意義發(fā)酵糖類產(chǎn)乳酸，常見嗜酸乳桿菌（L.acidophilus）、發(fā)酵乳桿菌（L.fermentum）、德氏乳桿菌（L.debrueckii）是消化道、陰道的正常共生菌，能分解陰道中的多種糖類而使陰道呈酸性，以抑制某些致病菌的生長(zhǎng)乳桿菌與齲齒的形成有密切的關(guān)系.口腔的變異鏈球菌與消化鏈球菌使蔗糖變成葡聚糖，附于牙面形成齒斑。乳桿菌能溶解牙釉使之脫鈣造成齲齒第六十二頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G+細(xì)長(zhǎng)桿菌，無莢膜、鞭毛，具有嗜酸性，兼性厭氧或微需氧，厭氧條件生長(zhǎng)較好，菌落較小邊緣不整齊；觸酶、硝酸鹽還原和吲哚等試驗(yàn)均陰性；發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和蔗糖產(chǎn)生乳酸第六十三頁，共98頁。四、雙歧桿菌（Bifidobacterum）

臨床意義重要生理菌群。糞便中可達(dá)108-1012CFU

/g，維持微生態(tài)平衡。能合成維生素，提高免疫力，抗腫瘤，起到營(yíng)養(yǎng)保健作用用于藥品和食品的有青春雙歧桿菌（B.adolescantis）、嬰兒雙歧桿菌（B.infantis）、兩歧雙歧桿菌（B.bifidum）、長(zhǎng)雙歧桿菌（B.longum）和短雙歧桿菌（B.breve）第六十四頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)G+桿菌，有高度多形性，有分叉，著色不均；菌落較小，圓形不透明；觸酶試驗(yàn)陰性，發(fā)酵葡萄糖和乳糖抵抗力弱，對(duì)桿菌肽、青霉素、紅霉素、氯林可霉素等高度敏感第六十五頁，共98頁。第六節(jié)梭狀芽胞桿菌屬（Clostridium）厭氧芽胞桿菌（anaerobicsporeformingbacilli）的唯一菌屬，有130個(gè)種G+，芽胞正圓形，直徑大于菌體，位于菌體中央，極端或次極端，使菌體膨大呈梭狀，故名梭菌屬在自然界分布廣泛，多數(shù)為腐物寄生菌，有致病性主要有破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌與艱難梭菌引起人類疾病主要有破傷風(fēng)、氣性壞疽、食物中毒和假膜性結(jié)腸炎等第六十六頁，共98頁。一、破傷風(fēng)梭菌（C.tetani）G+細(xì)長(zhǎng)桿菌，有周鞭毛，無莢膜，芽胞正圓形，比菌體大，位于菌體頂端，使細(xì)菌呈鼓槌狀第六十七頁，共98頁。生物學(xué)特性專性厭氧，在梭菌培養(yǎng)基（cd基）上37℃培養(yǎng)48h，菌落直徑2-4mm，扁平、灰白色、邊緣疏松呈羽毛狀，伴β溶血。在庖肉培養(yǎng)基中，肉渣部分消化，微變黑，有少量氣體。生成甲基硫醇及H2S，導(dǎo)致培養(yǎng)物有腐敗性惡臭第六十八頁，共98頁。生物學(xué)特性不發(fā)酵糖類，能液化明膠。產(chǎn)生H2S，形成吲哚，不還原硝酸鹽，對(duì)蛋白質(zhì)有微弱的消化作用根據(jù)鞭毛抗原不同，可分10個(gè)血清型。產(chǎn)生毒素的生物活性相同，可被任何型抗毒素中和第六十九頁，共98頁。生物學(xué)特性芽胞甚強(qiáng)，在土壤中數(shù)年不死，煮沸100℃1h可被殺滅，能耐干熱150℃1h，50g／L的石炭酸10—15h對(duì)青霉素、紅霉素、四環(huán)素敏感，磺胺類有抑制作用，對(duì)氨基糖苷抗生素耐藥。第七十頁，共98頁。臨床意義存在于自然界，在土壤和人與動(dòng)物的腸道中都有存在當(dāng)機(jī)體受創(chuàng)傷時(shí)或新生兒接生時(shí)使用不潔用具斷臍帶，破傷風(fēng)梭菌可侵入傷口生長(zhǎng)繁殖，分泌外毒素，引起機(jī)體強(qiáng)直性痙攣、抽搐，稱為破傷風(fēng)全世界每年約有100萬病例發(fā)生，死亡率在20％左右第七十一頁，共98頁。致病因素外毒素，稱為痙攣毒素，為蛋白質(zhì)，不耐熱，可被蛋白消化酶破壞，加0.3％甲醛于毒素中37℃培養(yǎng)4周可轉(zhuǎn)變?yōu)轭惗舅貙?duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有親和力，尤其是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，能與神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合。封閉了脊髓抑制性觸突，阻止釋放抑制性沖動(dòng)介質(zhì)，而破壞了正常的抑制性調(diào)節(jié)功能，從而發(fā)生肌肉痙攣性收縮第七十二頁，共98頁。臨床意義通過創(chuàng)傷感染，局部組織氧化還原電勢(shì)降低。細(xì)菌繁殖且產(chǎn)生毒素。細(xì)菌不進(jìn)入血流，引起嚴(yán)重毒血癥，主要癥狀為骨骼肌痙攣。出現(xiàn)張口困難，牙關(guān)緊閉呈苦笑面容。肌肉發(fā)生強(qiáng)直性痙攣，呈角弓反張，呼吸困難，可因窒息死亡第七十三頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)檢查根據(jù)病史及典型臨床癥狀即可診斷，一般不作細(xì)菌學(xué)檢查直接涂片：從病灶處取膿汁或壞死組織，直接涂片革蘭染色，鏡檢觀察菌體見一端有圓形芽胞呈鼓槌狀的桿菌的形態(tài)，可初步報(bào)告結(jié)果。厭氧培養(yǎng)：本菌較易分離。第七十四頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)檢查動(dòng)物實(shí)驗(yàn)毒力實(shí)驗(yàn)：可確定毒素的有無及其性質(zhì)。小白鼠尾根部皮下或肌肉注射0.1-0.25ml培養(yǎng)濾液。陽性者，于注射后12-24h，出現(xiàn)尾部僵直豎起、后腿強(qiáng)直或全身肌肉痙攣等癥狀，甚至死亡保護(hù)力試驗(yàn)：將0.5ml培養(yǎng)濾液混以l:10稀釋的等量破傷風(fēng)抗毒素，給小白鼠注射，如不發(fā)病，為陽性第七十五頁，共98頁。二、產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）生物學(xué)特性G+粗短大桿菌，約為1.0-1.5×3.0-5.0μm，兩端鈍圓，芽胞橢圓形，位于菌體中央或次極端，在無糖培養(yǎng)基中有利于形成芽胞。在機(jī)體內(nèi)可產(chǎn)生莢膜,無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)第七十六頁，共98頁。生物學(xué)特性非嚴(yán)格厭氧，繁殖迅速，培養(yǎng)2h后，在液體培養(yǎng)基深層即有明顯生長(zhǎng)；4-6h孵育后出現(xiàn)表面生長(zhǎng)。固體培養(yǎng)基上，經(jīng)24h培養(yǎng)，菌落直徑2-4mm，圓形凸起光滑、邊緣整齊、無遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象。在血平板上有溶血環(huán)，在蛋黃瓊脂甲板上，菌落周圍出現(xiàn)乳白色混濁圈雙層溶血環(huán)內(nèi)環(huán)完全溶血-θ毒素外環(huán)不完全溶血-α毒素第七十七頁，共98頁。生物學(xué)特性在庖肉培養(yǎng)基中產(chǎn)生氣體，在牛乳培養(yǎng)基能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時(shí)產(chǎn)生大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀，并將液面的凡土林層向上推擠，甚至沖開管口棉塞，氣勢(shì)兇猛，稱為“洶涌發(fā)酵”（stormyfermentation）第七十八頁，共98頁。生物學(xué)特性所有型菌株均能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖和蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣：不發(fā)酵甘露醇或水楊苷；液化明膠，產(chǎn)生H2S，不能消化已凝固的蛋白質(zhì)和血清，吲哚陰性。主要代謝產(chǎn)物為乙酸和丁酸，有時(shí)也形成丁醇第七十九頁，共98頁。臨床意義氣性壞疽的主要病原菌，可產(chǎn)生外毒素及多種侵襲性酶類，有12種外毒素，這些毒素和酶與組織溶解、壞死、產(chǎn)氣、水腫以及病變的迅速擴(kuò)散蔓延和全身中毒癥狀均有密切關(guān)系此外，有些菌株還能產(chǎn)生腸毒素和溶血毒素、腸毒素能改變腸壁通透性，促使體液滲入腸腔，引起腹瀉第八十頁，共98頁。外毒素α毒素為卵磷脂酶，能分解人和動(dòng)物細(xì)胞膜上磷脂和蛋白質(zhì)的復(fù)合物，破壞細(xì)胞膜，引起溶血、組織壞死和血管內(nèi)皮損傷，使血管通透性增高，造成水腫。還能促使血小板凝聚，導(dǎo)致血栓形成，局部組織缺血β毒素引起人類壞死性腸炎ε毒素有壞死和致死作用第八十一頁，共98頁。外毒素θ毒素有溶血和破壞白細(xì)胞作用，對(duì)心肌有毒性κ毒素(膠原酶)能分解肌肉和皮下的膠原組織，使組織溶解。μ毒素(透明質(zhì)酸酶)能分解細(xì)胞間質(zhì)中透明質(zhì)酸γ毒素(DNA酶)能使細(xì)胞核DNA解聚，降低壞死組織的粘稠度第八十二頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)檢查標(biāo)本采集：一般采取創(chuàng)傷深部的分泌物、穿刺物、壞死組織塊、血液、可疑食物

直接鏡檢：可見到G+粗大桿菌，并有雜菌，鏡下白細(xì)胞較少形態(tài)不規(guī)則，是其特點(diǎn)，對(duì)早期診斷具有—定意義。不一定見到莢膜和芽胞第八十三頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)檢查分離培養(yǎng)：本菌對(duì)低濃度氧有耐性，生長(zhǎng)迅速，故容易分離。在庖肉培養(yǎng)基中培養(yǎng)8-10h后，轉(zhuǎn)種于血平板。在厭氧環(huán)境培養(yǎng)18h，即可挑取菌落進(jìn)行鑒定。在組織中一般不成芽胞。故病理材料不需加熱處理，因?yàn)榧訜崽幚砟軞⑺婪敝丑w第八十四頁，共98頁。微生物學(xué)檢驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)檢查鑒定形態(tài)特征：缺少芽胞，有莢膜特征培養(yǎng)特征：菌落特征和糖發(fā)酵反應(yīng)，特別是“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象Nagler試驗(yàn)：卵磷脂酶具有抗原性，活性可被抗血清所抑制。測(cè)定時(shí)在乳糖卵黃牛乳瓊脂平板的半側(cè)涂以產(chǎn)氣莢膜梭菌與A型諾維梭菌混合抗毒素，爾后從未涂抗毒素的—側(cè)向涂抗毒素一側(cè)接種待測(cè)菌，厭氧培養(yǎng)18h后觀察，未涂抗毒素一側(cè)菌落周圍出現(xiàn)混濁的白環(huán)，而在涂抗毒素一側(cè)生長(zhǎng)的菌落無此現(xiàn)象，為Nagler試驗(yàn)陽性第八十五頁，共98頁。三、肉毒